丙二醛对离体草鱼肠道黏膜细胞的损伤作用

以丙二醛为实验材料,在草鱼Ctenopharyngodon idella肠道黏膜细胞培养液中加入不同浓度丙二醛,研究丙二醛不同剂量、不同作用时间下对肠道黏膜细胞生长、细胞形态结构及相关酶活性的变化。结果显示:添加(1.23—9.89)μmol/L丙二醛在3—9h时显著抑制了离体草鱼肠道黏膜细胞生长及存活率,以6h时抑制程度较为明显,导致贴壁细胞减少,细胞集落面积减小,其中添加4.94μmol/L丙二醛细胞胞浆内脂肪滴沉积,空泡变性,同时线粒体肿胀,核固缩;丙二醛对细胞分化成熟有抑制,且增加细胞器膜的通透性,导致胞浆酶漏出;6h时丙二醛处理组培养液中GSH-PX、T-AOC活力显著降低(P<0.05)。结果表明:添加(1.23—9.89)μmol/L丙二醛对草鱼肠道黏膜细胞产生了损伤,表现为抑制细胞生长,改变细胞形态、结构,导致膜结构破坏,且作用程度与添加浓度、作用时间呈正相关关系。研究认为丙二醛对草鱼肠道黏膜细胞具有显著性的损伤作用。

酵母培养物水溶物对丙二醛损伤的离体草鱼肠道黏膜细胞的保护作用

在培养液中加入不同浓度(4.94、9.89μmol/L)的丙二醛(MDA)及酵母培养物水溶物,观察酵母培养物水溶物不同浓度(50、100、200 mg/L)、不同作用时间(3、6、9、12 h)下MDA损伤的离体草鱼肠道黏膜细胞生长、形态及相关酶活力的变化,以研究酵母培养物水溶物对MDA损伤的离体草鱼肠道黏膜细胞的保护作用。结果表明:培养液中添加4.94或9.89μmol/L MDA均显著抑制了离体草鱼肠道黏膜细胞生长(P<0.05),致使贴壁细胞减少、细胞膜通透性增加,导致胞内酶漏出及细胞抗氧化酶活力降低。培养液中添加50、100、200 mg/L酵母培养物水溶物9 h后可显著地促进细胞生长及提高细胞总蛋白含量(P<0.05),改善细胞生长状态,其中以添加100 mg/L酵母培养物水溶物对4.94μmol/L MDA损伤细胞的保护效果较好,其细胞生长状态能达到正常组水平。培养液中添加50、100、200酵母培养物水溶物能一定程度地降低培养液中MDA浓度,同时能降低MDA导致的细胞内酶漏出,提高MDA损伤的细胞抗氧化能力。由结果可知,对于4.94、9.89μmol/L MDA对草鱼肠道黏膜细胞产生的损伤,培养液中添加50、100、200 mg/L酵母培养物水溶物12 h内对细胞均有保护作用,其中以添加100 mg/L酵母培养物水溶物对4.94μmol/L MDA损伤细胞的保护作用最佳,使细胞生长状态接近正常组水平。酵母培养物水溶物可能通过增强细胞抗氧化能力途径起到对草鱼离体肠道黏膜细胞的保护作用。

酵母培养物水溶物对离体草鱼肠道黏膜细胞生长及细胞膜完整性的影响

本试验以酵母培养物水溶物为试验材料,添加于离体草鱼肠道黏膜细胞培养液中,研究酵母培养物水溶物在不同浓度、不同作用时间下对细胞生长及细胞膜完整性的影响。采用单因子试验设计,设1个对照组及5个酵母培养物水溶物组（YC-1-5组）,各组均设96个重复,每个重复为1个培养孔。对照组的培养液中不添加酵母培养物水溶物,YC-1-5组的培养液中酵母培养物水溶物的浓度分别为10、25、50、100、200 mg/L。结果表明：培养液中添加50-200 mg/L酵母培养物水溶物对细胞形态无损伤,100-200 mg/L酵母培养物水溶物在添加后3 h时显著增强细胞活性（P〈0.05）,50 mg/L酵母培养物水溶物在添加后6 h时显著增强细胞活性（P〈0.05）。与对照组相比,3 h时各酵母培养物水溶物组培养液中乳酶脱氢酶（LDH）活力均没有显著变化（P〉0.05）,6 h时YC-4、YC-5组显著降低（P〈0.05）,9 h时YC-3、YC-4、YC-5组显著降低（P〈0.05）,12 h时YC-2、YC-3、YC-4、YC-5组显著降低（P〈0.05）。各时间点（3、6、9、12 h）各酵母培养物水溶物组培养液中谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）活力与对照组相比均没有显著变化（P〉0.05）,但在6-9 h时GPT活力均低于对照组。由此得出,培养液中添加10-200 mg/L酵母培养物水溶物能促进离体草鱼肠道黏膜细胞的生长,保护细胞膜的完整性,其发挥保护作用的适宜浓度为50-200 mg/L。

氧化豆油水溶物对离体草鱼肠道黏膜细胞的损伤作用

以氧化豆油水溶物为试验材料,在草鱼肠道黏膜细胞培养液中加入不同浓度氧化豆油水溶物,研究不同剂量氧化豆油水溶物在不同作用时间下对肠道黏膜细胞生长、细胞形态结构的影响。结果显示:添加111.06—888.48 g/L氧化豆油的水溶物作用6h显著降低细胞活性(P<0.05),细胞集落面积减小、细胞形态改变,其中在444.24 g/L氧化豆油的水溶物作用下培养细胞空泡变性,且脂肪滴沉积,线粒体肿胀。在222.12—888.48 g/L氧化豆油的水溶物作用下,3—9h内培养液中LDH活力显著增高(P<0.05);各时间点培养液中GSH-PX、SOD、T-AOC均有显著变化。结果表明,在培养液中添加111.06—888.48 g/L氧化豆油的水溶物作用12h内,对草鱼肠道黏膜细胞产生了损伤,表现为抑制细胞生长,改变细胞形态、结构,可能引起细胞膜脂质过氧化,导致膜结构破坏,且作用程度与添加浓度、作用时间相关。研究认为氧化豆油水溶物对草鱼肠道黏膜细胞具有显著性的损伤作用。

肠内营养合早期中药干预对胃大部切除大鼠肠道黏膜细胞更新状态的影响

目的探讨肠内营养合早期中药干预对胃大部切除大鼠肠道细胞更新状态指标(肠道黏膜细胞凋亡率)的影响及机制。方法将60只雄性SD大鼠建立胃大部切除模型,随机分成对照组(C),普通肠内营养组(EN组),肠内营养加四君子汤组(S-EN组)。从术后第1天起连续营养支持7 d,各组营养液的热量、含氮量均相同。观察术前1 d、术后1 d、3 d、7 d的肠道细胞更新状态指标(肠道黏膜细胞凋亡率)的变化。结果S-EN组术后3 d后肠道黏膜细胞凋亡率显著高于C组和EN组(P<0.05)。结论肠内营养合早期中药(四君子汤)干预可提高术后大鼠的营养状态和肠道细胞更新状态,明显改善肠黏膜屏障功能。

不同营养状态下大鼠口腔与肠道黏膜细胞凋亡率的关系研究

目的通过研究手术前后不同营养状态下大鼠口腔与肠道黏膜细胞凋亡率,探讨两者间的相关性。方法雄性SD大鼠(250±20g)60只,随机分为术前组、手术组并建立胃大部切除模型。用亚G1峰法检测大鼠口腔与肠道黏膜细胞凋亡率,方差分析和相关性分析手术前后不同营养状态下,口腔与肠道黏膜细胞凋亡率的相关性。结果术后可观察到口腔及肠道黏膜细胞凋亡率均有显著下降(P<0.05),均约在术后7d后凋亡率逐渐上升(P<0.05),这变化同我们测量的营养指标的变化是基本一致的。结果证明口腔及肠道黏膜细胞凋亡率具有显著相关性(P<0.05)。结论通过对口腔及肠道黏膜细胞凋亡率及传统的营养状况评价指标的观察,发现口腔及肠道黏膜细胞凋亡率均随着机体营养状况的变化而变化。口腔黏膜细胞凋亡率可以及时反映肠道黏膜凋亡状况并有可能成为监测甚至预测机体营养状况的评价指标。

池塘养殖条件下草鱼(Ctenopharyngodon idelluspond)肠道黏膜细胞紧密连接蛋白基因表达水平的研究

为了研究肠道损伤与肠道黏膜细胞TJ结构的关系,以池塘养殖条件下的草鱼为研究对象,在对肠道损伤进行外观形态、组织切片和血清指标评估的基础上,分别选取肠道健康和肠道损伤的草鱼,采用荧光定量PCR(RT-QPCR)方法,定量检测了构成肠道黏膜细胞紧密连接结构的9个蛋白基因的表达水平。结果显示:与肠道健康草鱼相比,养殖草鱼肠道损伤后,血清二胺氧化酶(DAO)活性显著增加,同时,肠道黏膜细胞中的跨膜蛋白基因Claudin-3、Claudin-12、Claudinb、Claudinc、Claudin-15a,外周膜蛋白基因ZO-3和闭锁蛋白基因Occludin的表达水平显著下调(p<0.05)。结果表明,草鱼肠道损伤会导致肠道黏膜细胞间TJ结构的损伤,从而导致肠道屏障通透性的显著增加。

黄芪注射液对脓毒症大鼠肠道黏膜上皮细胞的保护作用及其机制研究

[目的]研究黄芪注射液对脓毒症大鼠肠道黏膜上皮细胞的保护作用及其机制。[方法]Sprague-Dawley大鼠30只随机分为假手术组、脓毒症模型组、黄芪注射液干预组,每组10只。脓毒症模型采用盲肠结扎穿孔法构建,黄芪注射液干预组大鼠在术前15 min和术后6 h接受800 mg·kg-1黄芪注射液的干预。术后24 h取大鼠肠道黏膜组织-80℃冰冻保存。采用TUNEL法检测各组大鼠肠道黏膜上皮细胞的凋亡情况,实时荧光定量PCR(q PCR)和Western blot技术检测各组大鼠肠道黏膜组织的Bcl-2和Bax表达水平。[结果]假手术组、脓毒症模型组和黄芪注射液干预组的大鼠肠道黏膜上皮细胞凋亡指数分别为(5.2±0.3),(22.3±1.2)和(11.2±0.9)。脓毒症模型组的凋亡指数明显高于假手术组(P<0.05),黄芪注射液干预组的凋亡指数明显低于脓毒症模型组(P<0.05)。脓毒症模型组Bcl-2表达水平低于假手术组,Bax表达水平高于假手术组(P<0.05)。黄芪注射液干预组Bcl-2表达水平高于脓毒症模型组,Bax表达水平低于脓毒症模型组(P<0.05)。[结论]黄芪注射液可以通过维持Bcl-2/Bax平衡来抑制脓毒症引起的肠道黏膜上皮细胞凋亡。

不同教槽料对断奶仔猪肠道黏膜免疫相关基因表达的影响

为探讨不同教槽料对断奶仔猪肠道黏膜免疫相关基因表达的影响,选取90头21日龄体质量[(6.85±0.25)kg)]相近的杜洛克×长白×大约克断奶仔猪,随机分为3组。对照组(CON)饲喂基础饲粮,优质蛋白源组(HP)在基础饲粮中添加优质蛋白原料(基础饲粮中的豆粕蛋白原料用发酵酶解豆粕、酵母提取物和小麦水解蛋白粉代替),优质蛋白源+肠道保护包组(HPP)在基础原料中添加优质蛋白原料和肠道保护包(主要成分为复合酸化剂、植物精油、复合益生菌组合)。试验期14 d。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测仔猪饲喂不同教槽料后,十二指肠、空肠、回肠、结肠黏膜TNF-α、IL-1β、TGF-β、IL-10的基因表达量,回肠和结肠黏膜紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1、ZO-1的基因表达情况。结果显示,与CON组相比,仔猪断奶3 d时,HPP组十二指肠IL-1β及回肠IL-1β、Occludin、Claudin-1、ZO-1的基因表达量均显著升高(P<0.05);仔猪断奶7 d时,HP组和HPP组空肠、回肠TNF-α、IL-10的基因表达量升高(P<0.05),并且回肠Occludin、Claudin-1、ZO-1的基因表达量显著升高(P<0.05);仔猪断奶14 d时,HPP组空肠TNF-α、IL-1β、TGF-β、IL-10和回肠TGF-β的基因表达量显著升高(P<0.05)。可见,断奶仔猪饲喂新型教槽料能够上调肠道黏膜免疫因子相关基因的表达量,增强早期断奶仔猪回肠和结肠黏膜中紧密连接蛋白相关基因的表达量,降低断奶应激对仔猪肠道造成的损害。

内质网应激信号分子PERK在溃疡性结肠炎肠黏膜损伤中的研究进展

内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是研究溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)发病机制的主要热点,通过启动未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)来保护和修复肠道黏膜上皮细胞的损伤.内质网应激主要通过三种信号通路来介导炎性因子的分泌,其中蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)通路与UC发病关系最为密切.肠道黏膜上皮细胞(intestinal mucosa epithelial cells,IEC)具有发达的内质网结构,是代谢最为旺盛的细胞群之一.持续严重的ERS促使细胞损伤、死亡,导致肠黏膜上皮细胞激活核因子-kB(nuclear factor-kB,NF-kB),引起多种炎性因子的分泌,促进炎症病变的发生.中药治疗UC疗效显著,有其独特优势,可通过信号通路抑制NF-kB炎性因子分泌,保护肠道屏障功能.

一种改良小鼠肠道黏膜固有层淋巴细胞分离方法的建立

目的:探讨并改良肠道黏膜固有层淋巴细胞(LPL)分离方法。方法:参照Sanos等方法进行改进。用分离液和消化液处理肠组织片段后,通过100μm的尼龙滤网过滤,行零加减速密度梯度离心,观察分析细胞获得率、细胞活率和细胞纯度。结果:每只小鼠肠道LPL的获得量为(5.5±1.7)×106个,细胞活力>92%;细胞平均直径为(7.5±0.8)μm,细胞平均圆度为0.93±0.03,细胞结团率为(0.4±0.2)%;流式细胞仪检测细胞活率为(94.5±3.2)%,CD4+T细胞的含量为(72.5±5.2)%。结论:与国内外其他分离方法相比较,该方法简化、高效、稳定,且获取的LPL的细胞数量多、活率高、纯度高,可为肠道黏膜免疫的研究提供可靠的方法,值得推广。