黑灵芝多糖对脂多糖诱导的IEC-6肠上皮细胞损伤的保护作用

目的:探究黑灵芝多糖(PSG-1)对脂多糖(LPS)诱导的IEC-6肠上皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用LPS构建肠上皮细胞IEC-6损伤模型,研究PSG-1对IEC-6细胞的干预效果。采用细胞计数盒(cck-8)法测定PSG-1干预对细胞活力的影响。运用western-blot技术探究细胞中肠道紧密连接蛋白和环氧化酶cox-2表达的变化,基于转录组测序技术分析PSG-1潜在的保护机制并对其进行验证。结果:PSG-1干预可以显著提升LPS造成的细胞活力降低和肠道紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1和Occludin的表达,而且PSG-1对LPS引起的cox-2异常高表达具有抑制效果。转录组测序及划痕试验和蛋白免疫印迹试验结果表明:PSG-1能显著增强细胞的迁移能力并抑制促凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结论:PSG-1对LPS诱导的肠上皮细胞IEC-6具有显著的保护作用,细胞迁移和凋亡可能是PSG-1发挥其保护效应的关键途径。

四君子汤总多糖及各单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞增殖的影响

目的研究四君子汤总多糖及各单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞增殖的影响。方法以IEC-6细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,观察四君子汤总多糖及各单味药多糖对该细胞增殖的影响。结果各多糖的作用存在差异,茯苓多糖具有明显的促进细胞生长的作用,甘草多糖与党参多糖作用不显著,而白术多糖则具有明显的抑制细胞生长的作用。当采用每两味多糖组合时,结果表明所有两组多糖作用强度远不如四君子汤总多糖。结论四君子汤总多糖的作用可能是各种单味药多糖综合作用的结果,也提示中药复方用药具有一定的合理性。

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6迁移的影响

目的：观察四君子汤总多糖（PPS）在黏膜损伤后对小肠上皮细胞修复的影响。方法：采用大鼠小肠上皮细胞株IEC-6制成细胞迁移模型，观察四君子汤PPS在造模后0h、8h及24h对细胞迁移面积的影响。结果：四君子汤在细胞迁移的8h及24h，对IEC-6的细胞迁移均有促进作用。而其最佳剂量集中于100～400μg／ml范围内。结论：四君子汤可促进胃肠道黏膜损伤的修复，其机制与促进细胞迁移有关。

肿瘤坏死因子-α对肠黏膜上皮细胞谷氨酰胺载体功能及其表达的影响

目的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是感染中最重要的调节因子,谷氨酰胺需经过其载体转运至细胞内才能被利用。文中研究TNF-α对肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC)-6细胞膜谷氨酰胺载体功能、ASCT2mRNA及蛋白表达的可能影响,揭示TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的影响机制。方法体外培养IEC-6,分为对照组(不与TNF-α共孵育)和实验组(与TNF-α共孵育):实验组与不同剂量的TNF-α(2、5、8、10ng/ml)共孵育2h后,测定细胞[3H]-L-谷氨酰胺摄取率;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、5、8、10h)后,测定ASCT2载体mRNA水平;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、6h)后,检测载体ASCT2蛋白表达水平。结果不同TNF-α剂量孵育的实验组[3H]-L-谷氨酰胺摄取率显著低于对照组(P<0.01),实验组之间差异无显著性意义(P>0.05);孵育2h的实验组ASCT2载体mRNA水平显著高于对照组(P<0.01),时间延长后逐渐下降,10h则与对照组差异无显著性意义(P>0.05);不同时段实验组载体ASCT2蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01),实验组间差异无显著性意义(P>0.05)。结论TNF-α抑制IEC-6细胞膜谷氨酰胺载体的摄取功能,抑制ASCT2蛋白表达,但不抑制IEC-6细胞ASCT2载体mRNA的表达。TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的抑制可能发生在载体蛋白的翻译或以后水平。

角质细胞生长因子对肠上皮细胞辐射损伤的防护作用

目的 探讨角质细胞生长因子 (KGF)的辐射防护作用与机制 ,为应用KGF防护肠道辐射损伤提供实验依据。方法 应用正常及不同剂量γ射线损伤的肠上皮细胞 (IEC 6) ,通过在培养体系中加入不同剂量的KGF后检测细胞增殖活性的变化以及凋亡细胞百分率 ,作为KGF辐射防护效应和细胞辐射敏感性变化的指标。结果 正常培养的IEC 6细胞 ,KGF呈剂量依赖型促细胞增殖作用 ;10Gy照射后KGF促细胞增殖作用显著减弱。KGF预处理能显著降低IEC 6细胞辐射敏感性 ,其IP50 ( 50 %增殖抑制照射量 )从对照( 15.3± 0 .6)Gy降至 ( 12 .2± 0 .4 )Gy。结论 KGF具有促肠上皮细胞增殖作用 ,其辐射防护作用表现为降低细胞辐射敏感性 ,抑制辐射诱导的细胞凋亡可能是其作用机制之一。

IEC-6细胞的培养鉴定和生长特性研究

大鼠肠上皮细胞株IEC 6具有正常的未分化的肠上皮隐窝细胞的特征 ,在营养学研究中具有重要应用价值。本研究采用相差显微镜、透射电镜、扫描电镜等技术观察细胞形态结构 ,采用MTT法研究血清和血清替代品对ICE 6细胞生长的影响。结果表明 :引进的IEC 6细胞具有典型的正常肠上皮隐窝细胞的形态特征、超微结构和生长特性 ,表明的细胞株未发生转化或变异。不同的血清和血清替代品对细胞增殖的效应有差异 ,2 %的透析胎牛血清能维持细胞良好的增殖状态 ,可用于研究正常培养条件下外源核苷酸对肠上皮细胞的作用。

亮菌多糖对LPS诱导的肠上皮细胞炎性损伤的保护作用及机制探讨

目的观察在脂多糖(LPS)诱导的IEC-6肠上皮细胞损伤的情况下,亮菌多糖(ATPS)对细胞活性、闭合素(Occludin)、细胞紧密连接蛋白1(ZO-1)的影响,并探讨ATPS对肠黏膜屏障损伤的保护机制。方法利用LPS构建的IEC-6肠上皮细胞体外损伤模型,将细胞随机分为对照组、LPS组、LPS+ATPS组、LPS+Matrine组(阳性对照),使用普通显微镜和MTT法观察细胞的活性;免疫荧光和流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Western blot检测膜蛋白ZO-1和跨膜蛋白Occludin的表达水平。同时Western blot检测与介导细胞凋亡密切相关的内质网应激(ERS)通路上磷酸化蛋白激酶R样内质网调节激酶(p-PERK)、磷酸化真核细胞翻译起始因子(p-eIF2α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网应激相关蛋白(CHOP)以及调节肠黏膜损伤重要分子β-抑制蛋白1(Arrb1)的表达水平。结果与对照组、LPS组比较,随着ATPS的浓度增加,LPS+ATPS组中细胞的活性越多且免疫荧光和流式检测也表明细胞的凋亡率减少;Occludin、ZO-1的表达水平增多,明显高于LPS组;与LPS组相比,LPS+ATPS组中p-PERK、p-eIF2α、GRP78、CHOP及Arrb1蛋白的水平降低。结论ATPS可通过抑制Occludin、ZO-1的破坏来保护LPS介导的肠上皮细胞炎性损伤,其机制可能与介导细胞凋亡的内质网应激蛋白以及调节肠黏膜损伤的重要分子Arrb1有关。

放射损伤小肠上皮内淋巴细胞的变化及其对肠上皮细胞影响的实验研究

放射损伤小肠上皮内淋巴细胞的变化及其对肠上皮细胞影响的实验研究Ｅｆｅｃｔｓｏｆｉｏｎｉｚｉｎｇｒａｄｉａｔｉｏｎｏｎｍｕｒｉｎｅｓｍａｌｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓａｎｄｉｔｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｉｎ...

甘草次酸对SIRT6介导的小鼠肠黏膜更新的影响

目的:探讨沉默信息调节因子蛋白-6(SIRT6)介导的肠黏膜更新变化及甘草次酸对其的影响。方法:采用SIRT6抑制剂小鼠模型,HE染色观察小肠黏膜病理变化;Q-PCR和Western-blot检测小肠组织SIRT6、小肠上皮细胞标志物(Ck20、Lyso和Synap)及凋亡蛋白(Caspase3)的基因、蛋白变化。结果:与正常对照组相比,模型对照组小鼠肠绒毛及隐窝高度显著减少(P<0.01);Ck20、Caspase3的基因及蛋白表达显著上调(P<0.01),Synap、Lyso的基因及蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组相比,甘草次酸10、20 mg/kg可显著增加小肠绒毛和隐窝高度(P<0.01),甘草次酸20 mg/kg显著上调小肠SIRT6基因、蛋白表达(P<0.01),并逆转上述肠黏膜细胞标记物的基因及蛋白变化(P<0.05或P<0.01)。结论:SIRT6抑制可导致肠黏膜形态受损,甘草次酸可促进肠黏膜修复,其机制与上调SIRT6表达并促进肠黏膜细胞更新有关。

应用RNA干扰技术检测ASCT2功能

目的谷氨酰胺(glutamine,GLN)是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内,其中载体ASCT2起重要作用,文中将应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6细胞膜GLN载体ASCT2的转运功能。方法体外培养IEC-6,RNAi慢病毒颗粒进行细胞感染,3 d后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达情况,5 d后采用RT-PCR检测载体ASCT2的mRNA表达,7 d后采用Western blot检测其蛋白表达,同时测定[3 H]-L-GLN摄取率。结果病毒转染细胞中均有GFP表达,载体ASCT2的mRNA表达下降60%,蛋白表达几近消失,[3H]-L-GLN摄取率下降15%。结论通过慢病毒载体介导的RNAi这一方便有效的方法,证实了ASCT2载体在整个细胞的GLN转运中起15%以上的作用。

益气养阴方治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变47例

目的:观察益气养阴方治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变的临床疗效及其对血清炎症因子的影响。方法:将94例慢性萎缩性胃炎癌前病变患者采用随机数字表法随机分为两组,治疗组47例给予益气养阴方(甘草、莪术、佛手柑、白术、陈皮、麦冬、白芍、党参、北沙参、炒谷芽)口服,对照组47例给予胃复春片口服。两组均以3个月为1个疗程,治疗1个疗程后判定疗效。结果:治疗组痊愈10例,显效24例,有效7例,无效6例,有效率为87.23%;对照组痊愈7例,显效13例,有效9例,无效18例,有效率为61.70%。两组对比,差别有统计学意义(P<0.01)。治疗后,两组病理状况积分均较治疗前降低(P<0.01),且治疗组低于对照组(P<0.01);两组血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著低于治疗前(P<0.01),且治疗组低于对照组(P<0.01)。结论:益气养阴方治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变有较好疗效,能够缓解患者胃部组织病理性改变,降低患者血清炎症因子表达水平,改善病情。

藤黄炮制品对大鼠肠道组织病理学研究

目的:观察藤黄各制剂单次大剂量ig给药后大鼠消化系统病变情况,并比较藤黄炮制前后对大鼠肠上皮细胞株IEC-6毒性差异,探讨藤黄炮制减毒机制。方法:单次ig给予藤黄生品(200 mg.kg-1)、清水制藤黄(200 mg.kg-1)和藤黄酸(50 mg.kg-1),观察给药后大鼠的活动情况,于24 h后处死并采集大鼠心、肝、肾、食管、胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠等主要脏器,观察大鼠口服给药后消化系统病变情况。以大鼠肠上皮细胞株IEC-6为研究对象,采用MTT法检测藤黄炮制前后对IEC-6细胞增殖的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态。结果:病理切片结果显示,给药后大鼠的肝脏、肾脏、心脏、胃和食道均未见明显的毒性反应;但十二指肠、空肠有轻度至重度的毒性作用,表现为肠绒毛水肿。3种藤黄制剂均会引起给药大鼠肠道的毒性作用,生品藤黄所致的十二指肠和空肠水肿程度最严重,其次是清水制藤黄和藤黄酸。细胞的毒性结果显示,与空白组相比,藤黄生品及炮制品均可明显降低IEC-6细胞的活性(P<0.01)与形态,且呈一定的剂量相关性;与藤黄生品组相比,藤黄3种炮制品组对IEC-6细胞的增殖抑制作用(P<0.01)和形态变差的趋势均显著性降低。结论:藤黄单次大剂量ig给药后大鼠的病理变化及IEC-6细胞的毒性作用结果表明,藤黄经炮制后毒性显著降低。