应用小鼠胚胎肢芽培养方法研究重铬酸钾的发育毒性

采用小鼠胚胎前肢芽培养方法研究重铬酸钾对小鼠的发育毒性。结果表明:重铬酸钾浓度在2 .0mg .L- 1 以上时,前肢芽器官的发育和分化受到影响,并且随着重铬酸钾浓度的增加,肢体中各软骨的发育分化越差,Neubert 评分得分越少,呈剂量- 效应关系。

应用小鼠胚胎肢芽培养方法评价氟的致畸性及其对肢芽软骨细胞胶原合成的影响

目的应用小鼠胚胎肢芽培养评价氟化物的致畸性并探讨其发生机理。方法选用妊娠第12天龄小鼠胚胎前肢芽在BGJb培养基进行6天连续培养。NaF用双蒸水配成所需浓度,肢芽培养时用针头滤器过滤除菌,加入培养基。本实验共设7个组,即空白对照组,5个染毒组,F浓度分别为:5.0、10.0、20.0、30.0、40.0μg/ml,另设一组阳性对照。剂量用培养基中氟离子的终浓度表示。阳性对照物用VitA。观察软骨原基的发育和分化,用Neubert评分系统给予评分。应用[3H]-脯氨酸标记蛋白进行胶原含量的测定。结果随着氟浓度增高,肢芽各种软骨发育分化越差,评分越低,呈一定的剂量～效应关系。氟在20μg/ml以上时显示了致畸性,软骨畸形表现为缺失和形态改变。同时各染毒组放射计数与对照比较呈现出显著性差异(P<0.05,P<0.01),表明氟抑制了肢芽细胞胶原蛋白的合成。结论氟能够抑制胚胎肢芽胶原蛋白合成和软骨细胞分化发育,是潜在的致畸物。

苯对体外培养小鼠肢芽软骨发育的毒性研究

目的研究苯对小鼠胚胎肢芽发育和分化的影响,探讨苯的发育毒性。方法应用体外培养方法,对12天孕龄小鼠胚胎前肢芽进行培养,观察不同浓度的苯对肢芽骨发育和分化的影响。结果培养基中苯浓度达到75μmol/L以上时,前肢芽各软骨的发育和分化受到抑制,并且随着苯浓度的增加,肢体中各软骨的发育分化越差,Neubert评分越少,呈剂量-效应关系。结论苯为小鼠胚胎发育毒性物质,可抑制小鼠胚胎肢芽发育和分化。

同型半胱氨酸对大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

目的 进一步研究同型半胱氨酸(HCY)的致畸性及作用机制。方法 应用大鼠胚胎胚芽细胞微团培养法了解HCY对胚胎胚芽细胞增殖和分化的影响。结果 随着剂量的增加,HCY表现了对胚胎肢芽细胞的促进和抑制双相作用。半数抑制分化浓度(IC_(50))是5.0mmol/L,当加入S9时,IC_(50)减至3.5mmol/L;半数抑制增殖浓度是9.5mol/L,当加入S9时,IC_(50)为5.8mmol/L。结论 HCY对胚胎细胞分化的影响更为显著,对大鼠致畸作用不明显。

体外动物器官培养模型及其在外源性化学物发育毒性研究中的应用

器官培养(organ culture)是指应用显微解剖技术从动物体内分离出器官原基或部分器官组织,在可能模拟体内(in vivo)的生理条件下,在体外(in vitro)进行培养,使其生存、生长发育、增殖和分化,并保持其有正常的结构与功能,以便在可控条件下进行研究的一种方法。现已成功地分离并用于体外培养的器官有肢芽、腭棚、骨、肝、肺、牙蕾、肾、胰、心脏、晶状体、性器官。

生长分化因子-5影响肢芽细胞分化的机制

目的研究生长分化因子-5(growthdifferentiatifoanctor-,5GDF-5)对肢芽细胞分化的影响机制及在骨形成过程中的作用机制。方法取妊娠第12d胎鼠肢芽,行肢芽细胞微团培养,以不同浓度(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、120ng/ml)重组鼠GDF-5,干预培养中的肢芽细胞。于细胞培养第1d、3d,用扫描电镜观察不同浓度GDF-5对肢芽细胞生长与分化的影响。于细胞培养第3d,采用免疫组织化学和实时定量PCR等方法观察GDF-5对肢芽细胞核结合转录因子(Cbfa1)与Ⅹ型胶原蛋白表达的影响。结果在细胞培养第1d,扫描电镜观察结果显示,GDF-5可使肢芽细胞连接更为紧密,高浓度GDF-5组有成熟软骨基质和软骨结节形成,低浓度组也有软骨结节形成,该效应与GDF-5浓度呈正相关。在细胞培养第3d,免疫组织化学检测结果显示,Ⅹ型胶原蛋白表达以120ng/ml浓度组最为广泛和强烈,0ng/ml浓度组表达最弱,其表达趋势接近于Cbfa1的表达,表明GDF-5有促进肢芽细胞向成熟软骨方向分化的作用。实时定量PCR结果显示,GDF-5在mRNA水平同样促进Cbfa1表达,其促进作用呈剂量依赖效应。结论GDF-5通过上调Cbfa1和Ⅹ型胶原蛋白表达的途径促进肢芽细胞向软骨分化和促进骨形成。