癌旁组织肥大细胞免疫抑制表型对抗酸药治疗史高危胃癌患者的早期诊断价值分析

目的分析癌旁组织肥大细胞免疫抑制表型对抗酸药治疗史高危胃癌患者的早期诊断价值。方法选取行手术切除的101例胃癌患者的组织标本,按照是否有抗酸药治疗史分为无抗酸药治疗史组和有抗酸药治疗史组。腹腔镜手术前准备与常规开腹手术一致,首先采用气管插管进行全身麻醉,由肿瘤部位的不同行全胃切除术、远端胃大部切除术。结果免疫组化结果显示,胃癌组织和对应癌旁组织中均存在CD80、CD86以及HLA-DR表达,CD80、CD86以及HLA-DR在胃癌组织中均表达于细胞膜,CD80在胃癌组织中阳性表达率为53.47%(54/101),在癌旁组织中阳性表达率为28.71%(29/101),差异有统计学意义(χ^(2)=12.782,P<0.05);CD86在胃癌组织中阳性表达率为82.18%(83/101),在癌旁组织中阳性表达率为76.24%(77/101),差异无统计学意义(χ^(2)=1.082,P>0.05)。Western Blot法显示,无抗酸药治疗史组CD80蛋白表达水平明显高于有抗酸药治疗史组(P<0.05),CD86蛋白表达水平与有抗酸药治疗史组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤分级G 3级患者胃癌组织中CD80表达水平明显高于肿瘤分级G 1、G 2级患者(P<0.05),有肌层浸润和肿瘤远处转移患者胃癌组织中CD80表达明显高于无肌层浸润和肿瘤远处转移患者(P<0.05),不同性别、年龄、TNM分期、肿瘤分化患者CD80表达比较,差异无统计学意义(P>0.05),不同性别、年龄、TNM分期、肿瘤分级、肿瘤分化、肌层浸润以及肿瘤远处转移患者CD86表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。癌旁组织CD80检测对抗酸药治疗史高危患者胃癌早期诊断结果与病理诊断结果比较显示,CD80诊断结果的灵敏度为86%,特异度为72%,假阳性率为28%,假阴性率为14%,约登指数为0.58。癌旁组织CD86检测对抗酸药治疗史高危患者胃癌早期诊断结果与病理诊断结果比较显示,CD86诊断结果的灵敏度为82%,特异度为64%,假阳性率为36%,假阴性率为18%,约登指数为0.46。结论癌旁组织CD80和CD86检测对抗酸药治疗史高危患者胃癌早期诊断均具有较好的临床价值,而CD80比CD86筛检价值更高。癌旁组织肥大细胞免疫抑制表型检测提高抗酸药治疗史高危患者胃癌早期诊断灵敏度临床可行,有助于胃癌的早期临床筛检。

低剂量免疫抑制剂对肾移植受者淋巴细胞表型的影响

目的 :探讨肾移植长期低剂量免疫抑制维持用药受者的免疫学特征。 方法 :采用多种单克隆抗体 ,以流式细胞仪为工具 ,对存活 3年以上 ,长期低剂量免疫抑制维持用药受者、常规剂量维持用药受者和慢性移植肾失功受者的外周血淋巴细胞表型进行检测 ,分析细胞表型与临床用药量和移植效果的关系。 结果 :低剂量受者CD95、NK及HLA DR阳性细胞数目与正常人接近 ,而在常规剂量组和移植肾失功能组中 ,CD95明显升高 ,NK细胞明显减少 (P <0 0 5 )。 结论 :CD95、NK及HLA DR水平有可能用于评价长期移植受者的免疫状态 。

长期低剂量免疫抑制对肾移植受者淋巴细胞表型的影响

目的：探讨肾移植受者长期低剂量免疫抑制维持用药的免疫学基础。方法：采用多种单克隆抗体,以流式细胞仪为工具，对28例长期低剂量免疫抑制维持用药的肾移植受者外周血淋巴细胞表型进行检测，分析细胞表型与临床用药和移植效果的关系，并与常规剂量用药组和慢性移植肾失功能组比较。结果：低剂量组CD 95、NK及HLA-DR阳性细胞数目与正常人接近，而在常规剂量组和移植肾失功能组中，CD 95明显升高，NK细胞明显减少。结论：CD 95、NK及HLA-DR水平可用于评价长期肾移植受者的免疫状态，并有可能作为调整免疫抑制剂用量的参考指标。

滑膜间充质干细胞分离培养、免疫表型鉴定及在混合淋巴反应体系中的抑制效应

背景:滑膜组织中可分离出具有多向分化潜能干细胞特性的细胞。目的:探索滑膜间充质干细胞体外分离、培养的可行性、免疫表型的鉴定及对混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞增殖的影响,评价其免疫学特性。方法:关节镜下获取10例半月板损伤患者的膝关节滑膜组织,胶原酶消化获得有核细胞。挑选单细胞克隆,筛选获得滑膜间充质干细胞。检测其增殖能力、细胞活力,流式检测其细胞免疫表型,采用人双向混合淋巴细胞反应体系及植物血凝素刺激的淋巴细胞增殖反应体系,根据滑膜间充质干细胞与外周血单个核细胞的不同比例加入丝裂霉素处理滑膜间充质干细胞。MTT法检测并计算其抑制率。结果与结论:10组滑膜间充质干细胞系增殖能力和细胞活力差异无显著性意义(P>0.05)。10组细胞系免疫表型:CD44、CD90、CD105呈阳性,CD14、CD34、CD45和HLA-DR呈阴性。滑膜间充质干细胞抑制混合淋巴细胞反应体系中及植物血凝素刺激的淋巴细胞增殖反应体系中淋巴细胞的增殖、抑制率与加入的滑膜间充质干细胞数量成正比。提示关节滑膜组织可以分离、培养获得滑膜间充质干细胞,其具有间充质干细胞特异性表型,且滑膜间充质干细胞具有免疫调节作用。

雷那度胺对骨髓间充质干细胞生物学特性及免疫抑制功能的影响

目的探讨雷那度胺对骨髓间充质干细胞(MSCs)生物学功能和免疫抑制功能的影响。方法将雷那度胺(10μmol/L)加入MSCs中培养,收集细胞检测雷那度胺处理前后MSCs的增殖能力、免疫表型及其对T细胞增殖抑制作用的变化。CCK-8法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测MSCs的增殖周期、免疫表型及其对CD3+T细胞的增殖抑制能力。结果雷那度胺干预不影响MSCs的生长速度、增殖周期和免疫抑制功能;与干预前比较,雷那度胺干预后的MSCs免疫标记有所不同:CD29、CD73的平均荧光强度增高,CD44的平均荧光强度减弱。结论雷那度胺在体外实验中能够影响MSCs表面分子的表达,这可能有助于其在不影响MSCs的生长、增殖和免疫抑制功能的情况下,有效发挥抗肿瘤作用。

一种鉴别肥大细胞表型的复合染色法

运用ABC-爱先蓝-PAS复合染色法,分别对大鼠肝,胃、肠中不同表型肥大细胞即结缔组织肥大细胞(CTMC)和粘膜肥大细胞(MMC)进行鉴别染色实验。结果表明:肝汇管区MC呈棕褐色;胃粘膜上皮及粘膜下结缔组织内MC分别被染成蓝色和棕褐色;肠粘膜固有层MC呈蓝色.通过不同颜色反应从而确定其MC表型。本实验还通过对染色顺序。固定液选择等的多次摸索。取得了较好的染色效果,与其它检测方法的结果相一致,但试剂来源方便,操作简易。一般实验室即可进行。

肥大细胞增生、表型分化及凋亡研究进展

介绍肥大细胞生物学方面的一些进展。肥大细胞增生症至少有两种病理发生机制,一种为W位点基因突变,另一种为干细胞生长因子的反应性增高。肥大细胞的表型主要受局部微环境中的细胞因子调节,干细胞生长因子可阻止白介素-3撤退后引起的凋亡。通过研究肥大细胞凋亡,可能为治疗肥大细胞增生症及一些炎症性疾病提供新的治疗措施。

PD-1／PD-L1在脓毒症免疫抑制中的作用研究进展

脓毒症最新定义为机体对感染的异常反应而导致危及生命的器官功能障碍。近年来，人们对脓毒症免疫机制的研究越来越深入，脓毒症免疫表型经历由传统的全身炎症反应到抗炎反应综合征，再到混合表型假说。目前认为，脓毒症病理生理机制为病原体进入机体到免疫系统恢复稳态的过程。脓毒症的炎症反应不再是单纯的炎症因子风暴，而是表现为复杂的炎症反应。其中，免疫抑制为脓毒症晚期主要表现，是导致脓毒症患者出现反复感染的主要原因，PD-1／PD—L1在脓毒症免疫抑制中起到尤为重要的作用。本为就近年来有关PD-1／PD—L1在脓毒症免疫抑制中的作用做简要综述。

新的免疫抑制剂——匹美克莫司

匹美克莫司是一种新的免疫抑制剂 ,它与细胞浆内免疫亲和蛋白与macrophilin结合后抑制钙调磷酸酶的活性。还能抑制T细胞活化和肥大细胞释放细胞因子 ,可有效治疗炎症性皮肤病。本文重点介绍了匹美克莫司 。

雷公藤单体TZ93对人外周血单个核细胞表型的影响

研究雷公藤治疗系统性红斑狼疮的作用机制。以激活的正常人外周血单个核细胞（PBMC）为细胞模型，应用荧光激活细胞分类仪（FACS）分析雷公藤单体TZ93对PBMC细胞表型的影响。10名正常女性的PBMC分成3组：Ⅰ组PBMC，Ⅱ组PBMC＋PHA，Ⅲ组PBMC＋PHA＋TZ93，分别加入鼠抗人CD8、CD4、CD25、NK抗体。结果：FACS显示TZ93能显著抑制激活的PBMC中CD4＋、CD8＋、CD25＋的表达及NK活性。结论：TZ93能明显抑制PBMC表型的表达，是一种有效的细胞免疫抑制剂。

鞘内泵入吗啡对炎性疼痛大鼠T淋巴细胞亚群及NK细胞表型的影响

目的:观察鞘内泵入不同剂量的吗啡对福尔马林炎性疼痛大鼠免疫功能的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、假手术组(F组)和吗啡组(M组),其中M组分为10μg.h-1(M1)、5μg.h-1(M2)、2.5μg.h-1(M3)三种不同剂量组,采用改良Yaksh法进行鞘内置管,Alzet泵持续泵入吗啡或生理盐水1天后,构建福尔马林炎性疼痛模型,根据疼痛加权评分(PIS)评价吗啡镇痛效应,持续泵入7天后分离脾脏单个核细胞进行培养,流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞亚群和NK细胞表型变化。结果:(1)与NS组比较,M1、M2、M3组在福尔马林炎性疼痛第一时相和第二时相的PIS有显著性差异(P<0.01),随着泵入剂量的增加,PIS逐渐下降,但三者间比较无显著性差异(P>0.05);(2)与NS组比较,吗啡泵入7天后M1、M2、M3组可导致CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+数量及百分率降低,CD4+/CD8+降低,CD161+数量及百分率降低,有显著性差异(P<0.05)。结论:(1)鞘内泵入吗啡(2.5μg.h-1)对炎性疼痛大鼠具有明显的抗伤害作用;(2)鞘内泵入不同剂量吗啡(10μg.h-1、5μg.h-1、2.5μg.h-1)可剂量依赖性地抑制大鼠细胞免疫功能。

脂多糖持续刺激巨噬细胞的免疫学机制初探

目的:探讨巨噬细胞在脂多糖(LPS)的持续刺激下产生免疫抑制后的表型变化及对T细胞影响的分子机制。方法:蔗糖密度梯度离心法从全血中分离人外周血单个核细胞,结合磁珠细胞分选技术分选出单核细胞,体外诱导单核细胞分化为巨噬细胞,以未处理和IFN-γ处理为对照,对LPS处理48 h的巨噬细胞进行形态学观察、细胞表面分子(HLA-DR、CD14、CCR7、HLA-ABC及CD40)表达的检测和细胞因子(IL-10、IL-12、IL-6及TNF-α)分泌水平的检测。同时将LPS诱导的巨噬细胞与CD3+T细胞进行异体共培养,进一步观察巨噬细胞对T细胞增殖能力的影响。用实时荧光定量PCR验证Toll样受体4(TLR4)信号通路中的非My D88依赖型途径相关分子的表达水平。结果:LPS处理48 h的巨噬细胞,抗原递呈能力(HLA-DR)下降,免疫抑制细胞因子IL-10升高,把LPS诱导的巨噬细胞与异体T细胞共培养6 d,其促进CD8+T细胞增殖的能力较弱。实时荧光定量PCR结果显示LPS持续刺激下巨噬细胞的TRIF、IRF3和CIITA均呈下调状态。结论:持续LPS处理巨噬细胞48 h后,巨噬细胞呈现一种免疫抑制的状态,且其刺激CD8+T细胞增殖的能力减弱,这种状态与非My D88依赖型TLR4信号通路受损有关。

人天然CD4^+CD25^+调节性T细胞的体外扩增培养及鉴定

目的:建立有效的体外培养扩增人天然CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的体系,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能,为Treg应用于临床免疫治疗提供实验基础。方法:免疫磁珠分离(MACS)方法从人外周血单个核细胞中分离CD4+CD25+Treg,加入抗CD3/CD28包被磁珠刺激扩增;用台盼蓝染色法测定新鲜分选的和扩增的Treg的数量和活性,用流式细胞法检测新鲜的和扩增的Treg主要表型标志和纯度,用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)法检测扩增的Treg对羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)标记的自体和异体的CD4+CD25–T细胞增殖的抑制作用。结果:扩增3周后Treg数目约为新鲜分选细胞数的2 000倍(由5.23×105±1.52×105扩增至1.02×109±0.20×109),活性>97%。扩增3周后的Treg与新鲜分选细胞保持了相似的表型特征:CD4+CD25+FoxP3+三阳细胞约占(94.22±2.12)%,与新鲜分选细胞相似。扩增3周后的Treg对自体和异体的CD4+CD25–T细胞的增殖均有明显的抑制作用,抑制率随着效靶比浓度的增高而增高(P<0.01),而且其各浓度梯度对自体和异体CD4+CD25–T细胞的抑制率无明显差异(P>0.05)。结论:创建的分离和体外扩增人CD4+CD25+Treg的方法,可以大量扩增出高纯度且保留其免疫抑制功能的Treg,解决了Treg数目少的问题,有利于进一步的免疫研究和治疗。

实验性大鼠矽肺肥大细胞表型的观察

目的研究矽肺病灶内肥大细胞的表型。方法非暴露式气管内注入石英粉尘悬液复制大鼠矽肺模型。用甲苯胺蓝、阿新兰－沙红Ｏ染色及图像分析等方法，观察、分析矽肺组织中肥大细胞数量及表型的变化。结果（１）实验组染尘后１、４、１２、２４、３６、４８周单位面积肥大细胞数量增加，与对照组比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。（２）增生的肥大细胞主要是结缔组织表型肥大细胞。（３）肺实质中结缔组织型肥大细胞的增加与矽肺病程呈直线正相关。结论肥大细胞，特别是结缔组织型肥大细胞，在矽肺的发生发展中可能具有一定作用。

多变量模型预测再生障碍性贫血免疫抑制疗法疗效的初步研究

目的研究和评价外周血 T 细胞亚群、骨髓 T 淋巴细胞内 IFN-γ表达、Th_1/Th_2及 Tc_1/Tc_2值及 HLA-DRB1*1501表型在再生障碍性贫血(AA)患者免疫抑制疗法(IST)疗效预测中的价值;探讨建立临床和实验室指标多变量 AA 患者 IST 疗效预测模型的可行性。方法采用流式细胞术检测51例 AA 患者治疗前后外周血 T 细胞亚群,骨髓 T 细胞 IFN-γ、IL-4、并分析上述指标与疗效的关系。结果在所评价的指标中,CD8^+细胞内 IFN-γ的预测值最高,其灵敏度和特异度分别为94.3%和62.5%,阳性和阴性预测值分别为84.6%和83.3%,细胞内 IFN-γ阳性且 Tc_1/Tc_2<50能提高阳性预测值达92.3%。以中性粒细胞绝对计数(ANC)、骨髓 T 细胞内 IFN-γ染色、Tc_1/Tc_2分层和 HLA-DRB1*1501表型4个指标建立一个多变量模型,可用于诊断点的确定和个体患者治疗有效概率的预测。结论骨髓 CD8^+T 细胞内 IFN-γ敏感性和特异性最好,但对细胞内 IFN-γ阳性的原发性 AA 患者预测价值受限;CD8^+细胞内 IFN-γ阳性且 Tc_1/Tc_2<50预示患者有更多的机会通过 IST 治疗获得缓解;提示多变量 AA 患者 IST 疗效预测模型较单一预测指标更加适合临床,具有潜在的临床应用价值。

间充质干细胞的细胞表型及免疫学研究进展

间充质干细胞具有多分化潜能,参与构成骨髓的微环境,分泌大量细胞因子支持造血。最近的研究显示间充质干细胞免疫表型呈现动态的表达;同种异体细胞移植免疫排斥由于移植抗原差异而引起,但同种异体间充质干细胞却具有免疫抑制作用。综述了其可能的机制及作为组织工程种子细胞的间充质干细胞具有独特的生物学特性。

外周CD8αα＋TCRαβ＋调节性T细胞表型与功能初步研究

目的：研究外周CD8αα＋TCRαβ＋调节性T细胞的表型和免疫调节功能。方法采用流式细胞术分析CD8αα＋TCRαβ＋T细胞在 C57BL／6J小鼠体内的分布情况，并对其进行了相关表型分析，随后采用anti-CD3抗体刺激，流式微球分析细胞因子分泌格局；采用流式细胞术分选和CFSE标记方法，在体外研究CD8αα＋TCRαβ＋T细胞调节抑制功能，并采用细胞过继免疫实验观察CD8αα＋TCRαβ＋T细胞对实验性变态反应性脑脊髓炎（ EAE）小鼠模型的保护作用。结果在C57BL／6J小鼠肝脏、脾脏和外周血中存在一群 CD8αα＋TCRαβ＋T 细胞与CD8αβ＋TCRαβ＋T细胞相比具有CD25＋CD122highCD44highCD62LlowCD69highNK1．1＋DX5＋记忆效应表型，激活后能迅速产生IL-2，随后产生IFN-γ、TNF-α、IL-4和IL-17A以及微量IL-6和IL-10。体外功能实验表明CD8αα＋TCRαβ＋T细胞专一性抑制活化CD4＋T细胞的分化（P＜0．01），体内实验证明该群细胞具有抑制自身活化CD4＋T细胞介导的EAE，延缓疾病发展和保护的效果（ P＜0．01）。结论 CD8αα＋TCRαβ＋T细胞是体内一群固有的具有免疫调节功能的CD8＋调节性T细胞，有望成为细胞治疗新靶点用于自身免疫性等各类疾病。