肥大细胞对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响

探讨大鼠腹腔肥大细胞对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响。用大鼠腹腔肥大细胞上清液和氧化型低密度脂蛋白处理平滑肌细胞 4 8h后 ,逆转录聚合酶链反应检测平滑肌细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达 ,免疫细胞化学染色检测平滑肌细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果发现 ,与对照组相比 ,处理组平滑肌细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达降低 ,免疫细胞化学染色后 ,处理组细胞浆内棕色颗粒比对照组少且染色浅。结果提示 ,肥大细胞在体外抑制平滑肌细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达 ,并且能协同氧化型低密度脂蛋白对Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的抑制作用。

肥大细胞对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响

目的 检测大鼠腹腔肥大细胞 (mastcell,MC)对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响。方法 SD大鼠体重约 2 0 0g ,雌雄不限 ,供采集MC和原代培养平滑肌细胞 (smoothmusclecell,SMC)。采用梯度密度离心分离MC ,提取MC上清液(含MC释放的各种炎症介质 )。用MC上清液和氧化型低密度脂蛋白 (oxLDL)处理SMC ,实验分四组 :对照组SMC在 5mL含10 %小牛血清的DMEM中培养 4 8h ;oxLDL组SMC在 5mL含 10 %小牛血清的DMEM中 (含oxLDL ,终浓度为 10 0mg L)培养 4 8h ;MC上清液组SMC在 5mL含 10 %小牛血清的MC上清液 (由含 1× 10 6 个MC的细胞悬液提取 )中培养 4 8h ;MC上清液 +ox LDL组SMC在 5mL含 10 %小牛血清的MC上清液 (由含 1× 10 6 个MC的细胞悬液提取 )中 (含oxLDL ,终浓度为 10 0mg L)培养4 8h。采用油红O染色检测SMC泡沫化。RT PCR检测SMCⅠ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达 ,PCR引物序列Ⅰ型胶原为 5′ GACACTGAACCCTTTGTAATG 3′和 5′ GTGAAACTCCCGTCTGCT 3′ ,扩增片段长度为 399bp ;Ⅲ型胶原引物序列为 5′ AGCGGAGAATACTGGGTT 3′和 5′ TGTAATGTTCTGGGAGGC 3′ ,扩增片段长度为 2 88bp ;内参照采用β actin ,引物序列为 5′ GTGGGGCGCCCCAGGCACCA 3′和 5′ CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC 3′,扩?

生长激素对老年鼠皮肤胶原蛋白表达影响的实验研究

目的 :探索生长激素抗皮肤老化的作用机理和适用剂量。方法 :16～ 18月龄SD大白鼠 4 0只 ,随机分为 4组 ,每组 10只 ,雌雄各半。分别按rhGH 0 .0 4U/kg(1组 ) ,0 .0 8U/kg(2组 )和 0 .12U/kg(3组 )进行腹部皮下注射 ,每周 3次 ,连续用药 12周 ;对照组腹部皮下注射 0 .9%生理盐水。用药前及用药后 4周、6周、8周、10周、12周分别切取背部标记区皮肤组织 ,作组织学及免疫组化检查 ,观察皮肤改变和胶原增生情况 ,结果采用SPSS软件作统计学处理。结果 :0 .12U/kg用药组第 6周皮肤开始增厚 ,0 .0 8U/kg组第 8周皮肤开始增厚 ,两组 12周内无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,表现为皮肤和胶原厚度增加 ,Ⅰ型胶原表达增加 ,Ⅲ型胶原表达减少 ,但与 0 .0 4U/kg组和对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;0 .0 4U/kg组和对照组比较无显著差异(P >0 .0 5 )。结论 :一定剂量的生长激素可促进皮肤胶原蛋白 ,特别是Ⅰ型胶原蛋白的合成 ,使皮肤明显增厚 ,并部分逆转老化皮肤中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原白的比例 ,显示出一定的抗皮肤老化的作用 ,具有潜在的临床应用价值。

大网膜包肾对肾小球硬化大鼠肾皮质Ⅲ型胶原基因表达的影响

目的 探讨大网膜包肾术对单侧肾切除加两次注射阿霉素肾小球硬化大鼠肾皮质Ⅲ型胶原基因表达的作用。方法 将实验大鼠分为3组：①正常对照组、②肾小球硬化大鼠大网膜包肾术组、③肾小球硬化大鼠模型组，于第12周留取尿标本。肾组织病理学检查、用Northern blot杂交检测皮质Ⅲ型胶原基因表达mRNA表达。结果 大网膜包肾术组肾病理损伤减轻，肾皮质Ⅲ型胶原mRNA表达下调。结论 大网膜包肾术可延缓肾小球硬化。

Ⅰ型胶原修饰的多孔材料聚乙醇酸-乳酸共聚物对兔骨髓间充质干细胞粘附和增殖及成骨细胞基因表达的影响

目的 探讨Ⅰ型胶原修饰多孔高分子材料聚乙醇酸 乳酸共聚物 (PLGA)对骨髓间充质干细胞 (MSC)粘附、增殖的影响及成骨细胞基因表达情况。方法 以密度梯度离心法获得成年兔骨髓间充质干细胞 ,在含 10 %小牛血清的RPMI 16 4 0为培养基条件下 ,以一定初始浓度分别接种于大小约为 0 3cm× 1 2cm× 2 0cm立体材料PLGA。其中 ,预先包被Ⅰ型胶原的PLGA作为实验组 ,未经Ⅰ型胶原修饰作为阴性对照组。分别于接种后 2、4、6和 8h收获细胞 ,通过检测 [3 H] 胸腺嘧啶核苷 ([3 H] TdR)的掺入率 ,反映细胞的粘附情况 ;检测细胞接种后 7、14、2 1d的 [3 H] TdR掺入率 ,了解细胞的增殖速率。应用RT PCR法检测细胞骨钙素 (OCN)、碱性磷酸酶 (ALP)、骨桥蛋白 (OPN)mRNA的表达 ,观察骨髓基质细胞的成骨细胞分化情况。并通过电镜 ,观察细胞在材料上的形态和贴附情况。结果 Ⅰ型胶原能明显促进MSC在高分子材料上的粘附 ,6h和 8h时间点与对照组相比 ,差异均有显著意义 (6h ,2 14 4cpm± 14 1cpmvs 1797cpm± 118cpm ,P =0 0 17;8h ,2 311cpm±113cpmvs 1891cpm± 10 3cpm ,P =0 0 10均P <0 0 5 )。Ⅰ型胶原也显著能促进MSC增殖 ,细胞培养第 7d ,实验组的cpm值为 10 2 1± 15 9,对照组 4 5 1± 6 7(t=- 7 330 ,P =0

生长分化因子-5影响肢芽细胞分化的机制

目的研究生长分化因子-5(growthdifferentiatifoanctor-,5GDF-5)对肢芽细胞分化的影响机制及在骨形成过程中的作用机制。方法取妊娠第12d胎鼠肢芽,行肢芽细胞微团培养,以不同浓度(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、120ng/ml)重组鼠GDF-5,干预培养中的肢芽细胞。于细胞培养第1d、3d,用扫描电镜观察不同浓度GDF-5对肢芽细胞生长与分化的影响。于细胞培养第3d,采用免疫组织化学和实时定量PCR等方法观察GDF-5对肢芽细胞核结合转录因子(Cbfa1)与Ⅹ型胶原蛋白表达的影响。结果在细胞培养第1d,扫描电镜观察结果显示,GDF-5可使肢芽细胞连接更为紧密,高浓度GDF-5组有成熟软骨基质和软骨结节形成,低浓度组也有软骨结节形成,该效应与GDF-5浓度呈正相关。在细胞培养第3d,免疫组织化学检测结果显示,Ⅹ型胶原蛋白表达以120ng/ml浓度组最为广泛和强烈,0ng/ml浓度组表达最弱,其表达趋势接近于Cbfa1的表达,表明GDF-5有促进肢芽细胞向成熟软骨方向分化的作用。实时定量PCR结果显示,GDF-5在mRNA水平同样促进Cbfa1表达,其促进作用呈剂量依赖效应。结论GDF-5通过上调Cbfa1和Ⅹ型胶原蛋白表达的途径促进肢芽细胞向软骨分化和促进骨形成。