人肥大细胞羧基肽酶的单抗2A9识别表位的预测和鉴定

目的：分析人肥大细胞羧基肽酶（hMC-CP）的单克隆抗体（mAb）2A9识别表位所在区域．方法：根据肥大细胞hMC-CP的二级结构、亲水性、表面可能性和抗原性指数，对hMC-CP的B细胞表位进行预测．依据预测结果，采用缺失突变的方法，分别扩增编码hMC-CPN端第1～111（P1P2），97～202（P3P4）和1～202（P1P4）位氨基酸的cDNA，并构建重组原核表达载体pET-44／P1P2、pET-44／P3P4和pET-44／P1P4．用IPTG诱导表达融合蛋白，并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析．结果：B细胞表位预测结果显示，hMC-CP的N端第1～202位氨基酸含有多个潜在的B细胞表位．PCR扩增出的3个目的片段，其DNA序列同NCBI公布的序列完全一致．Western blot结果显示：E．coli BI21（DE3）表达的融合蛋白P3P4和P1P4均与mAb2A9反应；而融合蛋白P1P2与mAb 2A9不发生反应、结论：用多参数综合测评的方法，可获得满意的hMC-CPB细胞表位预测结果，本研究中mAb 2A9识别的表位位于hMC-CP的112-202位氨基酸区域．