运动对腹部脂肪积累及肥胖基因表达的影响

复制了系统游泳运动减少腹部脂肪积累的大鼠模型;用Northern印记杂交测定了训练大鼠及对照大鼠ob mRNA表达量;并对运动减肥的分子生物学机制进行初步探讨。研究结果表明系统游泳运动减少腹部脂肪积累与运动所致的ob mRNA表达水平增高密切相关。

运动对2型糖尿病大鼠脂肪组织中肥胖基因表达的影响

目的 :研究运动对 2型糖尿病大鼠脂肪组织中肥胖基因 (obesegene ,obgene)表达水平的影响 ,在基因转录水平上探讨 2型糖尿病大鼠obmRNA表达水平的变化 ,以及运动改变 2型糖尿病大鼠obmRNA表达的机制。方法 :4 0只自发发病的 2型糖尿病模型 :OLETF大鼠分成 4组 ,分别为基础饲料非运动组、基础饲料运动组、高脂饲料非运动组和高脂饲料运动组 ;15只LETO大鼠(与OLETF大鼠同系 ,但不同株 ,系不发病对照组 )用基础饲料饲养 ,随机分为两组 :非运动组和运动组 ,分别进行 9周的运动和高脂饮食干预 ,9周后用实时荧光定量RT -PCR法检测每只大鼠腹膜后脂肪组织obmRNA的表达水平。结果 :基础饲料饲养的OLETF大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数分别为 4 0 2 4× 10 6 ± 5 4 67× 10 5/ μgRNA和 1 2 5 8× 10 6 ± 3 862× 10 5/ μgRNA ;高脂饲料饲养的OLETF大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数为 4 832×10 6 ± 1 0 34× 10 6 / μgRNA和 1 5 74× 10 6 ± 6 783× 10 5/ μgRNA ;而基础饲料饲养的LETO大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数分别为 1 979× 10 6 ± 6 4 77× 10 5/ μgRNA和 1 82 4×10 6 ± 4 0 89× 10 5/ μgRNA。OLETF大鼠脂肪组织obmRNA表达水平运动?

肥胖基因的分离及其在大肠杆菌中的表达

利用PCR技术自外周血白细胞染色体DNA中扩增获取了肥胖基因(ob基因)的外显子2和3序列.经过拼接,获得了全长的ob基因编码序列.测序结果表明,获得的序列与文献报道完全一致.利用PCR技术扩增出成熟蛋白的编码序列,克隆至表达载体pBV220中获得了表达菌株,并对表达产物进行了初步纯化,为进一步研究ob基因产物的功能与应用奠定了基础.

猪肥胖基因(ob)部分序列的克隆与多态性分析

猪肥胖基因（ｏｂ）部分序列的克隆与多态性分析戴茹娟１李宁２吴常信１（１．中国农业大学动物科技学院，北京１０００９４）；（２．中国农业大学农业生物技术重点实验室，北京１０００９４）ＰａｒｔｉａｌＣｌｏｎｉｎｇｏｆＰｏｒｃｉｎｅＯｂｅｓｉｔｙＧｅｎｅａｎ...

草鱼与鲢鱼肥胖基因克隆与序列分析

肥胖基因产物leptin是调节哺乳动物摄食、能量代谢等生命活动的重要细胞因子。应用RT-PCR和RACE法获得了草鱼(Ctenopharyngodon idellus)和鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)leptin基因的全长cDNA序列分别为1096bp和1176bp,编码173和172个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,草鱼和鲢鱼的leptin序列与其它鲤科鱼类leptin的同源性较高,而与其他鱼类的leptin同源性很低,但所有鱼类的leptin均含有用于形成二硫键的高度保守的半胱氨酸。系统进化树分析显示,草鱼和鲢鱼leptin与其他鱼类leptin聚于一进化分支。应用PCR和Genome Walker方法,进一步获得了草鱼和鲢鱼leptin基因的内含子和5'侧翼区序列。结果表明,获得的草鱼和鲢鱼leptin基因长度分别为2129bp和2192bp,含有与其他脊椎动物leptin相似的基因结构(含三个外显子和两个内含子)。该研究为深入研究鱼类肥胖基因结构功能关系与鱼类抗肥胖品系定向遗传选育奠定了良好的基础。

鳜鱼肥胖基因的克隆与组织表达

为了研究脊椎动物肥胖基因(obese gene,ob)结构与功能关系,利用PCR和RACE方法克隆得到鳜鱼肥胖基因全长序列:鳜鱼ob基因全长1 398 bp,由2个外显子和1个内含子构成,其完整的开放阅读框由486 bp组成,编码161个氨基酸.应用Genome Walker方法克隆得到一段长为357 bp的鳜鱼ob基因5′侧翼区序列,并利用相关软件预测其中具有多个保守的顺式调控元件.我们将克隆得到的鳜鱼ob基因编码氨基酸序列leptin与其他物种leptin序列分别进行同源性比较,并构建系统进化树,发现虽然不同物种间leptin序列差异非常大,但进化树分析显示所有的leptin序列,包括哺乳动物、两栖动物和真骨鱼类,各自聚集成簇.最后通过荧光实时定量PCR方法研究鳜鱼不同组织ob基因的表达水平,与哺乳动物ob基因主要在脂肪组织表达分布不同,鳜鱼ob基因在所有被检测组织中均有表达,在肝脏组织中大量表达,其次是脑,在肠道、脂肪、脾和肌肉中只有微量表达,说明鱼类ob基因的表达分布及其调控机制可能与哺乳动物存在差别.

鲤鱼肥胖基因的分子克隆及在大肠杆菌中的表达

为了研究鲤鱼肥胖基因的结构特点和体外表达产物的生物学活性 ,利用RT PCR技术从鲤鱼肠系膜脂肪组织中扩增出鲤鱼肥胖基因的cDNA编码序列 ,分析表明该cDNA序列由 4 38个核苷酸组成 ,编码 14 6个氨基酸组成的多肽 ,鲤鱼肥胖基因与人、猪、鼠的相比 ,核苷酸同源性分别为 :84 %、 86 %、 95 % ;氨基酸的同源性分别为 84 %、 82 %、 96 %。构建了原核表达载体 pET 2 8a li,利用IPTG在大肠杆菌中进行了诱导表达 ,并对表达产物进行了初步纯化和生物活性检测 ,结果表明 ,鲤鱼肥胖基因在大肠杆菌中进行了高效特异性融合表达 ,融合蛋白质分子量约为 2 0kD ,经薄层扫描分析 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 2 0 3%。表达产物经过纯化和复性能够明显抑制小鼠的摄食和生长 。

摄食状态及胰岛素水平对大鼠脂肪组织肥胖基因表达的影响

观察了不同进食状态及胰岛素水平对大鼠脂肪组织肥胖（OB）基因表达的影响。方法：逆转录体外基因扩增（RT－PCR）。结果：与正常进食对照组大鼠比较，过夜禁食组大鼠脂肪组织中OBmRNA水平下降34％（P＜0．05），而同样禁食后在皮下注射胰岛素组的大鼠，其脂肪组织中OBmRNA表达与正常对照组无显著性差异，但明显高于禁食组（P〈0.01）。结论：血液胰岛素水平是影响正常大鼠脂肪组织中OB基因表达的主要因素。进食状态对OB基因表达的影响是通过改变胰岛素水平来实现的。

脂肪型和瘦肉型猪肥胖基因表达差异及其与繁殖性能的关系

试验选用内江猪、荣昌猪和长白猪初产母猪,研究肥胖基因mRNA在不同品种间的表达差异及其与繁殖性能间的关系。从发情第1天开始,连续3d测定血清促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)和瘦素(Leptin)水平,并于第3天各屠宰5头母猪以测定皮下脂肪组织obmRNA表达丰度,同时对其他母猪进行繁殖性能观测。结果表明:内江猪和荣昌猪皮下脂肪组织obmRNA表达丰度及血清Leptin浓度显著高于长白猪种。obmRNA表达丰度与Leptin浓度高度正相关,且两者与初产母猪的血清FSH、LH和总产仔数呈正相关,而与初生个体重呈负相关。

不同膳食构成对大鼠肥胖基因表达的影响

不同膳食构成及不同能量摄入水平对大鼠肥胖基因（ｏｂ基因）表达、体内胰岛素、生长激素分泌影响的研究结果发现：在能量摄入水平相同情况下，不同膳食构成包括高蛋白、高脂肪、高碳水化合物对ｏｂ基表达、胰岛素和生长激素分泌没有明显的影响；而能量摄入水平对上述３个指标均有明显的影响，即在能量摄入水平增高的情况下，ｏｂ基因表达水平增高，胰岛素分泌增加，生长激素分泌减少。提示，ｏｂ基因表达、胰岛素和生长激素的分泌三者之间存在着相互作用机制并受共同代谢信号调节。

动物脂肪代谢与肥胖基因调节研究进展

动物脂肪代谢受到多种因素的调控,其中最重要的是基因调控。肥胖基因是近年来克隆的新基因,该基因表达产物瘦蛋白是反映体内脂肪含量和调节的重要信号因子,具有调节摄食行为,增加能量消耗和降低动物采食量的作用。文章就肥胖基因对动物脂肪代谢调节的关系进行了综述。

莱芜黑猪肥胖基因的多态性分析

肥胖基因 (ob)发生遗传变异而不能产生正常的蛋白产物———Leptin ,而Leptin的最主要功能是反映脂肪组织含量 ,调节体重 ,使体重维持相对稳定 ,因此突变个体表现为肥胖。本文分析了不同品种猪内ob基因HinfI的多态性分布 ,该多态性是有点突变造成的。结果表明 ,中国地方猪种菜芜猪群体内C基因占优势 ,而长白猪和大约克群体中TT纯合子为 10 0 %。这种多态性分布与莱芜猪属肥胖型品种 ,而长白、约克夏猪属瘦肉型品种相吻合。

肥胖基因的研究进展

肥胖症是摄食和能耗平衡机制的失调，可引起多种疾病，如Ⅱ型糖尿病、高血压、高血脂和癌症等．肥胖基因的克隆为研究肥胖的机制提供了重要途径．肥胖基因编码消瘦激素，作用于下丘脑，控制代谢、能耗和生殖系统．实验表明，重组的消瘦激素具有使肥胖基因缺陷和神经肽Ｙ缺陷小鼠代谢和体重正常化，恢复肥胖基因缺陷小鼠生育能力等活性．进一步研究肥胖基因作用机制，开发针对各种缺陷的药物，能使肥胖症的治疗成为可能．

人肥胖基因大肠杆菌表达载体的构建及其诱导表达

通过设计1对PCR引物(上游引物,5-′GCCATATGGTGCCGATCCAAAAAG-3′,下游引物,5-′GAGAATTCCCTTCAAGGCCTCAG-3′),采用PCR方法扩增出人肥胖基因编码成熟肽的核苷酸序列,将扩增产物从琼脂糖凝胶上回收后插入测序载体pMD-18-T后进行了核苷酸序列测定。将经EcoRⅠ和NdeⅠ双酶切后的扩增产物插入经EcoRⅠ和NdeⅠ双酶切后的大肠杆菌表达载体pET-28a(+),构建了可在大肠杆菌中高效表达人瘦蛋白的表达载体。将表达载体转化入大肠杆菌菌株BL21,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测,结果表明构建的人肥胖基因表达载体得到高效表达,重组蛋白占到菌体总蛋白的31.2%。

胰岛素对胎盘肥胖基因表达的影响

目的 :探讨胰岛素水平升高对胎盘肥胖基因表达瘦素的影响。方法 :采用放射免疫法分别检测 35例糖尿病产妇、40例正常产妇的外周血胰岛素、瘦素水平 ,同时分别检测两组的脐血瘦素水平。采用 RT- PCR和荧光定量分析法分别检测两组的胎盘肥胖基因表达的 m RNA水平。并对结果进行统计学相关分析。结果 :1糖尿病产妇外周静脉血胰岛素水平、瘦素水平均高于正常产妇 (P<0 .0 1) ,胰岛素与瘦素水平两者具有明显的相关性 (r=0 .5 5 ,P<0 .0 0 0 1) ;2两组产妇的胎盘肥胖基因表达的 m RNA水平有明显的差异 (P<0 .0 1) ;3胎盘肥胖基因表达的 m RNA水平与脐血瘦素水平有明显的相关性 (r分别为 0 .5 2、0 .48,P<0 .0 0 1) ;4两组产妇的新生儿体重的比较也有明显的差异 (P<0 .0 1)。结论 :高胰岛素对糖尿病人胎盘肥胖基因的表达有上调作用 ,它可能是糖尿病产妇的胎儿容易出现超体重儿 (巨大儿 )

胎盘肥胖基因表达与胎儿宫内生长发育相关性研究

为探讨胎盘肥胖基因表达水平和胎儿宫内生长发育的关系。采用ＲＴ－ＰＣＲ检测４０例胎盘肥胖基因ｍＲＮＡ相对表达水平，采用放射免疫法检测脐血肥胖基因蛋白（瘦素ｌｅｐｔｉｎ）水平，采用Ｐｏｎｄｅｒａｌ指数」ＰＩ＝１００×体重（ｇ）／身长（ｃｍ）＾３「估测新生儿营养状态。结果：１３例小于胎龄儿（ＳＧＡ）胎盘组织ｌｅｐｔｉｎ－ｍＲＮＡ相对表达水平为０．４４９±０．０２６，显著低于１５例适于胎龄儿（ＡＧＡ）表达水平０．４８７±０．０４２（Ｐ＝０．０４２），１２例大于胎龄儿（ＬＧＡ）胎盘组织ｌｅｐｔｉｎ－ｍＲＮＡ相对表达水平为０．５２５±０．０２６，显著高于适于胎儿龄儿（ＡＧＡ，Ｐ＝０．０３）。胎盘肥胖基因ｍＲＮＡ相对表达水平与新徨儿出生体重（ＢＷ）和Ｐｏｎｄｅｒａｌ指数（ＰＩ）显著相关（ｒ＝０．６０和０．５６，Ｐ〈０．０５）

L-肉碱对肥胖大鼠体脂含量及肥胖基因表达产物的影响

为探讨L -肉碱对肥胖大鼠体重、体脂、胰岛素及肥胖基因表达产物 (瘦素 )等水平的影响 ,以高脂饲料诱导大鼠肥胖模型 ,将肥胖模型鼠随机分为 4组 :对照组与 12 5、2 5 0、5 0 0mg kgBW 3个剂量的L -肉碱组 ,每天 1次经口给予 ,共 6周。观察大鼠体重、睾丸 +肾脂肪垫重量、胰岛素(INS)及瘦素 (Leptin)水平等的变化。结果显示 3个肉碱组的体重均低于对照组 ,2 5 0与5 0 0mg kgBW组的睾丸 +肾脂肪垫重量、胰岛素和瘦素显著低于对照组 (P <0 0 5 ) ,提示L -肉碱具有抑制肥胖大鼠肥胖的作用。

人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的克隆中国人的肥胖基因,并在大肠杆菌中高效表达人瘦素蛋白。方法用RT-PCR从培养的中国人脂肪细胞提取的总RNA中扩增出肥胖基因,与TA载体连接后进行核酸序列测定,并将该基因定向克隆至高效表达质粒pBV220,在大肠杆菌中表达。结果克隆出中国人肥胖基因,其cDNA序列与文献报道的一致,构建了重组质粒pBV220-OB,并成功地实现了人肥胖基因在大肠杆菌中的表达。结论人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达,为进一步研究该基因在肥胖症及其相关疾病中的作用,以及在脂肪代谢与脂肪细胞分化中的调控机制奠定基础。

猪肥胖基因在大肠杆菌中的高效融合表达

采用PCR方法扩增猪肥胖基因编码的成熟蛋白cDNA序列 ,并在 5′端加上BamHⅠ位点 ,3′端加上EcoRⅠ位点 ,将 5′端密码子CCC转变为大肠杆菌常见密码子CCG ,扩增得到 4 5 9bp的片段 ,克隆于融合表达载体pGEX 2TBamHⅠ和EcoRⅠ位点 ,酶切、测序正确 ,经 0 1mmol/LIPTG诱导表达出一条约 4 2kD的融合蛋白 ,其中 2 6kD为 pGEX 2T中带有的谷胱苷肽转移酶 ,16kD是猪肥胖基因表达产物瘦蛋白。利用非融合表达产品制备抗血清 ,检测融合表达的重组蛋白 ,Western blot为阳性。

肥胖基因的研究进展

肥胖机制的研究是目前最为活跃并取得迅速进展的领域之一。在最近的短短两年多时间里，完成了克隆肥胖基因（ｏｂｅｓｅｇｅｎｅ，ｏｂｇｅｎｅ）、阐明ｏｂ基因产物———ｌｅｐｔｉｎ（瘦因子）的结构、克隆ｌｅｐｔｉｎ受体的基因并部分阐明ｌｅｐｔｉｎ作用的机制，使肥胖研究跨入分子时代，为人类从根本上控制体重、提高健康水平，展现了诱人的前景。本文综述这几个方面的最新进展。