大黄酸对白血病细胞脂肪量和肥胖相关蛋白表达及细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨大黄酸对白血病细胞脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)表达及白血病细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法将对数生长期白血病细胞HL60、NB4、Naml6、THP1细胞随机分为对照组及10、20、40、80μmol·L^(-1)大黄酸组,分别用终浓度0、10、20、40、80μmol·L^(-1)的大黄酸处理后培养;于培养24、48、72 h时,采用细胞计数试剂盒检测细胞的增殖能力;于培养72 h时,使用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测各组细胞中FTO和caspase-3蛋白相对表达量。结果培养24、48、72 h时,各浓度大黄酸组HL60、NB4、Nalm6细胞增殖抑制率均高于对照组(P<0.05),随大黄酸浓度增加,HL60、NB4、Nalm6细胞增殖抑制率显著增高,呈浓度依赖性(P<0.05)。10、20、40、80μmol·L^(-1)大黄酸组THP1细胞增殖抑制率高于对照组(P<0.05);10、20、40、80μmol·L^(-1)大黄酸组THP1细胞增殖抑制率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。各浓度大黄酸组HL60、NB4、Nalm6细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.05);随大黄酸浓度增加,HL60、NB4细胞凋亡率显著增加,呈浓度依赖性(P<0.05);40、80μmol·L^(-1)大黄酸组Nalm6细胞凋亡率显著高于10μmol·L^(-1)大黄酸组和20μmol·L^(-1)大黄酸组(P<0.05);对照组、10μmol·L^(-1)大黄酸组和20μmol·L^(-1)大黄酸组Nalm6细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。各浓度大黄酸组HL60、NB4、Nalm6细胞中FTO蛋白相对表达量显著低于对照组,caspase-3蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05);随大黄酸浓度增加,HL60、NB4、Nalm6细胞中FTO蛋白相对表达量显著降低,caspase-3蛋白相对表达量显著增高,呈浓度依赖性(P<0.05)。5组THP1细胞凋亡率及THP1细胞中FTO和caspase-3蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论大黄酸可通过抑制FTO的表达,抑制白血病细胞的增殖并促进其凋亡,且对HL60和NB4细胞的作用明显强于Naml6和THP1细胞。

肥胖相关蛋白FTO的研究进展

肥胖目前在世界范围内以极快的流行趋势和其带来的一系列相关疾病而引起全球的广泛重视。作为多因素复杂性状疾病,肥胖与遗传基因之间的相关性研究越来越深入。肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)是首例被确认与肥胖密切相关基因,并在不同人群和动物中得到反复验证。目前针对FTO的研究越来越细致,从最初的遗传多态性研究向更深的表达调控机制及功能学研究拓展,本篇将对相关研究进展作一系统综述。

肥胖相关蛋白及其基因表达

近年来，有关肥胖基因的研究颇为活跃，也取得了不少令人瞩目的成果，尤其在美、日等发达国家，这方面的研究已成热门研究领域，不断涌现出有关肥胖基因ｏｂ的克隆与表达［１、２］，并相继克隆出它们的受体。在近５年内，有关研究肥胖基因的文章多达５５１篇。与肥胖密切...

基于生物信息学分析和实验验证的肥胖相关蛋白促进肾小球系膜细胞自噬和抑制炎症反应的机制研究

目的:运用生物信息学方法和实验验证研究肥胖相关蛋白(fat mass and obesity associated proteins,FTO)促进肾小球系膜细胞自噬,抑制炎症反应的机制。方法:免疫组化分析FTO在慢性肾小球肾炎患者肾组织中的表达;透射电镜观察过表达FTO对肾小球系膜细胞自噬的影响,Western blot检测自噬标志蛋白;荧光双标观察过表达FTO对炎症反应的影响,ELISA法检测细胞上清IL-6和TNF-α表达水平。运用catRAPID omics v2.0和Encori数据库的预测FTO相关的互作基因,并进行GO功能和KEGG信号通路富集分析。Western blot检测相关信号通路中的关键蛋白。构建PPI网络筛选核心蛋白。结果:免疫组化结果提示FTO在慢性肾小球肾炎患者肾脏组织表达显著降低(P<0.01);过表达FTO可促进肾小球系膜细胞自噬,抑制炎症反应;通过Encori数据库和catRAPID omics v2.0数据库共得到737个FTO相关互作基因。KEGG分析结果提示Hippo信号通路、Wnt信号通路和Rap1信号通路被显著富集。Western blot实验表明过表达FTO可激活Hippo信号通路,抑制Wnt信号通路和Rap1信号通路。PPI调控网络筛选出16个核心基因。结论:FTO通过调控Hippo信号通路,Wnt信号通路,Rap1信号通路和AMPK信号通路等促进肾小球系膜细胞自噬和抑制炎症反应。CTNNB1、CTNND1、PPP2CA、YES1和ABL1等是FTO核心基因。

肥胖相关蛋白在女性乳腺癌发病中的交互作用初探

目的探讨女性乳腺癌发病过程中肥胖相关蛋白可能存在的交互作用。方法采用病例对照研究设计,于2014年4月–2015年5月序贯收集279例原发性女性乳腺癌病例,按年龄频数匹配收集260例同期健康对照。通过文献循证筛选肥胖-乳腺癌病因链上较受关注的蛋白,运用酶联免疫吸附法测定研究对象血浆中相关蛋白水平。按照绝经状态分层后,采用多因素logistic回归和广义多因子降维法(generalized multifactor dimensionality reduction,GMDR)相结合的分析策略,探讨肥胖相关蛋白在乳腺癌发病风险影响中的可能相互作用。结果绝经前亚组中,胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)、C反应蛋白(CRP)、抵抗素(RETN)、可溶性瘦素受体(sOB-R)、脂联素(ADP)存在边际高阶交互作用(测试集平衡准确度59.01%,交叉验证一致性10/10,置换检验P=0.05)。绝经后亚组中,瘦素(LEP)、sOBR、ADP、CRP、IGFBP3、内脂素(VF)存在高阶交互作用(测试集平衡准确度67.31%,交叉验证一致性10/10,置换检验P=0.01)。随着肥胖相关蛋白暴露数目的增多,绝经前后乳腺癌发病风险逐渐增大(OR绝经前=2.18,95%CI:1.69~2.82;OR绝经后=2.41,95%CI:1.75~3.32)。结论肥胖相关蛋白在对绝经前后乳腺癌发病影响上均存在高阶交互作用,未来的研究应密切关注这些蛋白在联合用作预测因子或构建乳腺癌风险评分时可能存在的交互作用。

脂肪含量和肥胖相关蛋白介导的mRNA m^(6)A修饰对动物脂肪沉积的作用及其应用前景

在动物脂肪沉积过程中,前体脂肪细胞增殖、分化和脂滴甘油三酯水平的变化受到一系列转录因子和信号通路的调节。目前研究者虽对脂肪形成的转录调控机制进行了深入研究,但对转录后mRNA水平修饰的报道相对较少。甲基化转移酶、去甲基化酶和甲基化阅读蛋白共同调控的mRNA m^(6)A修饰是动态可逆的且与脂肪沉积密切相关。脂肪含量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesityassociated,FTO)作为RNA去甲基化酶,影响被修饰基因的表达,在脂肪沉积中起关键作用。文中系统分析并总结了FTO介导的mRNA m^(6)A去甲基化对动物脂肪沉积的作用及分子调控机制的研究进展,提示FTO可能成为有效治疗肥胖症的靶点;还对近年来研发FTO抑制剂的情况进行了总结,并展望其在治疗肥胖症方面的研究前景。

脂肪量和肥胖相关蛋白在人肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)在人近端肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤(IRI)中的作用。方法以HK-2细胞作为研究对象,用抗霉素A、A23187、2-脱氧葡萄糖构建HK-2细胞IRI模型。将细胞分为对照组及缺血再灌注组(I/R组)。实时荧光PCR(qPCR)法及Western blot法分别检测2组细胞FTO、B细胞淋巴瘤/白血病2相关X基因(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved Caspase-3)的mRNA及蛋白表达水平。流式细胞术检测细胞凋亡。比色法检测mRNA N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)甲基化水平。结果1.与对照组比较,I/R组细胞FTO mRNA(0.15±0.05比1.00±0.23)、Bcl-2 mRNA(0.14±0.07比1.02±0.25)相对表达量降低,Bax(3.10±0.35比1.00±0.13)、cleaved Caspase-3 mRNA(4.21±0.56比1.00±0.09)相对表达量增高,差异均有统计学意义(t=6.28、5.84、-9.83、-9.84,均P<0.01)。2.与对照组比较,I/R组FTO蛋白(0.69±0.14比1.37±0.02)、Bcl-2蛋白(0.50±0.12比1.25±0.21)降低,Bax蛋白(1.04±0.08比0.57±0.06)、cleaved Caspase-3蛋白(0.99±0.05比0.36±0.07)相关表达量增高,差异均有统计学意义(t=8.10、5.49、-8.22、-12.09,均P<0.05)。3.与对照组比较,I/R组HK-2细胞凋亡率[(61.70±1.01)%比(0.16±0.10)%]增高,差异有统计学意义(t=63.80,P<0.01)。4.与对照组比较,I/R组总mRNA m^(6)A水平在总RNA中的百分比[(3.13±0.21)%比(1.10±0.26)%]增高,差异有统计学意义(t=-10.61,P<0.01)。结论FTO介导的RNA m6A修饰可能通过调控HK-2细胞凋亡影响肾脏IRI。

肥胖相关蛋白FTO抑制人胰腺癌细胞增殖及机制的研究

目的:研究肥胖相关蛋白FTO在胰腺癌细胞中的功能,及参与调控胰腺癌发生、发展的机制。方法:利用RT-q PCR和western blot来检测胰腺正常细胞和胰腺癌细胞中FTO的mRNA和蛋白的表达;利用MTT、CCK8、Brd U和TUNEL来检测胰腺癌细胞在siRNA干扰后的增殖和凋亡情况;利用斑点杂交等检测胰腺癌细胞mRNA中6-甲基腺苷的水平;结果:FTO在胰腺癌细胞中高表达;FTO调控胰腺癌细胞PANC-1的细胞增殖;FTO调节mRNA中6-甲基腺苷的水平;结论:FTO在胰腺癌中高表达,敲降胰腺癌细胞中的FTO会抑制细胞生长并增加凋亡,同时细胞DNA的合成减少以及甲基化mRNA的积累并调节mRNA稳定性,在胰腺癌细胞中起重要作用。

铝对大鼠脑部和PC12细胞中肥胖相关蛋白及脑源性神经营养因子表达的影响

[背景]RNA化学修饰是表观遗传学领域新近研究的热点,但有关RNA化学修饰的研究在铝神经毒性的具体机制中尚未见报道。[目的]观察染铝对大鼠不同脑区及大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤分化细胞(PC12细胞)内6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶肥胖相关蛋白(FTO)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。[方法]动物实验:健康雄性SD大鼠24只,按体重随机分为对照组(生理盐水)和10、20、40μmol·kg^(-1)剂量组,每组6只,采用腹腔注射麦芽酚铝[Al(mal)_(3)]染毒,隔天注射,染毒3个月。细胞实验:分为对照组和100、200、400μmol·L^(-1)剂量组,Al(mal)_(3)染毒PC12细胞24 h。染毒结束后,水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;水迷宫实验结束后,Western blotting法测定大鼠皮质(n=6)和海马区(n=6)及PC12细胞(n=5)的FTO及BDNF蛋白表达量。[结果]水迷宫实验结果显示,40μmol·kg^(-1)Al(mal)_(3)组大鼠的逃避潜伏期在训练的第3、4、5天均比对照组、10μmol·kg^(-1)和20μmol·kg^(-1)Al(mal)_(3)组增加(P<0.05),其目标象限停留时间也比对照组减少(P<0.05),即染铝可造成大鼠学习记忆能力损害。Western blotting结果显示:在皮质区,与对照组相比,染铝各组大鼠FTO及BDNF蛋白表达水平均降低(P<0.05);在海马区,与对照组相比,20μmol·kg^(-1)和40μmol·kg^(-1)Al(mal)_(3)组FTO及BDNF蛋白表达水平降低(P<0.05);在PC12细胞中,与对照组相比,染铝各组细胞FTO及BDNF蛋白表达水平均降低(P<0.05)。[结论]铝引起的学习记忆损害与FTO和BDNF蛋白表达同时降低有关,提示m^(6)A甲基化修饰可能参与其中。

人脂肪与肥胖相关基因蛋白在结、直肠癌及肝癌组织中的表达及意义

目的:探讨人脂肪与肥胖相关(FTO)基因蛋白在结、直肠癌和肝癌组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化染色方法检测61例结、直肠癌以及相应59例癌旁组织、68例肝癌以及相应67例癌旁组织中FTO基因蛋白的表达。结果:FTO在结、直肠癌与癌旁组织的表达阳性率分别为63.93%(39/61)、37.29%(22/59),结、直肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);FTO在肝癌与癌旁组织的表达阳性率分别为63.24%(43/68),88.06%(59/67),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:FTO基因蛋白在结、直肠癌组织中呈高表达,在结、直肠癌的发生中发挥作用。

肥胖大鼠胰腺组织中FTO蛋白的表达及意义

目的观察肥胖大鼠胰腺组织中脂肪和肥胖相关(FTO)蛋白的表达,并探讨其意义。方法将32只大鼠随机分为两组各16只,模型组给予高脂饲料喂养制备肥胖大鼠模型,对照组常规饲料喂养;饲养20周后禁食12h,破心采血,测定空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);取大鼠胰腺,免疫组化法检测胰腺组织中的FTO蛋白。结果模型组体质量、腹内脂肪含量、FBG、FINS、TG、TC、FFA水平以及HOMA-IR均显著高于对照组(P均<0.05);胰腺组织中FTO蛋白只表达于胰岛细胞,模型组FTO蛋白阳性表达的IOD值为6 899.8±789.5,显著高于对照组的3 765.8±756.6,P<0.01。结论在肥胖大鼠胰腺组织FTO蛋白表达量增加,其通过影响胰岛细胞的分泌功能,在肥胖及2型糖尿病的发生、发展中起重要作用。

慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷及相关酶表达的影响

目的探讨慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷(m6A)及相关酶表达影响。方法将20只C57BL/6J雄鼠随机分成对照(control)组、慢性束缚应激模型(CRS)组;给予CRS组小鼠3周慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型,采用旷场实验和高架十字迷宫实验检测各组小鼠焦虑样行为变化;采用免疫组织化学法和m6A RNA甲基化检测试剂盒检测小鼠海马m6A的表达变化;采用Western blotting和Real-time PCR方法分析海马m6A相关酶表达变化。结果1.小鼠焦虑相关行为学检测结果显示,与control组相比,CRS组小鼠在旷场内框停留时间明显下降(P<0.01);高架十字迷宫开放臂探索时间减少(P<0.0001);2.m6A RNA甲基化检测试剂盒检测结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马m6A含量明显减少(P<0.05);免疫组化结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马m6A阳性产物明显减少(P<0.001);3.PCR结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马去甲基化酶间变性淋巴瘤激酯B(AlkB)同源蛋白5(ALKBH5)(P<0.001)、脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)表达显著上调(P<0.05);甲基化酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)(P<0.05)表达显著下调;m6A甲基化结合蛋白YTH结构域家族蛋白3(YTHDF3)(P<0.05)和YTH结构域蛋白2(YTHDC2)(P<0.01)表达显著上调。Western blotting结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马去甲基化酶ALKBH5(P<0.05)、FTO(P<0.05)表达显著上调;甲基化酶WTAP(P<0.01)表达显著下调;m6A甲基化结合蛋白YTHDF3(P<0.01)和YTHDC2(P<0.05)表达显著上调。结论在慢性束缚应激所致小鼠焦虑与海马m6A表达下调有关,其机制可能与m6A甲基化酶WTAP表达下调或去甲基化酶ALKBH5和FTO表达上调相关。

FTO、GSDMD在胃癌组织中的表达及其作用机制研究

目的探讨肥胖相关蛋白(FTO)与消皮素D(GSDMD)在胃癌(GC)组织中的表达及其作用机制。方法通过TIMER 2.0数据库分析FTO及GSDMD在GC组织中的差异表达。收集2022年1月至2023年3月广西医科大学第二附属医院手术切取的GC组织及其对应癌旁组织(距离肿瘤边缘3~5 cm)各45例,并收集患者的临床病理资料。采用免疫组织化学染色法检测组织中FTO、GSDMD的表达情况,分析其与患者临床病理特征的关联性。通过转染低表达FTO慢病毒构建低表达FTO的AGS细胞(FTO低表达组),并以转染空载体慢病毒的细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测两组细胞FTO mRNA、GSDMD mRNA的表达水平;采用细胞划痕实验及细胞迁移实验分析两组细胞迁移能力。结果基于TIMER 2.0数据库的分析结果及免疫组织化学染色结果显示,FTO、GSDMD在GC组织中呈高表达(P<0.05)。FTO和GSDMD高表达均与肿瘤侵犯深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。细胞实验结果显示,FTO低表达组的GSDMD mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),划痕愈合率更低,细胞迁移数更少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论FTO可能通过调控GSDMD表达促进GC细胞转移。

m^(6)A去甲基化酶在胃癌发生发展中的作用机制研究进展

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,多数患者发现时已处于晚期,预后不佳。外科手术及化学治疗(化疗仍是目前胃癌的主要治疗方式。N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^(6)A)是近年来肿瘤研究的热点。m^(6)A作为真核生物中最常见的RNA修饰形式,可以调控RNA循环的各个阶段,包括RNA剪接、加工、降解和翻译等,从而调控RNA的表达和功能,在细胞分化、发育和代谢等各个环节中发挥关键作用。m^(6)A去甲基化酶可去除RNA上的甲基基团,确保m^(6)A甲基化是一个动态的可逆的过程。作为m^(6)A甲基化过程的关键酶,m^(6)A去甲基化酶——脂肪和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)、AlkB同系物5(AlkB homolog 5,ALKBH5)、ALKBH3的失调能通过多种机制调控胃癌的演进过程,与胃癌的发生发展密切相关。m^(6)A去甲基化酶通过调节信号通路,改变胃癌细胞的增殖和侵袭能力,影响胃癌对化疗药物的耐药性,参与调控胃癌的免疫应答及线粒体代谢,从而影响胃癌细胞的生长,有望成为一个全新的治疗靶点。该文综述了m^(6)A去甲基化酶参与胃癌发生发展的分子机制,以及其表达和功能与胃癌生物学特性的关系,旨在为胃癌的早期诊断和靶向治疗提供新的研究思路。

下调去甲基化酶FTO抑制人肝癌细胞系HepG2增殖

目的 探究去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(FTO)抑制对人肝癌细胞系HepG2增殖的作用机制。方法 将肝癌细胞系HepG2分为对照组(转染空质粒)、FTO组(转染FTO过表达质粒)、si-FTO组(转染si-FTO)、si-FTO+si-FoxO1组(同时转染si-FTO和si-FoxO1)。RT-qPCR检测细胞中FTO相对表达量;用CCK-8、Transwell小室法和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Dot blot检测m~6A甲基化水平;蛋白质印迹检测细胞中FoxO1蛋白表达。结果 通过人类癌基因库(TCGA)分析肝癌患者总体生存期发现FTO高表达提示更短的生存期(P<0.05)。和正常肝细胞系HL7702相比,HepG2细胞中FTO表达明显升高(P<0.05)。和对照组相比,si-FTO组细胞中FTO相对表达量明显降低,FTO组细胞中FTO相对表达量明显升高(P<0.05);和si-FTO组相比,si-FTO+si-FoxO1组细胞中FTO相对表达量明显升高(P<0.05)。si-FTO组细胞活性、侵袭细胞数、m~6A相对表达量均低于对照组,细胞凋亡率、FoxO1蛋白表达均高于对照组(P<0.05);FTO组细胞活性、侵袭细胞数、m~6A相对表达量明显高于对照组,细胞凋亡率、FoxO1蛋白表达明显低于对照组(P<0.05);si-FTO+si-FoxO1组细胞活性、侵袭细胞数目、m~6A相对表达量均高于si-FTO组,细胞凋亡率、FoxO1蛋白表达均低于si-FTO组(P<0.05)。结论 高表达FTO与临床预后较差相关,去甲基化酶FTO敲减可抑制肝细胞癌的增殖和侵袭,诱导肝细胞癌的凋亡,其作用机制可能和调控FoxO1表达有关。

FTO介导m6A修饰的PRKD2调节SIRT1/HIF-1α通路抑制糖尿病肾病足细胞损伤的机制研究

目的探究脂肪含量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)和丝氨酸-苏氨酸激酶蛋白激酶D2(serine-threonine kinase protein kinase D2,PRKD2)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)进展中的调控作用和调节机制。方法采用35 mmol/L葡萄糖对足细胞(MPC5细胞)进行高糖刺激24h构建DKD体外模型。采用FTO过表达载体(pcDNA-FTO)和PRKD2过表达载体(pcDNA-PRKD2),或空载体(vector)转染高糖诱导的MPC5细胞。通过RT-qPCR检测FTO和PRKD2过表达效率;MeRIP检测PRKD2 mRNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰水平;ELISA检测Caspase-3活性、IL-6,TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)分泌量;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot评估FTO和PRKD2蛋白水平,以及SIRT1/HIF-1α通路关键蛋白表达水平;Pearson分析FTO和PRKD2水平的相关性。结果与无高糖诱导对照组比较,高糖诱导的足细胞中FTO蛋白(0.51±0.04 vs 1.00±0.03)和PRKD2蛋白(0.45±0.03 vs 1.01±0.04)水平显著下调,差异具有统计学意义(t=13.17,16.76,均P<0.001)。高糖诱导的足细胞中FTO蛋白水平和PRKD2蛋白水平呈正相关(r2=0.7051,P<0.001)。与vector组相比,pcDNA-FTO组PRKD2 mRNA的m6A水平(0.56±0.09 vs1.01±0.13)降低,PRKD2 mRNA水平(3.16±0.14 vs 1.03±0.02)显著升高,差异具有统计学意义(t=51.37,11.82,均P<0.001)。与control组(IL-6:512.76±61.85 pg/ml,TNF-α:28.17±2.83 pg/ml,MCP-1:157.31±17.69 pg/ml)和vector组(IL-6:498.41±87.51 pg/ml,TNF-α:26.35±5.47 pg/ml,MCP-1:165.52±16.87 pg/ml)比较,pcDNA-PRKD2组IL-6(301.86±21.85 pg/ml),TNF-α(11.06±4.12 pg/ml),MCP-1分泌量(81.45±9.03pg/ml)显著减少,差异具有统计学意义(F=7.51,10.47,61.97,均P<0.01)。与control组(Caspase-3:689.65±79.5U/L,细胞凋亡率:22.31%±2.69%)和vector组(Caspase-3:715.91±113.58 U/L,细胞凋亡率:21.07%±3.28%)比较,pcDNA-PRKD2组Caspase-3活性(437.64±104.76 U/L)和细胞凋亡率(8.41%±3.15%)下降,差异具有统计学意义(F=2.35,79.13,均P<0.01)。与control组(SIRT1:1.01±0.05,HIF-1α:1.03±0.07)和vector组(SIRT1:0.97±0.05,HIF-1α:1.02±0.03)相比,pcDNA-PRKD2组SIRT1蛋白(3.51±0.15)水平升高,HIF-1α蛋白(0.37±0.07)水平降低,差异具有统计学意义(F=31.54,8.31,均P<0.01)。结论FTO介导m6A修饰的PRKD2通过SIRT1/HIF-1α通路抑制高糖诱导的足细胞炎症反应和细胞凋亡。

非小细胞肺癌组织中肥胖基因FTO的表达水平及其对肿瘤细胞血管生成的影响

目的观察脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对非小细胞肺癌(NSCLC)血管生成的作用并探讨机制。方法RT-qPCR检测45个NSCLC组织和癌旁组织中FTO的表达水平,蛋白免疫印迹观察组织中FTO的蛋白表达,分为癌旁和NSCLC组。使用shRNA敲低FTO,分为sh-NC和sh-FTO组。RT-qPCR检测5个肺癌细胞系和气道上皮细胞中FTO的表达水平,蛋白免疫印迹观察细胞中FTO的蛋白表达。细胞计数试剂盒8(CCK-8)和荷瘤实验分别检测FTO对NSCLC细胞在体外和体内增殖能力的影响。Tube形成实验观察小管形成的长度。结果FTO在45例NSCLC组织中的mRNA和蛋白表达高于癌旁组织(均P<0.05)。FTO的体外肺癌细胞表达同样高于气道上皮细胞(均P<0.05)。敲低FTO(sh-FTO)抑制NSCLC细胞在体内和体外的增殖(均P<0.05),且敲低FTO抑制NSCLC细胞的小管形成长度(P<0.05)。结论FTO在NSCLC组织中的表达高于癌旁组织。低表达FTO通过抑制增殖和血管新生影响NSCLC的发生和发展。

提高m^(6)A去甲基化酶FTO表达抑制鼻咽癌细胞增殖

目的探究N6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶人类脂肪和肥胖相关(FTO)蛋白在鼻咽癌(NPC)中的表达水平,以及过表达FTO对鼻咽癌体内外增殖的影响。方法用免疫组织化学检测鼻咽癌组织及癌旁组织中FTO蛋白的表达;筛选FTO的优势表达细胞株,构建过表达FTO细胞株,用软琼脂增殖实验验证;建立小鼠成瘤模型,测量肿瘤的生长速度。结果发现FTO在鼻咽癌组织中较癌旁组织低表达。FTO低表达促进了鼻咽癌细胞的增殖,而过表达FTO则可逆转这种作用。结论FTO抑制鼻咽癌细胞的增殖过程,可为寻找鼻咽癌的治疗靶点提供实验依据,FTO可能成为未来NPC的治疗靶点。

m6A去甲基化酶在脑梗死病人体内表达及过表达FTO对神经元细胞凋亡和缝隙连接蛋白的影响

目的探讨N6-甲基腺苷(m6A)去甲基化酶肥胖相关蛋白(FTO)对脑梗死神经元细胞凋亡、缝隙连接蛋白43(Cx43)和缝隙连接蛋白36(Cx36)表达的影响。方法收集2017年1月—2018年12月海南医学院第二附属医院神经内科病房收治的63例脑梗死病人的外周血血液样本,从体检中心收集68名健康体检者的外周血血液样本,聚合酶链反应(qPCR)检测血液中m6A去甲基酶(ALKBH5)和FTO的mRNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测ALKBH5和FTO的蛋白水平。使用颈内动脉结扎手术法建立脑梗死模型小鼠,以假手术处理为假手术组,苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织变化;蛋白免疫印迹法检测小鼠脑组织中FTO、ALKBH5、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、活性caspase-3(cleaved-caspase-3)、Bcl-2相关蛋白x(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病x基因长片段(Bcl-xl)、Cx43、Cx36、磷酸化Cx43(p-Cx43)和磷酸化Cx36(p-Cx36)的表达。体外培养小鼠海马神经元细胞(HT-22),进行缺血缺氧处理并转染FTO的过表达质粒(pcDNA3.1-FTO,pcFTO)及其阴性对照组(pcNull)。HT-22细胞分为对照组、缺血组、缺血+pcFTO组、缺血+pcNull组、pcFTO组、pcNull组。蛋白免疫印迹法检测HT-22细胞中的FTO、ALKBH5、caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-xl、Cx43、Cx36、p-Cx43和p-Cx36的表达,流式细胞术检测HT-22细胞凋亡率变化。结果FTO在脑梗死病人体内表达下调(P<0.05),ALKBH5无变化(P>0.05);小鼠脑梗死模型组脑部凋亡特征增加,凋亡标记物cleaved-caspase-3、Bax,缝隙连接蛋白Cx43表达上调,而Bcl-xl表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组中FTO、磷酸化的Cx43表达下调(P<0.05),但磷酸化的Cx36水平差异无统计学意义(P>0.05)。缺血诱导的HT-22细胞过表达FTO后,细胞凋亡率明显降低(P<0.05),cleaved-caspase-3、Bax、Cx43表达下调,Bcl-xl表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05),磷酸化的Cx43表达上调(P<0.05)。结论过表达m6A去甲基化酶FTO可改善缺血诱导的脑梗死和神经元细胞的凋亡并抑制Cx43介导的缝隙连接。

M6A去甲基化酶FTO在脑胶质瘤中的表达及其与病人预后的关系

目的探讨6-甲基腺嘌呤(m6A)去甲基化酶肥胖相关蛋白(FTO)在脑胶质瘤中的表达及其与病人生存预后的关系。方法选取2015年1月至2017年8月手术切除的脑胶质瘤标本84例(WHOⅡ级24例,Ⅲ级14例,Ⅳ级46例)和颅脑损伤内减压术中获取的非肿瘤脑组织40例为对照。免疫印迹法和免疫组化法检测组织FTO表达水平。胶质瘤病人随访截止2022年8月,计算总生存期。结果免疫组化染色显示,WHO分级Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤组织FTO高表达率分别为20.83%(5/24)、50.00%(7/14)、73.91%(34/46),均明显高于非肿瘤脑组织[10%(4/40);P<0.05];而且,WHO分级Ⅳ级胶质瘤FTO过表达率明显高于Ⅱ级胶质瘤(P<0.05)。免疫印迹法检查结果显示脑胶质瘤组织FTO蛋白表达水平明显高于非肿瘤脑组织(P<0.05)。截止随访结束,脑胶质瘤死亡30例,其中高表达组死亡18例,低表达组死亡12例。多因素logistic回归分析显示,FTO高表达是胶质瘤预后不良的独立危险因素(OR=3.794;95%CI 1.164~5.108;P<0.001)。生存曲线分析显示,FTO高表达组中位总体生存期较低表达组明显缩短(P<0.001)。结论脑胶质瘤组织m6A去甲基化酶FTO呈高表达,与病人不良生存预后有关。