何氏育麟方治疗卵巢储备功能下降作用机制的网络药理学和分子对接研究

卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)是指卵巢中剩余卵母细胞数量减少、质量下降,生育能力下降、性激素缺乏等^([1]),可进展为卵巢早衰,并出现一系列围绝经期症状,对女性远期心脑血管等健康造成威胁。目前对于DOR的临床治疗主要运用激素替代治疗、脱氢表雄酮、抗氧化剂补充等,但不能从根源上改善DOR患者的卵巢功能,且有一定的副作用^([2])。

育麟方治疗女性性功能障碍初探

中医学认为女性性功能障碍多因肾阳虚衰、肝气郁结所致,温肾养肝是治疗的基本大法。育麟方重在温补肾阳,并辅以柔养精血,故将此方用于治疗女性性功能障碍,在现代药理学探究亦有据可循。

何氏育麟方联合音乐疗法治疗卵巢储备功能下降的疗效观察及其对生殖激素及卵巢储备功能、血流的影响

目的:观察何氏育麟方联合音乐疗法治疗卵巢储备功能下降的临床疗效及其对生殖激素及卵巢储备功能、血流的改善作用。方法:纳入2018年12月—2021年1月在杭州市中医院就诊的60例卵巢储备功能下降肾亏血虚证患者,随机分为观察组30例,对照组30列,对照组采用何氏育麟方治疗,观察组在对照组治疗的基础上加用音乐疗法,治疗6个月后评价临床疗效,比较两组患者治疗前后证候评分、血清抗苗勒氏管激素(AMH)、血清黄体生成素(LH)、血清卵泡刺激素(FSH)、卵巢窦卵泡计数(AFC)及卵巢血流的改善情况。结果:治疗后两组患者临床疗效、证候评分、抗苗勒管激素(AMH)、血清黄体生成素(LH)、血清卵泡刺激素(FSH)、窦卵泡数及卵巢血流均较治疗前明显改善,观察组在临床疗效、中医证候评分、FSH、LH、卵巢血流方面改善均显著优于对照组(P<0.05),在抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数方面两组之间无明显差异(P>0.05)。结论:何氏育麟方联合音乐疗法治疗DOR疗效显著,可有效改善生殖激素水平及卵巢血流,减轻临床伴随症状,提高患者卵巢储备。

育麟方治疗女性肾虚型卵巢储备功能下降的临床研究

目的:观察育麟方治疗女性肾虚型卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)的临床疗效。方法:选择80例卵巢储备功能下降患者,采用随机数字表法将80例患者分为对照组(40例)和试验组(40例)。对照组给予雌二醇环丙孕酮片治疗,试验组给予育麟方中药治疗。观察两组患者中医症状评分(经少腹痛、月经延迟、经色暗或紫)、性激素水平、月经情况以及子宫内膜厚度的变化,并评价两组患者的临床疗效。结果:治疗后,试验组患者治疗总有效率(92.50%)明显高于对照组(67.50%),差异具有统计学意义(P<0.01)。治疗后,两组患者经少腹痛、月经延迟、经色暗或紫等中医症状评分较治疗前明显改善(P<0.05),且试验组患者中医症状评分水平改善情况优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。治疗后,两组患者的雌二醇、孕酮表达水平较治疗前明显升高(P<0.01),黄体生成素促卵泡激素表达水平明显降低(P<0.05),且试验组患者性激素改善情况优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。治疗后,两组患者的经期天数、月经量和子宫内膜厚度均较治疗前改善明显(P<0.05),且试验组患者月经情况和子宫内膜厚度改善情况优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:育麟方可有效调节患者月经情况,提高DOR患者卵巢储备功能,改善DOR患者性激素水平,临床疗效显著。

育麟方改善老龄雌性小鼠超促排卵作用的机制研究

[目的]观察育麟方对老龄导致卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)小鼠卵母细胞数量与体外受精率的影响。[方法]将70只6～7月龄的C57BL/6J雌性小鼠随机分为育麟方高剂量组、育麟方中剂量组、育麟方低剂量组、脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)组和老龄对照组;另外14只C57BL/6J性成熟雌性小鼠作为青年对照组。育麟方高、中、低剂量组分别用25.0g/kg·d、12.0g/kg·d、6.0g/kg·d育麟方浓缩液灌胃,DHEA组用10.2mg/kg·d的DHEA灌胃,青年对照组和老龄对照组每日均采用蒸馏水0.2mL/10g灌胃,共用药40d。用药第38天开始腹腔序贯注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)10U、人绒毛膜促性腺激素(human choionic gonadotophin,HCG)10U行控制性超促排卵,每组选择7只小鼠收集并比较卵母细胞数量;余下7只与C57BL/6J青年雄性小鼠行体外受精(in vitro fertilization,IVF),观察体外受精率;收集各组小鼠卵巢组织,并采用Western blot检测β-catenin、Wnt4蛋白表达。[结果]与青年对照组小鼠比较,老龄对照组小鼠卵巢指数、卵母细胞数量和成熟卵率显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01),受精率显著下降(P<0.01)。与老龄对照组比较,育麟方高剂量组、DHEA组小鼠卵巢指数明显升高(P<0.01),且育麟方高剂量组高于DEHA组(P<0.01);与老龄对照组比较,育麟方高剂量组、DHEA组卵母细胞数显著上升(P<0.01),且育麟方高剂量组高于DHEA组(P<0.05);育麟方高剂量组小鼠卵母细胞成熟卵率高于老龄对照组(P<0.05)。[结论]高剂量育麟方可以改善老龄所致的卵巢指数下降、增加卵母细胞数量和成熟卵率,从而提高体外受精率。

育麟方对肾阳虚大鼠排卵功能的影响

目的探讨育麟方对肾阳虚大鼠模型排卵功能的影响,并了解其药效学作用。方法大鼠肌注氢化可的松注射液36mg/kg×9d,再25mg/kg×5d造成肾阳虚证模型,随机分为模型组、西药组、育麟方低和高剂量组,另设10只大鼠为正常组。模型组和正常组均灌胃生理盐水,其余3组分别灌胃相应药物,连续15d,每日称体质量。于动情期取血,测定血浆β-内啡肽、血清E2和P含量。结果用药后育麟方高、低剂量组体质量显著高于其余组(P<0.05);β-内啡肽含量显著高于西药组(P<0.05),与正常组比较无显著性差异(P>0.05);育麟方高剂量组E2和P含量与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。结论育麟方能显著恢复造模后大鼠体质量、血浆β-EP、血清E2和P含量,作用优于克罗米芬或类似。

育麟方加减治疗不同年龄女性卵巢储备功能下降30例疗效观察

卵巢皮质区卵泡生长、发育形成可受精的卵母细胞的能力减弱,而导致女性月经失调、性激素的缺乏及生育能力的下降,称为卵巢储备功能下降（Decline in Ovarina Reserve,DOR）。近年来,随着生殖医学的迅速发展,对卵巢储备功能的研究也越来越深入。许多患者由于各种原因过早的出现月经先期或后期、量多或量少渐至闭经,

育麟方改善老龄小鼠卵巢储备功能的实验研究

高龄是导致卵巢储备功能下降（DOR）的主要原因，主要表现为卵巢内卵母细胞质量和数量的双重下降，进而导致女性生育能力下降。虽然辅助生育技术的开展为广大不孕不育家庭带来福音，但高龄DOR患者在控制性超排卵过程中往往表现为卵巢低反应。育麟方是浙江何氏妇科的代表方之一，治疗肾虚型不孕症，临床效果显著。本实验主要研究自然衰老致DOR的卵巢组织学特点及内分泌变化规律.

基于网络药理学及分子对接探讨育麟协定方调控细胞自噬的作用机制

目的基于网络药理学和分子对接研究育麟协定方调控细胞自噬的物质基础和分子生物学机制。方法运用TCMSP数据库筛选育麟协定方活性成分及靶标;运用DrugBank、GeneCards和OMIM数据库获取细胞自噬靶点;借助Venny2.1得到育麟协定方调控自噬靶标,运用Cytoscape软件构建育麟协定方-药物活性成分-靶标的互作网络图;运用STRING平台构建治疗靶标间互作网络图;运用Metascape数据库对治疗靶标行GO生物功能和KEGG通路富集分析;并运用RCSB PDB数据库和AutoDock软件对药物有效活性成分与关键靶标作分子对接。结果从育麟协定方中获得252个有效活性成分,得到165个育麟协定方调控细胞自噬的潜在靶标,这些靶标主要涉及细胞死亡的正向调节、转录调节、细胞对脂质的反应等生物学过程,并主要富集在TNF、IL17等信号通路上;分子对接验证显示关键成分与主要靶点对接得分均小于-6 kcal·moL^(-1),表明主要靶标与主要成分的结合活性较好。结论通过网络药理学及分子对接证实了育麟协定方多成分、多途径的作用特点,预测了育麟协定方可能通过TNF、IL-17信号通路等途径,从而调控细胞死亡、转录调节等生物学过程调控细胞自噬的可能作用机制,为进一步深入研究其活性成分和作用机制提供理论依据。

何氏育麟方联合中药督脉熏蒸对肾虚血瘀型反复着床失败患者临床疗效的研究

目的观察何氏育麟方联合中药督脉熏蒸治疗肾虚血瘀型反复着床失败(recurrent implantation failure,RIF)患者的临床疗效,并探讨其对患者临床妊娠率、胚胎种植率、激素水平、子宫动脉血流的影响。方法选取62例2017年2月-2018年9月期间就诊于宁波市妇女儿童医院的肾虚血瘀型RIF患者作为研究对象,采用随机数表法,分成对照组和观察组,各31例,2组年龄、病程等一般资料比较,差异无统计学意义(均P>0.05),具有可比性。对照组患者单纯给予阿司匹林肠溶片口服治疗,每片25 mg,每次1片,3次/d。观察组患者予何氏育麟方每天1剂,水煎服,早晚各一煎,每煎200 mL;联合中药督脉熏蒸治疗,隔日熏蒸1次。2组患者均连续治疗3个月经周期。对比2组患者治疗后的临床效果,计算临床妊娠率、胚胎种植率,监测黄体中期2组患者的血激素水平、子宫内膜厚度、子宫动脉血流。结果观察组的临床妊娠率为51.61%,与对照组(25.81%)相比明显升高;观察组的胚胎种植率为31.67%,与对照组的15.25%相比明显升高;观察组患者黄体中期的血雌二醇(E2)、黄体酮(P)水平、子宫B超情况明显优于对照组,以上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论何氏育麟方联合中药督脉熏蒸有利于提高肾虚血瘀型RIF患者的临床妊娠率和胚胎种植率,疗效确切,这与二者协同使用可改善子宫内膜容受性、降低子宫动脉血流阻力、调控激素水平、改善内分泌密切相关。

育麟方对卵巢储备功能减退大鼠卵巢颗粒细胞超微结构及功能的影响

目的:通过分组干预环磷酰胺所致的卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠,研究育麟方对卵巢颗粒细胞(GCs)超微结构的影响及可能机制。方法:腹腔注射环磷酰胺制备DOR成熟雌性SD大鼠模型,分成空白组,模型组,中药低、中、高剂量组,补佳乐组,分别灌胃21d,予动情前期处死,测定大鼠血清抑制素B(INHB)表达水平,计算卵巢指数,电镜观察各组GC超微结构。结果:与模型组比较,中药低、中剂量组及补佳乐组卵巢指数显著增高(P<0.05)。与模型组比较,中药低、中、高剂量组及补佳乐组血清INHB显著增高(P<0.05)。电镜下中药低剂量组GC胞体较大,糖原颗粒较多,具有成簇脂滴,线粒体形态正常,数量较多。结论:育麟方对DOR大鼠GC的超微结构具有改善作用,可改善颗粒细胞功能,促进INHB分泌,抑制卵泡凋亡,改善卵巢内卵母细胞的数量和质量,从而治疗DOR。

育麟方对卵巢储备功能降低大鼠颗粒细胞分泌功能的影响

目的:研究育麟方影响环磷酰胺致卵巢储备功能降低大鼠模型卵巢颗粒细胞的分泌功能的机制。方法:性成熟雌性SD大鼠参考文献制备卵巢储备功能降低大鼠模型,分为育麟方高、中、低剂量组,补佳乐组,模型组,正常组。正常组,模型组予蒸馏水20 m L·kg-1,补佳乐组予戊酸雌二醇片0.21 mg·kg-1,育麟方低、中、高组分别予育麟方生药15.2,30.4,60.8 g·kg-1ig 21 d后,予动情前期处死,放射免疫法测定大鼠血清卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)水平及抗苗勒管激素(AMH)表达水平,光镜下观察卵巢组织形态学变化,卵泡数目及黄体数目。结果:与正常组比较,模型组FSH,LH含量明显升高(P<0.05),AMH含量明显降低(P<0.05),各级卵泡数目,黄体数目明显减少(P<0.05);与模型组比较,育麟方治疗组大鼠血清FSH,LH水平明显减少(P<0.05),育麟方中剂量组及补佳乐组血清AMH水平明显增高(P<0.05),育麟方中、高剂量组的各级卵泡及黄体数量明显增多(P<0.05)。结论:育麟方可能通过影响卵巢储备功能降低模型鼠的颗粒细胞内分泌功能而改善其卵巢储备功能。

补肾养血中药对排卵障碍大鼠子宫卵巢组织形态学的影响

目的:探讨补肾养血的育麟方中药对肾阳虚大鼠模型子宫、卵巢组织形态学的影响,了解其药效学作用。方法:大鼠im氢化可的松注射液36 mg/kg×9 d,再25 mg/kg×5 d造成肾阳虚证模型,随机分为模型组、西药组、中药低剂量组、高剂量组,另设10只大鼠为正常组。分别灌胃ig15 d,每日称重。于动情期处死,取子宫、卵巢,称取子宫、卵巢重量、光镜下观察子宫、卵巢组织形态学变化。结果:各组大鼠子宫、卵巢指数均显著高于模型组P<0.05,中药高、低剂量组卵巢指数均显著高于正常组及西药组P<0.05;子宫指数则与正常组、西药组无差异P>0.05。中药高剂量组子宫内膜厚度、最大卵泡直径显著高于其他各组(P<0.05),低剂量组、西药组则显著低于正常组(P<0.05);发育卵泡数目、黄体数目除模型组外其余四组无显著差异(P>0.05)。结论:补肾养血中药能显著升高大鼠子宫、卵巢指数、改善大鼠子宫、卵巢组织形态,作用优于克罗米芬。

何嘉琳治疗卵巢储备功能下降的经验

[目的]总结何嘉琳教授治疗卵巢储备功能下降的临床经验。[方法]临床观察何嘉琳教授治疗卵巢储备功能下降患者的诊治过程,整理相关病例资料,总结何嘉琳教授的治疗思路及方法。[结果]何嘉琳教授认为本病以肾虚为本,兼及心肝脾多脏失调,治疗上以养血填精,固肾调冲为主,根据患者先天禀赋及临床表现,审因论治,攻补兼施,循机施治,灵活变通,疗效显著。[结论]何嘉琳教授治疗卵巢储备功能下降有独到的临床治疗经验,值得鉴赏。

何嘉琳治疗卵巢低反应经验探析

[目的]探讨何氏妇科第四代传人何嘉琳教授运用何氏妇科传统经验方治疗现代辅助生育领域疾病"卵巢低反应"的特色经验。[方法]通过门诊跟师学习,整理何嘉琳教授诊治卵巢低反应的相关医案,从病因病机、处方用药等方面探析总结何嘉琳教授治疗卵巢低反应的临证经验,并附验案一则。[结果]何嘉琳教授认为卵巢低反应的中医病机以肾精亏虚为主,胚胎移植过程中超促排卵进一步加剧肾精消耗,故而出现获卵数少,雌二醇低,卵泡质量差等一系列临床症状。其治疗应以滋肾填精为根本,同时需注重清心养心,做到心肾同治;还应结合胚胎移植过程的各个不同的阶段,包括进周前、取卵前、扳机期、取卵后、移植前、移植后期,发挥中医药特色,分期论治,从而增加胚胎移植的成功率。文中所附一则医案属于典型的肾虚型卵巢低反应病例,何教授治疗时以"何氏育麟方"为基础方,滋肾填精,补肾助孕,配合血肉有情之品,调治成特色膏方,图治半年余,终使其取卵移植成功,多年不孕得愈。[结论]何嘉琳教授抓住病机,运用何氏妇科传统经验辨证分期论治现代辅助生殖疾病范畴疾病"卵巢低反应",疗效卓著,值得借鉴。