柚皮苷可通过多种途径修复猪胸膜肺炎放线杆菌诱导的小鼠肺上皮屏障损伤

旨在研究柚皮苷(naringin,NAR)对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染引起小鼠肺上皮屏障损伤的防治效果。将40只6~8周龄的雄性昆明小鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、NAR低剂量组、NAR中剂量组以及NAR高剂量组。连续灌胃给药8 d,空白组和模型组给予生理盐水。在第7天,小鼠以气管插管灌注的方式感染APP(1×10^(8)CFU·mL^(-1),100μL·只^(-1)),空白组灌注等体积无菌生理盐水,各组小鼠于造模后48 h处死,采样并评估NAR的防治作用。通过X射线图像表明,NAR可降低小鼠肺泡灌洗液中APP载菌量,并且能够缓解肺部病理损伤;此外,NAR干预后,可逆转由于APP诱导的小鼠肺组织中ZO-1、Occludin-1和Claudin-1紧密连接蛋白的表达降低,从而促进肺上皮屏障修复。为进一步探讨NAR促进肺上皮屏障修复的机制,研究发现NAR不仅减少小鼠肺组织中促炎因子IL-6和TNF-α的分泌,还增加了抑炎因子IL^(-1)0表达,同时能够增加抗氧化酶SOD2和Hmox1表达,表明NAR能够增强机体抗炎及抗氧化能力;此外,NAR可抑制TGF-β1/Smad2/3通路,减少由APP诱导的肺纤维组织增生;通过分析凋亡相关关键蛋白和Tunel荧光标记发现,NAR可呈剂量依赖性的减少细胞凋亡。综上所述,NAR可通过抗炎、抗氧化、抗纤维化和抗凋亡等途径,修复小鼠肺上皮屏障损伤,从而有效逆转APP诱导的肺部炎症损伤、发挥防治APP的功效。

MIRO1修饰的人脐带间充质干细胞通过线粒体自噬修复肺上皮细胞损伤的实验研究

背景间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)为急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的治疗修复提供了新的策略,目前单独的MSCs治疗效果欠佳,需要探索增强MSCs疗效的方法。目的探讨过表达MIRO1(mitochondrial Rho GTPase 1,Rhot1)的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)对脂多糖诱导的人肺支气管上皮细胞(bronchial epithelium transformed with Ad12-SV402B,BEAS-2B)损伤的治疗作用。方法包装过表达MIRO1的慢病毒,通过慢病毒感染构建过表达MIRO1的hUCMSCs稳转细胞株;实验细胞随机分为4组:对照组(Control)、脂多糖组(LPS)、脂多糖+人脐带间充质干细胞组(Con-hUCMSCs)、脂多糖+过表达MRIO1的人脐带间充质干细胞组(MIRO1-hUCMSCs)。脂多糖刺激BEAS-2B细胞24 h,通过Transwell小室分别与Con-hUCMSCs和MIRO1-hUCMSCs细胞共培养24 h,收集BEAS-2B细胞并使用Western blot和RT-qPCR实验方法检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin,IL-1β)、IL-6和线粒体自噬相关蛋白(PINK1、PARKIN、MIRO1、SQSTM1)表达水平。结果成功筛选获得过表达MIRO1的hUCMSCs稳转细胞株。通过Transwell小室共培养,MIRO1-hUCMSCs组可抑制脂多糖组炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的升高(P<0.05),恢复线粒体自噬蛋白PINK1、SQSTM1、MIRO1的低表达(P<0.05),降低PARKIN蛋白高表达(P<0.05)。MIRO1-hUCMSCs组相比LPS组、Con-hUCMSCs组治疗有统计学差异(P<0.05)。结论MIRO1修饰的hUCMSCs与单纯hUCMSCs相比,可通过调节线粒体自噬PINK1-Parkin通路中的PINK1、PARKIN、MIRO1和SQSTM1蛋白改善脂多糖引起的BEAS-2B细胞损伤。

青藤碱在JNK/c-Jun信号通路中对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的:探究青藤碱(SIN)通过JNK/c-Jun信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法:培养肺上皮细胞MLE-12,通过CCK-8检测SIN的毒性。流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光检测自噬体形成数量,Western blot检测细胞中凋亡、自噬以及JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达水平。结果:LPS造模后,细胞凋亡率和自噬体数量升高,Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1蛋白水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-JNK/JNK和p-c-Jun/c-Jun均升高(P<0.05);Bcl-2、P62蛋白水平均降低(P<0.05)。SIN处理可明显改善LPS对细胞凋亡和自噬的影响,以及对JNK/c-Jun信号通路的调控(P<0.05)。细胞自噬抑制剂3-MA或JNK激动剂ANISO处理均可部分逆转SIN对LPS诱导的肺上皮细胞的保护作用(P<0.05)。结论:SIN可通过调控JNK/c-Jun信号通路相关蛋白提高细胞自噬,保护被LPS损伤的肺上皮细胞。

牛冠状病毒感染新生犊牛肺上皮细胞模型的建立

[目的]牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是犊牛腹泻和上呼吸道疾病的主要病原,目前缺少敏感的适合BCoV体外培养的本动物细胞,限制了BCoV致病机制的深入研究。因此,本研究拟从犊牛肺脏组织中分离出牛肺上皮细胞(bovine lung epithelial cell,BLEC)建立BCoV体外感染本动物细胞模型。[方法]采用胰蛋白酶和Ⅰ型胶原蛋白酶两步酶消化法对新生犊牛肺脏组织进行肺上皮细胞初步提取,再利用上皮细胞贴壁时间不同的差异贴壁法纯化BLEC。通过间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)检测纯化后细胞中标志细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK-18)的表达来鉴定BLEC,并通过PCR方法对细胞进行病原纯净性检测,包括牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)、BPIV5、牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)、BCoV和支原体(Mycoplasma)。通过PCR和IFA检测BCoV对BLEC的易感情况,并绘制BCoV在BLEC上的一步生长曲线。[结果]分离纯化培养的BLEC形态均匀稳定、呈菱形或砖块状,无常见病原BRV、BVDV、BPIV3、BPIV5、IBRV、BCoV和支原体污染,上皮细胞标志CK-18呈阳性表达。犊牛腹泻来源的BCoV HLJ-325毒株感染BLEC 24 h后可观察到明显的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE);PCR能扩增出BCoV N基因;IFA结果显示,BCoV感染BLEC呈现特异性红色荧光。通过实时荧光定量PCR检测BCoV含量建立病毒生长曲线,BCoV在感染BLEC后20 h时病毒载量最高,为4.46×10^(5)拷贝/mL。[结论]本研究成功分离制备了BLEC,证明BCoV易感染BLEC,构建了BCoV体外感染BLEC模型,为研究BCoV引起牛呼吸道疾病的致病机制奠定基础。

T3SS通过ERK/ROS信号通路促进铜绿假单胞菌侵袭肺上皮细胞的作用

目的探究Ⅲ型分泌型系统(type three secretion system,T3SS)在调控铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)侵袭肺上皮细胞中的作用及具体机制。方法采用PA菌株感染人非小细胞肺癌A549细胞,分为未处理组、PAO1(PA实验室标准菌株)组、△exsA(缺失与T3SS转录激活相关的基因exsA)组、△pscJ(缺失与T3SS蛋白分泌相关基因pscJ)组和PAO1-E(经EGTA诱导后高表达T3SS基因)感染组。采用U0126抑制A549细胞ERK活性或通过apocynin(APO)/N-acetyl-L-cysteine(NAC)抑制A549细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生并随后感染PAO1或PAO1-E菌株,分为未处理组、PAO1或PAO1-E感染组、抑制剂处理组,以及抑制剂联合PAO1或PAO1-E感染组。选用庆大霉素杀伤胞外细菌并将细胞裂解液倍比稀释后涂布PA筛选平板,通过计数菌落形成单位(CFUs),明确PA感染后细胞内的细菌量;通过荧光探针标记以及流式细胞术检测感染后细胞内ROS水平;通过Western blot检测感染后ERK通路的活化情况。结果与PAO1感染组相比,△exsA和△pscJ感染组的细胞内细菌量减少(P<0.05,P<0.01),且伴随ROS产生减少(P<0.01),而PAO1-E感染组则呈现相反趋势(P<0.01)。PAO1或PAO1-E感染联合APO/NAC处理组的细胞内细菌量明显低于PAO1或PAO1-E感染组(P<0.01)。相较PAO1感染组,△exsA和△pscJ感染组的ERK磷酸化水平增加(P<0.01),而PAO1-E感染组的ERK磷酸化降低(P<0.01)。与PAO1感染组相比,PAO1联合U0126处理组的细胞ERK磷酸化水平降低,伴随ROS产生以及细胞内细菌量增加(P<0.01)。结论T3SS介导ERK通路抑制可通过促进肺上皮细胞ROS产生,增加PA对肺上皮细胞侵袭。

METTL3介导的PDK1 mRNA m^(6)A修饰通过Akt/mTOR信号通路促进肺上皮细胞增殖

腺苷N6-位点甲基化(m^(6)A)在细胞增殖过程中发挥重要作用。RNA甲基转移酶3(METTL3)作为催化m^(6)A关键酶,其介导m^(6)A修饰在肺上皮细胞增殖中的作用机制尚不明确。本研究旨在探讨METTL3介导m^(6)A修饰调控肺上皮细胞增殖的效应及机制。结果显示,在肺上皮细胞中敲低METTL 3显著抑制细胞生长,而过表达METTL3则促进了细胞增殖(P<0.05)。进一步的蛋白质免疫印迹结果显示,细胞生长和增殖的关键蛋白质PCNA在METTL 3敲降的肺上皮细胞中蛋白质水平的表达显著下调,并且Akt以及mTOR的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。细胞免疫荧光结果发现,METTL 3敲降的肺上皮细胞中m^(6)A修饰水平显著降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹结果表明,Akt-mTOR信号通路上游调控分子PDK1的mRNA和蛋白质表达水平在METTL 3敲降的肺上皮细胞中显著下降(P<0.05)。机制上,m^(6)A-IP-qPCR和RIP-qPCR结果进一步表明,METTL3催化PDK 1 mRNA的3′UTR区域m^(6)A修饰,进而被YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)识别,增强其mRNA的稳定性。总之,本研究揭示了METTL3通过增强PDK1 m^(6)A修饰,进而激活Akt-mTOR信号通路,促进细胞增殖。本研究为METTL3在上皮细胞增殖中的新角色提供了证据,同时为治疗肺上皮细胞损伤修复提供了新的治疗靶点。

IL-17抑制铜绿假单胞菌感染肺上皮细胞的机制研究

铜绿假单胞菌是常见的致病菌,白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)家族细胞因子直接参与宿主免疫应答,是宿主防御感染或炎症的关键介质。利用重组人IL-17蛋白处理铜绿假单胞菌PAO1,探索其对肺上皮细胞A549的侵袭作用。结果发现,在不影响细菌生长和细胞增殖的情况下,IL-17能够抑制PAO1对A549细胞的入侵。利用转录组测序分析IL-17对PAO1转录组的改变,探索IL-17影响PAO1入侵宿主细胞的作用机制。结果表明,有210个差异基因表达上调,123个表达下调;GO功能分析显示差异基因主要富集在肽酶活性、蛋白结合和蛋白水解等方面;KEGG富集分析显示,差异基因涉及RNA降解、生物膜形成、微生物代谢、ABC转运以及碳代谢等通路。此外,生物膜形成实验进一步证实了IL-17能够降低PAO1生物膜的形成。研究结果为耐药铜绿假单胞菌在临床感染造成的相关疾病的治疗提供了新思路和理论基础。

应激颗粒调控镉诱导的肺上皮细胞凋亡

目的探究应激颗粒调控环境金属镉暴露诱导肺上皮细胞凋亡的生物学功能。方法将肺上皮细胞暴露于氯化镉,收集细胞进行PI/AnnexinV染色后使用流式细胞术检测氯化镉暴露后肺上皮细胞凋亡情况。通过免疫荧光实验检测应激颗粒的生成情况,Western Blot实验检测目的蛋白嘌呤霉素、真核翻译起始因子2亚基α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)、eIF2α磷酸化(p‑eIF2α)的表达水平。结果氯化镉暴露可以诱导肺上皮细胞发生凋亡。应激颗粒生成可抑制氯化镉诱导的肺上皮细胞凋亡。应激颗粒的形成伴随着eIF2α的磷酸化,抑制eIF2α磷酸化后应激颗粒生成减少。结论eIF2α磷酸化介导的应激颗粒形成可以调控氯化镉暴露引起的肺上皮细胞凋亡。

炎性肺上皮细胞模型中右美托咪定与JAK2/STAT3信号通路的相关性

目的研究右美托咪定(DEX)在白细胞介素-6(IL-6)诱导的炎性肺上皮细胞模型中对Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的作用及机制。方法使用IL-6处理MLE12细胞构建炎性肺上皮细胞模型,采用随机数表法将细胞分成5组:空白对照组(C组)培养基中无干预培养96 h;IL-6组(I组)向培养基中加入50 ng/mL IL-6;IL-6+右美托咪定组(I+D组)向培养基中加入50 ng/mL IL-6,24 h后向培养基中加入10μM DEX;IL-6+HY-121488组(I+H组)向培养基中加入gp130激动剂HY-12148850μM后再向培养基中加入50 ng/mL IL-6;IL-6+HY-121488+DEX组(I+H+D组)向培养基中加入50μM HY-121488后向培养基中加入50 ng/mL IL-6,24 h后向培养基中加入10μM DEX。72 h后收集各组细胞用于实验检测。采用PCR检测细胞IL-6、JAK2、STAT3的mRNA表达水平。结果与C组比较,I组IL-6、JAK2、STAT3 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与I组比较,I+D组IL-6、JAK2、STAT3 mRNA表达水平均降低(P<0.05);与I+D组比较,I+H+D组IL-6、JAK2、STAT3 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与I组比较,I+H组IL-6、JAK2、STAT3 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与I+H组比较,I+H+D组IL-6、JAK2、STAT3 mRNA表达水平均降低(P<0.05)。结论右美托咪定通过调控gp130介导的JAK2/STAT3信号通路减轻炎症反应,对肺组织发挥保护作用。

肺上皮干/祖细胞种类和研究方法进展

分离和鉴定肺上皮干/祖细胞,深入了解他们在肺脏生理病理条件下的具体作用机理,对于防治包括肺癌在内的肺脏疾病有重要意义。本综述介绍了已鉴定的肺上皮干/祖细胞种类和肺上皮干/祖细胞研究方法的最新进展,前者具有区域特异性,主要包括位近端气道的基底细胞和导管细胞,位细支气管的Clara细胞、变异Clara细胞、细支气管肺泡干细胞和诱导出的krt5^+细胞及位肺泡的II型肺泡上皮细胞和II型肺泡上皮祖细胞;后者主要包括肺损伤模型、谱系示踪技术、三维培养技术、移植、慢性标记细胞法及单细胞转录组学分析等。最后简述了肺上皮干/祖细胞与肺癌的关系以及肺癌干细胞靶向药物治疗进展。

肿瘤来源外泌体通过激活肺上皮细胞TLR3促进肺转移前微环境形成

肿瘤转移是肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤转移前微环境是指原发灶肿瘤能通过肿瘤来源物质动员和募集骨髓来源细胞到转移靶器官，与靶器官中基质细胞的协同作用，创造利于肿瘤细胞定居的“土壤”。多种骨髓来源细胞（如中性粒细胞等）被证实参与了转移前微环境的形成。

我国两城市空气细颗粒物PM_2.5污染及对肺上皮细胞炎性因子的影响

[目的]比较北京和太原细颗粒物PM2.5 污染水平及研究其炎性损伤毒性。[方法]选取我国具有典型污染特征的两大城市太原与北京 ,采用分级采样器和重量法收集两城市空气中细颗粒物样品 ,用甲醇超声提取细颗粒物上的B(a)P ,硝酸和过氧化氢溶解Pb ,从质量浓度、B(a)P、Pb含量等方面比较分析了两城市细颗粒物污染水平 ;同时用ELISA及RT_PCR法 ,测定细颗粒物对人肺泡上皮细胞 (A549)产生的炎性因子IL_6、TNF_α表达的影响。[结果]以美国EPA大气环境质量PM2.5 标准为参考 ,PM2.5 太原冬季、北京冬季超标率、超标倍数分别为100 % ,4.23 ;90.6 % ,2.62。太原冬季、北京冬季空气中B(a)P浓度分别为5.86 ,1.09( μg/100m3) ,均超过我国标准。总之 ,太原细颗粒物污染高于北京。细颗粒物能引起人肺上皮细胞产生炎性因子IL_6、TNF_α及其mRNA的表达增加 ,而且呈现剂量_效应关系。[结论]上述两城市的细颗粒物污染严重 。

大气细颗粒物PM_(2.5)诱导肺上皮MLE-12细胞的氧化应激和自噬

目的研究大气细颗粒物PM2.5对小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞的氧化应激和自噬的影响。方法用采集和处理的2009年北京市细颗粒物PM2.525,50,100和200 mg.L-1暴露处理MLE-12细胞24和48 h,用MTT比色法测定细胞存活率,双乙酰基二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧类(ROS)自由基生成,Western蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3Ⅰ蛋白(LC3Ⅰ)和LC3Ⅱ表达,激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体的形成。结果与细胞对照组比较,PM2.5100和200 mg.L-1处理24 h组细胞存活率明显降低,分别降低28%和33%(P<0.01);暴露处理48 h,PM2.525～200 mg.L-1组细胞存活率均明显下降(P<0.01),并呈浓度效应关系(R2=0.4940,P<0.01)。PM2.5100和200 mg.L-1处理MLE-12细胞3 h,胞内ROS水平较细胞对照组显著升高,分别升高27.6%和60.7%(P<0.01)。此外,PM2.5100 mg.L-1处理细胞12,24和48 h及PM2.550,100和200 mg.L-1处理细胞24 h细胞自噬标志物LC3Ⅱ蛋白表达均明显增强,呈现明显的时间效应(R2=0.9150,P<0.01)和浓度效应(R2=0.6338,P<0.01)关系。PM2.5100 mg.L-1处理24 h细胞内自噬体荧光强度明显升高(P<0.05),细胞核周边有明显的自噬泡环绕。结论 PM2.5诱导肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞的氧化应激,并引发细胞自噬。

人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导人肺上皮细胞凋亡

目的 探讨人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导体外培养的人肺上皮细胞A549凋亡 ,以及提取物浓度和作用时间与细胞凋亡的相互关系。 方法 根据四氮唑盐酶还原法 (MTT)结果 ,选用 5种不同浓度的提取物诱导人肺上皮细胞凋亡。分别在诱导后的 5个时间段 ,采用苏木素 伊红 (HE)染色盲法计数和二苯胺法检测DNA断裂率 ,观察肺上皮细胞凋亡情况。同时对某个时间和浓度组的样本 ,用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果不同浓度人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导A549细胞凋亡 ,在 5h之内细胞凋亡率随提取物浓度增加而增加 ,两者呈正相关关系 ,且细胞凋亡率显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,5h细胞凋亡率达高峰 (65 2 % )。 结论 人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物可诱导人肺上皮细胞凋亡 ,细胞凋亡与其提取物浓度呈明显的相关关系。在时间上表现为双向变化关系 。

肺上皮样血管内皮瘤的临床病理观察

目的探讨肺上皮样血管内皮瘤(pulmonaryepithelioidhemangioendothelioma,PEH)的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法对3例PEH进行光镜观察和免疫组化标记,并结合文献进行分析。结果镜下见肿瘤细胞具有上皮样或组织细胞样形态,瘤细胞为圆形或多角形,呈小巢状、索状甚至腺样结构或不规则状,分布于黏液间质中;间质可见少量黏液样变或玻璃样变;瘤细胞内含有原始血管腔,核分裂象、多形性及坏死少见。肿瘤细胞表达CD34、FⅧRAg、CD31等血管内皮细胞标记,部分病例同时表达CK和(或)Vim。结论PEH是一种低度恶性肿瘤,其病理形态具有一定的特征性,诊断时需要与肺转移癌、肺上皮样血管肉瘤、肺淋巴管肌瘤病鉴别。

百草枯诱导肺上皮细胞上皮间质转化促进肺纤维化

目的观察百草枯(PQ)诱导人肺上皮HPAEpiC细胞发生上皮间质转化(EMT)作用及其调节机制。方法MTT法计算PQ对HPAEpiC细胞的半数抑制浓度(IC50)值,计算最适合诱导HPAEpiC细胞发生EMT的浓度,Transwell检测证实PQ诱导肺上皮细胞体外迁移能力增强,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转化生长因子-β(TGF-β)变化。实时聚合酶链式反应(Real time-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测细胞EMT标志物及TGF-β下游信号通路变化。结果 PQ对HPAEpiC细胞的IC50值为95.3μmol/L,与DMSO对照组比较,PQ可以诱导肺上皮HPAEpiC细胞形态发生EMT改变,并增加其体外迁移能力,PQ可以促进肺上皮HPAEpiC细胞TGF-β的分泌,并增加其下游Smad2/3、抑制Smad7的蛋白表达;PQ也可以增加间质性标志物N-cadhenrin、波形蛋白(Vimentin)及基质金属蛋白酶2(MMP2)表达,抑制上皮性标志物E-cadherin表达。结论 PQ在促进人肺上皮HPAEpiC细胞死亡的同时促进其向EMT转化,提示PQ诱导肺纤维化的一种新机制。

丹酚酸B对肺上皮细胞凋亡和急性肺损伤的影响

目的探索丹酚酸B对肺上皮细胞凋亡和急性肺损伤的影响。方法采用Hoechst染色法和流式细胞法测定肺上皮细胞NCI-H292的凋亡率;采用内毒素脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤炎症。结果 Hoechst染色显示丹酚酸B预处理对H2O2诱导NCI-H292细胞凋亡呈浓度依赖保护;流式细胞法测定显示与模型组对照,丹酚酸B作用后呈剂量依赖抑制H292细胞凋亡。整体试验发现丹酚酸B静脉注射均呈剂量依赖抑制LPS诱导的小鼠支气管肺炎症反应,减少支气管灌流液中白细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞。结论离体实验和整体实验证明丹酚酸B有明显的抗凋亡和抗炎作用,对进一步深入研究其治疗肺部炎症损伤的作用和机制具有重要意义。

微小RNA靶向胰岛再生源蛋白3A对肺上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的检测重症肺炎患儿血清中可能靶向抑制胰岛再生源蛋白3A(REG3A)的miRNA表达情况,并探究miR-137与miR-342-3p对肺上皮细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法qRT-PCR检测重症肺炎患儿和健康儿童血清样本中相关miRNA和REG3A mRNA表达;将肺上皮细胞A549随机分为空白对照组、miR-137 NC组、miR-137 mimic组、miR-342-3p NC组、miR-342-3p mimic组,qRT-PCR检测miR-137、miR-342-3p和REG3A mRNA表达,Western blot检测REG3A、Caspase-3、Bcl-2、Bax和p53蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性,CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果重症肺炎患儿血清中miR-425-5p、miR-137、miR-325-3p、miR-342-3p、miR-203a-3p及miR-9-3p相对表达量均高于健康儿童,而REG3A mRNA相对表达量低于健康儿童(P<0.05);miR-137、miR-342-3p均与REG3A 3′-UTR存在碱基互补现象,并靶向调控其表达(P<0.05);miR-137过表达和miR-342-3p过表达均能够使A549细胞增殖活性和EdU阳性细胞率降低、细胞凋亡率升高,Caspase-3、Bax和p53蛋白表达增加而Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05)。结论miR-137和miR-342-3p可能通过靶向REG3A抑制肺上皮细胞增殖,并促进细胞凋亡。

周期性机械拉伸对人肺上皮细胞增殖的影响

为了研究周期性拉伸应变对人肺上皮细胞DNA合成的影响 ,应用流式细胞术对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行了分析。结果表明 :在应变为 15 % ,频率为 2 0次 /min、4 0次 /min的拉伸刺激下 ,在 2 4h ,正常人支气管上皮细胞H72 7的增殖活性指数明显降低 ,细胞的DNA合成受到显著抑制 ;4 8h后 ,人肺腺癌细胞A5 49的增殖活性明显降低 ,且拉伸时间越长 ,抑制作用越强。提示周期性拉伸应变抑制人肺上皮细胞的增殖。