甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)感染引起肺上皮细胞损伤与Nod样受体蛋白3(Nod like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体介导的炎症反应及细胞焦亡相关。褪黑素对NLRP3炎症小体的激活具有抑制作用,为研究褪黑素对AV诱导肺上皮细胞...甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)感染引起肺上皮细胞损伤与Nod样受体蛋白3(Nod like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体介导的炎症反应及细胞焦亡相关。褪黑素对NLRP3炎症小体的激活具有抑制作用,为研究褪黑素对AV诱导肺上皮细胞损伤的保护作用及机制,本研究通过细胞实验观察褪黑素通过抑制NLRP3介导的炎症反应及细胞焦亡减轻IAV诱导肺上皮细胞损伤。培养小鼠肺上皮细胞株MLE-12,按照MOI=0.2感染IAV,给予800μmol/L褪黑素或/和1.28μmol/L NLRP3激动剂BMS-986299干预,24h后检测细胞活力,细胞中细胞核增殖抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N的mRNA表达和蛋白表达,培养基中白介素(Interleukin,IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)的水平。结果显示,IAV组细胞活力、细胞中PCNA的mRNA表达和蛋白表达水平低于对照组,细胞中NLPR3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、GSDMD N端结构域(Gasdermin D-N,GSDMD-N)的mRNA表达和蛋白表达水平、培养基中乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)、IL-1β、IL-18、TNF-α的水平高于对照组(P<0.05);褪黑素组细胞活力、细胞中PCNA的mRNA表达和蛋白表达水平高于IAV组,细胞中NLPR3、Caspase-1、GSDMD-N的mRNA表达和蛋白表达水平、培养基中LDH、IL-1β、IL-18、TNF-α的水平低于IAV组(P<0.05);NLRP3激动剂组细胞活力、细胞中PCNA的mRNA表达和蛋白表达水平低于IAV组,细胞中Caspase-1、GSDMD-N的mRNA表达和蛋白表达水平、培养基中LDH、IL-1β、IL-18、TNF-α的水平高于IAV组(P<0.05),NLPR3的mRNA表达和蛋白表达水平与IAV组比较无显著性差异(P>0.05);褪黑素+NLRP3激动剂组细胞活力、细胞中PCNA的mRNA表达和蛋白表达水平低褪黑素组,细胞中Caspase-1、GSDMD-N的mRNA表达和蛋白表达水平、培养基中LDH、IL-1β、IL-18、TNF-α的水平高于褪黑素组(P<0.05),NLPR3的mRNA表达和蛋白表达水平与褪黑素组比较无显著性差异(P>0.05)。以上结果表明,褪黑素组减轻IAV诱导肺上皮细胞损伤,相关的分子机制是抑制NLRP3炎症小体介导的炎症反应和细胞焦亡。展开更多
