瑞巴匹特抑制脂多糖诱导肺上皮细胞株A549表达TLR4和释放TNF-α

目的:研究瑞巴匹特对肺上皮细胞株A549细胞TLR4表达及分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。方法:用脂多糖(LPS)建立体外A549细胞体外炎症损伤模型,实验分为对照组(无干预无刺激)、模型组(LPS刺激)、干预组1(LPS和10mg/L瑞巴匹特)、干预组2(LPS和30mg/L瑞巴匹特)、用ELISA观察A549细胞分泌TNF-α和RT-PCR及蛋白免疫印迹观察A549细胞TLR4的表达。结果:LPS诱导A549细胞分泌TNF-α(与对照组比较,P<0.01),在第6h达高峰;LPS诱导A549细胞表达TLR4(与对照组比较,P<0.01);瑞巴匹特可抑制LPS诱导A549细胞分泌TNF-α和表达TLR4(与模型组比较,P<0.05),但2组干预组间无统计学差异(P>0.05)。结论:瑞巴匹特的抗炎机制可能是通过抑制TLR4的表达,从而减少炎性细胞因子的释放;瑞巴匹特有可能作为一种有价值的抗感染治疗的辅助药物。

食蟹猴肺上皮细胞株MFLE-001的建立及生物学特性研究

该研究建立了食蟹猴肺上皮细胞株并鉴定其生物学特性。以食蟹猴肺部组织进行原代培养,用差速贴壁法纯化细胞株,并通过倒置显微镜、透射电镜、扫描电镜观察,绘制生长曲线,进行核型分析以及肺上皮标志物检测等方法研究其生物学特性。结果显示,体外培养细胞生长均一、稳定,细胞倍增时间为4.8天,免疫组化CK(+)、CK-7(+)、波形蛋白(+),染色体分析表明,具有正常2倍染色体数目(2n=42),符合食蟹猴肺上皮细胞株特性。该研究成功建立第一株食蟹猴肺上皮细胞株,命名为MFLE-001,为肺部疾病研究和药物筛选提供了理想的体外实验模型。

周期性机械拉伸对人肺上皮细胞增殖及粘弹性的影响

采用FX-4000基底加载系统对体外培养人肺上皮细胞A549施加周期性拉伸应变,通过流式细胞仪和微管吸吮技术,研究了不同波形的周期性机械拉伸对A549细胞的增殖及粘弹性的影响。结果表明:分别采用正弦波和方波,对A549细胞施加15%拉伸应变、频率30次/min周期性机械拉伸4 h,与对照组相比,正弦波拉伸对A549细胞增殖无显著影响,细胞的粘弹性参数k1和k2值有所减小,μ值无统计学差异。方波拉伸在显著抑制A549细胞增殖同时,细胞的粘弹性参数k1,k2和μ值均明显减小。从力学的角度证实了细胞骨架参与细胞生长的过程。

转化生长因子-β1诱导A549细胞向间充质细胞转化的作用研究

目的:观察重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对人肺上皮细胞株(A549)的转化作用。方法:将体外培养的A549用不同浓度的rhTGF-β1干预后,倒置显微镜观察细胞形态学的变化,用MTT法检测rhTGF-β1对A549增殖的影响。48 h收集蛋白用蛋白质印迹和间接免疫化学方法检测间充质细胞表型Fibronectin-EDA(Fn-EDA)表达变化。结果:rhTGF-β1诱导A549向间充质细胞形态转化,在体外对A549增殖无明显影响,上调间充质细胞表型Fn-EDA表达。结论:rhTGF-β1可诱导A549发生上皮细胞-间质转化(ephethlial-mesenchymal transition,EMT),支持肺上皮细胞发生EMT的观点。

香烟烟雾对A549与A549-R细胞的氧化损伤

目的探讨hOGG1基因低表达对香烟烟雾作用下细胞氧化损伤效应的影响。方法不同浓度香烟烟雾暴露A549细胞和hOGG1基因低表达的A549-R细胞,MTT实验检测两种细胞存活率,彗星实验观察两种细胞DNA损伤,荧光法测定两种细胞内活性氧(ROS)含量,高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)检测细胞基因组DNA中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。结果随着香烟烟雾暴露浓度的增加,两种细胞的存活率均下降,且A549-R细胞IC50显著小于A549细胞,差异有统计学意义(P<0.05);两种细胞ROS生成量与香烟烟雾浓度呈剂量-效应关系,当香烟烟雾浓度≥1.25支/升时,A549-R细胞ROS含量显著高于A549细胞(P<0.05);不同香烟烟雾浓度下,A549-R细胞拖尾率、尾长、OTM值均大于A549细胞,差异有统计学意义(P<0.05);A549细胞与A549-R细胞基因组DNA8-OHdG含量随香烟烟雾浓度的增加而升高,当香烟烟雾浓度为2.5支/升和5支/升时,A549-R细胞8-OHdG含量显著高于A549细胞(P<0.05)。结论香烟烟雾可导致A549细胞与A549-R细胞的氧化损伤,hOGG1基因低表达可增加A549-R细胞对香烟烟雾引起的氧化损伤的敏感性。