肺表面活性物质治疗新生儿肺内/肺外源性急性肺损伤研究

目的:探究肺表面活性物质治疗新生儿肺内/肺外源性急性肺损伤的效果。方法:选取2017年1月-2018年4月在本院接受治疗的新生儿肺内/肺外源性急性肺损伤患儿56例作为研究对象,根据不同的病因将其分为内源性组(n=28)和外源性组(n=28)。所有患儿均采用肺表面活性物质治疗,比较两组治疗前后的肺顺应性和氧合指数以及各项治疗指标。结果:治疗前两组肺顺应性数值及氧合指数比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗2、24、48 h后以及拔管前,外源性组肺顺应性数值及氧合指数均明显高于内源性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。外源性组机械通气、氧疗和住院时间均明显短于内源性组,并发症和病死发生情况均明显低于内源性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:肺表面活性物质治疗肺外源性急性肺损伤,效果要好于肺内源性急性肺损伤,值得临床推广。

改良法注入肺表面活性物质治疗新生儿肺内/肺外源性急性肺损伤的临床效果评价

目的:评价改良法注入肺表面活性物质治疗新生儿肺内/肺外源性急性肺损伤的效果。方法:从笔者所在医院新生儿科2015年1月-2018年1月的住院患儿中选择被确诊为新生儿肺内/肺外源性急性肺损伤的患儿作为研究对象,一共80例,根据肺内/肺外源性进行分组,各40例,两组均接受常规治疗,采用肺表面活性物质PS进行替代治疗,药物为注射用牛肺表面活性剂(珂立苏)70mg/kg。当患儿出现肺出血,立即气管插管和进行机械通气治疗。观察和比较两组治疗前和治疗后动脉血气变化,并且观察患儿治疗的不良反应发生率。结果:与治疗前对比,治疗60min患儿的PaO2明显上升,PaCO2明显下降,pH有明显改善,治疗前和治疗60min的数据比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组对比,观察组治疗60min的PaO2明显更高,PaCO2明显更低,pH改善更加明显,组间数据比较差异有统计学意义(P<0.05)。所有患儿均痊愈出院,没有发生严重不良反应。结论:改良法注入肺表面活性物质治疗新生儿肺内/肺外源性急性肺损伤具有良好的效果及安全性,但是更适用于肺外源性急性肺损伤,值得广泛应用及推广。

茶多酚通过抑制NLRP3炎症小体改善脓毒症小鼠的急性肺损伤

目的探讨茶多酚(TP)对NLRP3炎症小体的调控作用机制以及其对脓毒症相关急性肺损伤的治疗效用。方法将60只C57BL/6小鼠随机平均分为假手术组(单纯开腹探查盲肠后即关腹)、盲肠结扎穿孔组(开腹暴露并游离盲肠后行盲肠结扎与穿孔操作后关腹)以及盲肠结扎穿孔+TP治疗组(盲肠结扎穿孔前1周予TP灌胃),每组20只。建模完成后绘制生存曲线评估各组小鼠对脓毒症打击的耐受情况。测定各组小鼠肺湿/干质量比值、肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平,并对肺组织进行HE染色和急性肺损伤评分,评估肺损伤程度。ELISA法测定肺组织内IL-1β、TNF-α及IL-6表达水平;蛋白免疫印迹实验检测肺组织内NLRP3、caspase-1 p10及ASC蛋白表达水平;免疫组化染色测定肺组织内MPO、caspase-8及NLRP3蛋白表达,评估各组小鼠肺内炎症情况。检测肺组织内MDA及H2O2以评估氧化应激水平;免疫荧光共染NLRP3和NOX4蛋白以探讨二者表达及共定位。结果TP治疗组小鼠术后72 h死亡率、小鼠肺湿/干质量比值、肺组织MPO水平以及急性肺损伤评分均较盲肠结扎穿孔组小鼠显著下降(P<0.05);TP治疗组小鼠肺组织内IL-1β、TNF-α及IL-6、NLRP3、caspase-1 p10、ASC等蛋白表达水平亦较盲肠结扎穿孔组小鼠显著降低(P<0.05);氧化应激相关检测结果提示,TP治疗组小鼠肺组织内MDA及H2O2水平较盲肠结扎穿孔组小鼠显著减低(P<0.05);免疫荧光共染则提示TP治疗组小鼠NOX4蛋白与NLRP3蛋白在肺组织内的表达和共定位较盲肠结扎穿孔组小鼠减少。结论TP可通过抑制NLRP3炎症小体相关炎症改善盲肠结扎穿孔诱导的小鼠脓毒症肺损伤,且这一调控机制可能与其对肺组织内氧化应激相关蛋白NOX4的表达抑制相关。

血红素加氧酶1(HO-1)基因敲除影响小鼠肺脏免疫细胞组成平衡并加重脂多糖诱导的急性肺损伤

目的 评价血红素加氧酶1(HO-1)基因缺失对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠肺脏免疫细胞组成及炎症性损伤的影响。方法 选取C57BL/6野生型(WT)小鼠和同背景HO-1条件敲除(HO-1^(-/-))小鼠,按照随机数字法分为WT对照组、 LPS处理的WT组、 HO-1^(-/-)对照组和LPS处理的HO-1^(-/-)组。LPS处理的WT组和LPS处理的HO-1^(-/-)组分别经尾静脉注射LPS(15 mg/kg)建立ALI模型,WT对照组和HO-1^(-/-)对照组经尾静脉注射同等体积生理盐水。造模12 h后,处死小鼠并收集各组肺组织。HE染色观察肺组织病理变化。PCR检测肺组织肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)和IL-6 mRNA表达。流式细胞术检测肺组织中性粒细胞(CD45^(+)CD11b^(+)Ly6G^(+)Ly6C^(-))、总单核细胞(CD45^(+)CD11b^(+)Ly6C^(hi))、促炎性单核细胞亚群(CD45^(+)CD11b^(+)Ly6C^(hi)CCR2^(hi))、总巨噬细胞(CD45^(+)CD11b^(+)F4/80^(+))、 M1巨噬细胞亚群(CD45^(+)CD11b^(+)F4/80^(+)CD86^(+))、 M2巨噬细胞亚群(CD45^(+)CD11b^(+)F4/80^(+)CD206^(+))、总T细胞(CD45^(+)CD3^(+))、 CD3^(+)CD4^(+)T细胞亚群、 CD3^(+)CD8^(+) T细胞亚群和髓源性抑制细胞(MDSC, CD45^(+)CD11b^(+)Gr1^(+))百分比。结果 与相应对照组相比,LPS处理的WT和HO-1^(-/-)小鼠,肺组织炎症损伤加重;TNF-α、 IL-1β和IL-6 mRNA水平增加;中性粒细胞、总单核细胞、促炎性单核细胞亚群、 MDSC和总巨噬细胞比例显著增加;CD3^(+)、 CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+) T细胞比例显著降低。静息状态下,与WT对照组小鼠相比,HO-1^(-/-)对照组小鼠肺脏中性粒细胞、单核细胞、促炎性单核细胞比例增加;CD3^(+)和CD3^(+)CD8^(+) T细胞比例降低。与LPS处理的WT小鼠相比,LPS处理的HO-1^(-/-)小鼠肺组织TNF-α和IL-1β mRNA表达水平更高,总单核细胞、促炎性单核细胞亚群、 M1巨噬细胞和M1/M2比值显著增加;CD3^(+)CD8^(+) T细胞百分比显著降低。结论 HO-1的缺失影响ALI小鼠肺脏免疫系统功能,加重LPS刺激后的炎症性损伤。

苍术酮通过调节Nrf2-NLRP3通路减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤实验研究

目的研究苍术酮调节核因子NF-E2相关因子(Nrf2)-NLRP3通路对LPS诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用。方法构建ALI小鼠模型,实验分为对照组、模型组、地塞米松组及苍术酮低、中、高剂量组。ELISA测定各组小鼠血清及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平;通过测定肺组织湿/干质量比重(W/D),评估其水肿程度,检测肺组织抗髓过氧化物酶抗体(MPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)超氧化物歧化酶(SOD)及丙二酮(MDA)含量以评估其体内抗氧化损伤的作用;HE染色法检查肺损伤情况,并进行评分;RT-qPCR测定各组小鼠肺组织Nrf2、HO-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18mRNA水平。结果苍术酮对LPS诱导的小鼠ALI具有较好的保护作用,可降低小鼠血清及肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和W/D比值、肺组织MPO、MDA及NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18mRNA水平,提高血清IL-10水平及肺组织GSH-Px、SOD及Nrf2、HO-1 mRNA水平,明显改善肺组织学病理表现,降低肺组织病理评分,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论苍术酮可通过调节炎症因子及氧化应激以缓解ALI小鼠肺损伤,其机制可能与调节Nrf2-NLRP3通路有关。

IRF8靶向铁死亡在急性肺损伤中的作用及机制研究

目的探讨干扰素调节因子8(interferon regulatory factor 8,IRF8)在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中的作用及其机制。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测体内外ALI模型中IRF8 mRNA和蛋白的表达。体外构建稳定过表达和敲低IRF8的A549细胞系,采用RT-qPCR检测炎症相关基因mRNA的表达;WB检测凋亡相关基因的表达。分别选取12只同窝阴性对照小鼠和12只Irf8敲除品系小鼠,构建ALI模型,收集造模后的小鼠肺组织并称重;收集并检测肺泡灌洗液中总细胞数以及总蛋白含量。采用苏木精-伊红染色及免疫荧光分析肺组织炎症浸润情况;利用RT-qPCR检测Irf8敲除小鼠肺组织炎症相关基因mRNA的表达;TUNEL染色分析肺组织凋亡情况;采用WB分别在体内外ALI模型中检测铁死亡相关信号分子的蛋白表达。结果IRF8在体内体外ALI中表达上调;体外敲低IRF8加剧细胞内炎症以及细胞凋亡,反之,过表达IRF8可在体外ALI模型中发挥保护作用;敲除Irf8加重小鼠肺损伤;进一步机制探索发现IRF8通过调控铁死亡相关信号分子表达从而减轻肺损伤。结论IRF8通过靶向铁死亡在肺损伤中发挥保护作用,为肺损伤的治疗提供潜在靶点。

白花败酱草总黄酮对实验性急性肺损伤模型大鼠的肺保护作用及其机制

目的:探讨白花败酱草总黄酮(total flavoniods from Patrina villosa Juss,PJF)对实验性急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型大鼠的肺保护作用及其潜在机制。方法:用气管内滴注5 mg/kg脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建ALI大鼠模型。将60只雄性SD大鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+低剂量(100 mg/kg)PJF组和LPS+高剂量(300 mg/kg)PJF组(后2组在ALI造模前1 h给予PJF灌胃),每组15只。造模后24 h,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和肺组织。HE染色显示肺组织形态;干湿称重法测量肺组织的湿/干重比;伊文思蓝染色评估肺组织中上皮屏障的通透性;ELISA检测BALF中炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-6含量,以及肺组织中氧化应激指标超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;免疫印迹法检测肺组织中C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和X框结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)蛋白表达。结果:与对照组比较,LPS组大鼠肺组织呈现肺泡结构不清和大量炎症细胞浸润,ALI评分和肺组织的湿/干重比显著升高(P<0.05),BALF中IL-6、IL-1β和TNF-α水平,以及肺组织中MDA含量、MPO活性及CHOP、GRP78和XBP1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),肺组织中SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。与LPS组比较,PJF干预组肺组织形态改善,ALI评分和肺组织的湿/干重比显著下降(P<0.05),BALF中IL-6、IL-1β和TNF-α水平,以及肺组织中MDA含量、MPO活性及CHOP、GRP78和XBP1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),肺组织中SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05);且高剂量组的效果明显优于低剂量组。结论:PJF对ALI大鼠具有肺保护作用,其机制可能与抑制炎症反应、氧化应激和内质网应激有关。

血清NT-proBNP、HMGB1及sTREM-1水平在脓毒症急性肺损伤预后评估中的价值

目的:分析血清N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、可溶性髓系细胞触发受体-1(sICAM-1)水平与在脓毒症急性肺损伤(ALI)预后评估中的价值。方法:选取104例脓毒症ALI患者为研究对象(ALI组),以肺部超声评分(LUS)将其分为轻度组(n=50)、中度组(n=36)、重度组(n=18);另选取80例单纯性脓毒症患者为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清NT-proBNP、HMGB1、sICAM-1水平,以脓毒症ALI患者28 d预后情况将其分为生存组和死亡组,绘制受试者工作特征曲线(ROC)评估NT-proBNP、HMGB1、sICAM-1及联合预测预后的价值。结果:脓毒症ALI组NT-proBNP、HMGB1、sTREM-1水平均高于对照组(P<0.05);不同严重程度的脓毒症ALI组患者NT-proBNP、HMGB1、sTREM-1值比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且均表现为脓毒症ALI轻度组患者<中度组<重度组(P<0.05);Spearman相关性分析显示,NT-proBNP、HMGB1、sTREM-1与严重程度正相关(P<0.05);生存组NT-proBNP、HMGB1、sTREM-1水平均低于死亡组(P<0.05),三者联合检测预测预后的曲线下面积高于单一指标预测。结论:脓毒症ALI患者血清NT-proBNP、HMGB1、sTREM-1水平较高,三者联合检测对于预后有较高的评估价值。

HMGB1基因敲除通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的 研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因敲除减轻脓毒症小鼠急性肺损伤及抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路的作用。方法 野生型(WT)小鼠分为WT-Sham组和WT-模型组,HMGB1基因敲除(KO)小鼠分为KO-Sham组和KO-模型组。WT-模型组和KO-模型组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症ALI模型,WT-Sham组和KO-Sham组进行假手术操作。造模后24 h,检测动脉血氧分压(PaO_(2)),计算氧合指数(OI),检测肺组织病理改变,计算肺损伤评分,检测血清及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的浓度,肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达。结果 WT-模型组的PaO_(2)、OI、血清及肺组织SOD的浓度低于WT-Sham组,肺损伤评分、血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA的浓度、肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达水平高于WT-Sham组(P<0.05);KO-模型组肺组织中不表达HMGB1,PaO_(2)、OI、血清及肺组织SOD的浓度高于WT-模型组,肺损伤评分、血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA的浓度、肺组织中TLR4、核NF-κB的表达水平低于WT-模型组(P<0.05)。结论敲除HMGB1减轻脓毒症小鼠ALI,相关的分子机制可能是抑制TLR4/NF-κB通路介导的炎症反应和氧化应激反应。

姜黄素抑制Gpx4介导的铁死亡减轻大鼠脓毒症急性肺损伤

目的:探讨谷胱甘肽过氧化物酶4(Gpx4)介导的铁死亡参与脓毒症大鼠急性肺损伤及其姜黄素(Cur)的干预机制。方法:将24只大鼠随机分成3组,每组8只,即假手术(Sham)组、Sepsis组、Cur组。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症急性肺损伤模型,Sham组仅行开关腹手术,Sepsis组和Cur组行CLP,Cur组在建模后1 h腹腔注射姜黄素200 mg/kg,24 h后重复给药。术后48 h对大鼠肺组织取材,检测各组肺组织湿/干重(W/D);HE染色观察肺组织形态学变化;试剂盒检测肺组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe^(2+)含量以及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平;Western blot检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、铁死亡关键调控蛋白Gpx4的表达;通过TUNEL检测肺泡上皮细胞凋亡情况;透射电镜下观察肺泡上皮细胞超微结构改变。结果:与Sham组比较,Sepsis组肺组织W/D升高(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和MDA、Fe^(2+)含量显著升高(P<0.05),GSH含量降低、核蛋白Nrf2表达上调、Gpx4表达下调(P<0.05);光镜下可见Ⅱ型肺泡上皮细胞水肿、充血、炎症细胞浸润,透射电镜下可见线粒体皱缩、双层膜密度增厚、嵴减少或断裂等铁死亡征象;与Sepsis组比较,Cur组肺组织W/D降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β含量降低,MDA、Fe^(2+)含量降低,GSH含量升高,核蛋白Nrf2表达下调、Gpx4表达上调(P<0.05),肺组织病理学改变明显减轻。结论:姜黄素可减轻大鼠脓毒症急性肺损伤,其机制与抑制炎症反应和Gpx4介导的铁死亡相关。

脓毒症急性肺损伤代谢组学和微生物组学研究进展

脓毒症是临床常见的严重并发症,肺部是脓毒症易损伤的靶器官,急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症(ALI/ARDS)是脓毒症患者常见的严重并发症,其发病机制复杂,发生率和死亡率很高。目前传统的诊断方法在临床实际应用中仍具有较大挑战和局限性,近年来,多组学技术广泛应用于脓毒症生物学标志物的筛选及建立中。本文对脓毒症急性肺损伤在代谢组学和微生物组学方面的研究进展进行综述。

输注异基因耐受性DC产生的外囊泡体引发输血相关急性肺损伤风险的研究

目的探讨利用耐受性的树突状细胞(dendritic cell,DC)分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)干预感染后输血相关急性肺损伤(transfusion-related acute lung injury,TRALI)策略的风险。方法体外诱导小鼠骨髓来源的DC细胞用雷帕霉素处理诱导成耐受性DC,收集其培养上清,通过梯度离心法收获EVs。利用LPS和抗H2Kd抗体诱导Balb/c小鼠为TRALI疾病模型,并尝试用同基因的雷帕霉素-DC或者异基因的雷帕霉素-DC分泌的EV对TRALI小鼠进行干预,观察并记录发病小鼠的一系列数据。结果与TRALI发病组相比,使用雷帕霉素处理后的同基因耐受性DC对TRALI发病小鼠进行干预后,小鼠的死亡率显著下降。当用异基因耐受性DC(雷帕霉素处理后)产生的EVs进行干预组的肺湿/干比率、胸腔积液和体温与仅用LPS和H2Kd抗体处理组小鼠没有显著性差异。来源于耐受性细胞异基因EVs与LPS联合后不诱发小鼠的TRALI,但是EVs干预后的死亡率与注射浓度呈正相关。结论雷帕霉素处理后的同基因DC对感染后TRALI具有保护作用,并且该耐受细胞的异基因细胞外囊泡联合LPS后本身并不引起呼吸窘迫现象,当这种异基因外囊泡体输注联合抗白细胞抗体时,却加重了TRALI的死亡风险。本研究数据提示,异基因外囊泡体的应用与输血同时进行时,也许可能会加重TRALI死亡风险。

血清微小RNA-499a-5p、成纤维细胞生长因子9、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤患者病情严重程度和预后的关系

目的探讨血清微小RNA-499a-5p(miR-499a-5p)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者病情严重程度和预后的关系。方法选取接受诊治的151例脓毒症患者为研究对象,根据ALI的发生情况分为脓毒症并发ALI组(68例)和一般脓毒症组(83例)。根据氧合指数,将脓毒症并发ALI患者分为轻症组(23例)、中症组(26例)和重症组(19例)。以脓毒症并发ALI患者诊治28 d内的生存情况,分为预后良好组(43例)和预后不良组(25例)。另外,选取同期体检健康者151例为健康组。分析各组miR-499a-5p、FGF9及炎症因子间的差异和相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a-5p、FGF9对脓毒症患者并发ALI的预测效能。结果轻症组、中症组、重症组患者的miR-499a-5p和FGF9水平表现为依次降低,而炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组的miR-499a-5p、FGF9低于预后良好组,IL-1、IL-6、TNF-α、CRP水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症并发ALI患者的miR-499a-5p、FGF9与IL-1、IL-6、TNF-α、CRP呈负相关(P<0.05);miR-499a-5p可正向调节FGF9表达(P<0.05)。miR-93、miR-135a联合预测脓毒症并发ALI患者预后的诊断效能高于单独预测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-499a-5p、FGF9、炎性因子水平与脓毒症所致ALI患者的病情程度和预后相关。miR-499a-5p和FGF9可能作为潜在的生物标志物用于脓毒症并发ALI的预后评估。

人参皂苷Rb1减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用研究

目的:探讨人参皂苷Rb1(GsRb1)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、GsRb1给药组(低、中、高剂量组),气管内给予LPS造模,给药组在造模前3 d分别腹膜腔注射给予不同剂量GsRb1预处理,造模12 h将其麻醉,先采集肺泡灌洗液后再处死取出肺组织,计算肺湿/干比,试剂盒检测灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及肺髓过氧化物酶(MPO)活性,Western blot检测肺组织核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结果:高剂量GsRb1能明显降低肺组织湿/干比(P<0.05);中、高剂量GsRb1能明显降低肺组织MPO活性(P<0.05);高剂量GsRb1明显降低小鼠肺泡灌洗液IL-1β和TNF-α水平(P<0.05);高剂量GsRb1能明显降低肺组织NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05)。结论:GsRb1可能通过调控NF-κB通路,减轻炎症反应,抑制LPS诱导的小鼠ALI。

痰热清注射液辅助治疗脓毒症并急性肺损伤的临床疗效

目的观察痰热清注射液辅助治疗脓毒症并急性肺损伤的临床疗效。方法选取2017年8月—2018年7月于贵阳市第一人民医院接受治疗的脓毒症并急性肺损伤患者140例,按照随机数字表法分为常规治疗组(n=70)和痰热清注射液组(n=70)。常规治疗组给予常规西医措施治疗,痰热清注射液组在常规治疗组基础上联合痰热清注射液,2组均治疗7 d。比较2组治疗前与治疗第3、7天血清炎性指标[C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白介素(IL)-6、IL-17、IL-33及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)]、肺损伤评分(LIS)、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、呼吸功能指标[血管外肺水指数(EVLWI)、肺血管通透性指数(PVPI)]、血气指标[动脉血氧饱和度(SaO_(2))、动脉血氧分压(PaO_(2))]。结果治疗第3、7天,2组血清CRP、PCT、IL-6、IL-17、IL-33、HMGB1水平低于治疗前,且痰热清注射液组低于常规治疗组(P<0.01);2组LIS、APACHEⅡ评分低于治疗前,且痰热清注射液组低于常规治疗组(P<0.01);2组EVLWI、PVPI低于治疗前,且痰热清注射液组低于常规治疗组(P<0.01);2组SaO_(2)、PaO_(2)高于治疗前,且痰热清注射液组高于常规治疗组(P<0.01)。结论痰热清注射液辅助治疗脓毒症并急性肺损伤的临床疗效显著,可更有效地减轻机体炎性反应,提高肺功能,增加血氧含量,进而改善患者的身体状况。

建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型并探讨高原低氧肺组织损伤机制

目的摸索相关参数建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型并探讨高原低氧肺组织损伤机制。方法1.建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型的方法:采用随机数字表法将雄性大鼠分为5组,即空白对照组,高原低氧6h组、24h组、48h组、72h组,适应性喂养7 d后进低压氧舱(模拟海拔7000 m),以肺组织纹理模糊、肺泡壁变厚、肺泡间隔增宽判断造模成功。2.探讨高原低氧肺损伤机制的方法:分别比较各组大鼠动脉血血气分析(ABG)结果、肺组织血管紧张素II(Ang II)含量、肺组织内皮素1(ET-1)含量和肺组织血管紧张素转化酶(ACE)m RNA的表达情况及肺组织超微结构,并作相关性分析。结果1.各组雄性大鼠ABG相关指标的变化:与对照组比较,高原低氧6 h、24 h、48 h、72 h组氧分压(PaO_(2))、动脉血氧饱合度(SaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2))和酸碱度(p H)值均下降,在一定时间范围内缺氧时间越长下降越明显(P<0.05)。2.各组雄性大鼠肺组织形态学的变化:与对照组比较,光镜下可见高原低氧各组出现不同程度的肺纹理模糊、肺泡壁增厚、肺泡间隔增宽;随着缺氧时间延长,肺组织损伤逐渐加重。3.各组雄性大鼠肺组织AngⅡ、ET-1含量变化:与对照组比较,高原低氧各组大鼠肺组织AngⅡ、ET-1含量明显升高(P<0.01),在一定时间范围内随缺氧时间延长而增加,72 h组达到高峰。4.各组雄性大鼠肺组织ACE m RNA表达比较:与对照组比较,高原低氧各组大鼠肺组织ACE m RNA表达均上调,6h组升高显著,72h组达到峰值(P<0.01)。结论利用低压氧舱模拟海拔7000 m环境,可以有效建立大鼠肺组织损伤模型;高原低氧肺损伤机制可能与ET-1、AngⅡ及ACE m RNA的表达水平上调,肾素-血管紧张素系统(RAS)失衡有关。

白藜芦醇通过ERK1/2和NF-κB通路调节NADPH氧化酶表达改善急性肺损伤

目的探讨白藜芦醇对急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶的影响,并分析相关信号通路机制。方法将50只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组,每组10只。对照组和模型组给予生理盐水干预,地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组分别给予2 mg/kg地塞米松、100 mg/kg白藜芦醇、500 mg/kg白藜芦醇干预,1次/d,连续干预14 d。干预结束后,除对照组外,其余组别大鼠构建急性肺损伤模型。比较各组大鼠肺组织病理状态、肺湿重/干重比(W/D)、肺损伤评分,采用ELISA法检测肺泡灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用RT-PCR法检测各组NADPH氧化酶亚基p47^(phox)、p22^(phox),及ERK、NF-κB mRNA水平;采用Western bloting法检测各组p47^(phox)、p22^(phox)、p-ERK1/2、ERK1/2、p-NF-κB、NF-κB蛋白水平。结果模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组W/D及肺损伤评分、MDA水平、p22^(phox)、p47^(phox)、ERK1/2、NF-κB mRNA、p47^(phox)蛋白、p-ERK/ERK、p-NF-κB/NF-κB、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于对照组,而SOD、GSH-Px水平低于对照组(P<0.05)。结论白藜芦醇可改善LPS诱导的急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶及氧化应激状态,其作用机制可能与ERK1/2-NF-κB通路有关。

沉默cFLIP在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究

目的探讨沉默细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)对重症急性胰腺炎(SAP)导致的肺损伤的影响及其可能的作用机制。方法分别取12只SD大鼠,随机分为对照组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA1组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA2组和cFLIPL(或cFLIPS)siRNA3组,筛选抑制率最高的cFLIPL siRNA和cFLIPS siRNA。50只SD大鼠随机分成假手术组、模型对照组、cFLIP siRNA-NC组、cFLIPS siRNA组、cFLIPL siRNA组,每组各10只。通过胰胆管内逆行注射3%牛磺胆酸钠溶液建立SAP模型,建模成功后,cFLIPS siRNA、cFLIPL siRNA和cFLIP siRNA-NC组大鼠尾静脉注射对应siRNA溶液,其余组注射等量0.9%NaCl溶液。HE染色检测肺组织病理学变化;ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α含量;全自动分析仪检测静脉血白细胞数、中性粒细胞数;流式细胞术检测中性粒细胞凋亡;Western blotting检测中性粒细胞RIP1和caspase-8蛋白表达。结果cFLIPL siRNA2组以及cFLIPS siRNA1组干扰效率最明显,因此选择这2组进行后续实验(后续称为cFLIPL siRNA组和cFLIPL siRNA组)。与模型对照组大鼠相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组大鼠肺泡结构损伤减轻,肺泡壁变薄,炎症细胞浸润减少;与模型对照组相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组IL-6、IL-1β和TNF-α含量均明显降低,静脉血白细胞数、中性粒细胞数明显降低,中性粒细胞凋亡率明显升高,cFLIPL、cFLIPS和RIP1蛋白表达量明显降低,caspase-8蛋白表达量明显升高;以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究结果表明,靶向沉默cFLIP可能通过上调caspase-8和抑制RIP1的表达,促进中性粒细胞凋亡,减少炎症介质IL-6、IL-1β和TNF-α释放,抑制肺组织中的中性粒细胞浸润,缓解SAP导致的肺损伤,在SAP中发挥保护作用。

甲基莲心碱通过调控NF-κB信号通路减轻脓毒症大鼠急性肺损伤

【目的】探讨甲基莲心碱对脓毒症大鼠急性肺损伤的治疗作用及机制。【方法】采用盲肠结扎穿刺(GLP)法制备脓毒症大鼠模型,造模成功后,将大鼠分为模型组,甲基莲心碱低、高剂量组和甲基莲心碱高剂量+PMA[核转录因子κB(NF-κB)激活剂佛波酯]组,同时设置假手术组,每组15只。术后6 h,给予相应干预,连续2 d。采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态学改变,并进行损伤病理评分;检测肺组织湿干质量比;血气分析仪检测动脉血氧分压(PaO_(2))和动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))水平;酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western Blot法检测肺组织中NF-κB p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65(Ser536)、环氧合酶2(COX-2)蛋白表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠肺组织损伤严重,肺组织损伤病理评分、湿干质量比及PaCO_(2)水平显著升高(P<0.01),PaO_(2)水平显著降低(P<0.01),BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及肺组织中p-NF-κB p65/NF-κB p65比值、COX-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,甲基莲心碱低、高剂量组大鼠肺组织损伤明显改善,肺组织损伤病理评分、湿干质量比及PaCO_(2)水平显著降低(P<0.05或P<0.01),PaO_(2)水平显著升高(P<0.05或P<0.01),BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及肺组织中p-NF-κB p65/NF-κB p65比值、COX-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。然而,PMA干预后,甲基莲心碱对脓毒症大鼠肺组织损伤的改善作用被明显逆转(P<0.01)。【结论】甲基莲心碱可改善大鼠脓毒症急性肺损伤及肺功能,其作用可能与抑制NF-κB信号通路激活,进而减少体内炎症因子释放有关。

痰热清联合乌司他丁对脓毒症急性肺损伤病人呼吸功能及氧化应激指标的影响

目的探讨痰热清联合乌司他丁对脓毒症急性肺损伤(ALI)病人呼吸功能及氧化应激指标的影响。方法选取广西壮族自治区民族医院2020年12月至2023年11月86例脓毒症ALI病人,按随机数字表法分为观察组43例及对照组43例。两组均予以常规治疗,对照组予以乌司他丁,观察组予以痰热清联合乌司他丁。比较两组疗效、症状及病情变化[急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分、Murray肺损伤评分(MLIS)]、治疗前后呼吸功能[血管外肺水指数(EVLWL)、肺血管通透指数(PVPI)、氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))]、氧化应激指标[过氧化脂(LPO)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)]、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路表达、预后。结果两组整体疗效比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗7 d后,两组中医证候积分、APACHEⅡ评分、MLIS均低于治疗前,但两组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗7 d后,两组EVLWL、PVPI较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组EVLWL、PVPI分别为(8.02±1.05)mL/kg、(1.91±0.36)%,均低于对照组(11.34±1.62)mL/kg、(2.67±0.43)%(P<0.05);治疗7 d后,两组PaO_(2)/FiO_(2)较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组PaO_(2)/FiO_(2)为(407.26±33.9)mmHg,高于对照组(326.84±28.65)mmHg(P<0.05);治疗7 d后,两组LPO较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组LPO为(3.45±0.82)nmol/L,低于对照组(5.06±1.04)nmol/L(P<0.05);治疗7 d后,两组CAT、SOD较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组CAT、SOD分别为(54.04±7.26)U/mL、(106.35±8.87)U/mL,高于对照组(48.59±6.47)U/mL、(92.41±6.92)U/mL(P<0.05);治疗7 d后,两组NF-κB、IL-6、TNF-α较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组NF-κB、IL-6、TNF-α分别为(12.08±3.23)mg/L、(132.06±18.8)ng/L、(170.15±20.29)ng/L,低于对照组(20.64±4.52)mg/L、(165.75±23.26)ng/L、(202.64±26.32)ng/L(P<0.05);观察组机械通气时间为(6.89±1.37)d,短于对照组(8.56±1.61)d(P<0.05);两组ICU入住时间、28 d生存率、并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论痰热清联合乌司他丁治疗脓毒症治疗ALI病人能促进呼吸功能恢复,改善氧化应激反应,缩短机械通气时间,其作用机制可能与调节NF-κB信号通路表达有关。