CDDO-Me对缺氧诱导的肺动脉外膜成纤维细胞活化的影响

目的:探索甲基巴多索隆(bardoxolone methyl,CDDO-Me)对缺氧诱导的人肺动脉外膜成纤维细胞(pulmonary artery adventitia fibroblast,PAAF)活化的影响及其相关机制。方法:体外培养人PAAF,随机分为常氧组(21%O2)、缺氧组(1%O2)、缺氧+CDDO-Me组和常氧+CDDO-Me组。采用CCK-8法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移;DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,ELISA试剂盒检测细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量以及细胞上清液中转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β表达水平;免疫荧光法观察细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达以及核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65核转位情况;Western blot检测细胞内α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、波形蛋白表达以及Smad3、p65磷酸化水平。结果:CDDO-Me(62.5、125.0、250.0、500.0 nmol/L)可以浓度依赖性地降低缺氧诱导的PAAF细胞活力的升高,并在250.0 nmol/L和500.0 nmol/L时具有显著抑制作用。CDDO-Me(500.0 nmol/L)可以抑制缺氧诱导的PAAF迁移以及肌成纤维细胞转化,恢复细胞形态,抑制缺氧诱导的PAAF中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和波形蛋白表达水平的升高。在缺氧条件下,CDDO-Me(500.0 nmol/L)显著降低PAAF中ROS和MDA水平,升高GSH和SOD含量,提高细胞抗氧化应激能力。CDDO-Me(500.0 nmol/L)可以抑制缺氧诱导的PAAF中细胞因子TGF-β1的分泌,抑制TGF-β1/Smad3信号通路的激活。此外,CDDO-Me(500.0 nmol/L)还可以抑制缺氧诱导的PAAF中NF-κB(p65)的核转位及其磷酸化,并抑制其下游炎症因子TNF-α和IL-1β的表达。结论:CDDO-Me可以抑制缺氧诱导的PAAF增殖、迁移以及向肌成纤维细胞转化,提高PAAF抗氧化应激能力,并抑制TGF-β1/Smad3信号通路和NF-κB信号通路。

5-羟色胺对大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖、迁移及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的探讨5-羟色胺(5-HT)对大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖、迁移和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法分离并培养大鼠肺动脉外膜成纤维细胞。将体外培养的大鼠肺动脉外膜成纤维细胞分为1~6组,2~6组分别加入10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5) mol/L 5-HT,1组加等量DMEM培养基,继续培养24 h。采用MTT法观察各组细胞增殖情况(OD490值),采用Transwell小室实验观察各组细胞迁移能力(穿膜细胞数),采用Western blotting法检测各组细胞α-SMA表达。结果 1~6组细胞OD490值分别为0.72±0.04、0.79±0.04、0.84±0.05、0.87±0.04、0.93±0.03、0.94±0.03,穿膜细胞数分别为(9.2±1.6)、(17.2±1.7)、(26.0±2.9)、(34.4±2.5)、(63.6±6.0)、(50.4±6.0)个。OD490值、穿膜细胞数:5组>4组>3组>2组>1组,P均<0.05;5、6组OD490值、穿膜细胞数比较,P均>0.05。1~6组细胞α-SMA相对表达量分别为1.01±0.21、1.18±0.35、1.91±0.28、2.37±0.42、2.78±0.33、2.13±0.40。细胞α-SMA相对表达量:5组>4组>3组>2组>1组,P均<0.05;6组低于5组,P<0.05。结论 10-9~10-6mol/L 5-HT可呈剂量依赖性促进大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖、迁移和α-SMA表达。

激活的肺动脉成纤维细胞Piezo1通道通过活化p38-MAPK促进IL-6分泌诱发肺动脉高压的研究

目的利用大鼠肺动脉成纤维细胞探讨机械敏感Piezo1通道与IL-6分泌的关系,分析Piezo1通道在肺动脉高压(PAH)发展过程中的作用机制。方法利用组织块法获取成年SD大鼠肺动脉组织并分离培养肺动脉成纤维细胞;将细胞分为对照组和流体剪切力组,用流体剪切力系统在12 dyn/cm 2条件下培养流体剪切力组细胞24 h,对照组不做额外处理;利用Western blot和PCR技术分别检测对照组和流体剪切力组细胞Piezo1蛋白和mRNA水平;将肺动脉成纤维细胞分为PBS组、Yoda1组和Yoda1+Dooku1组并分别加入10μM PBS、Yoda1和Yoda1+Dooku1培养24 h,24 h后利用检测各组细胞IL-6蛋白和mRNA水平;取Yoda1组细胞分为PBS组、ERK抑制剂组、JNK抑制剂组和p38MAPK抑制剂组分别加入PBS、ERK抑制剂(PD98059,10μM)、JNK抑制剂(SP600125,10μM)和p38 MAPK抑制剂(SB203580,5μM),培养24 h后检测IL-6 mRNA水平;在PBS组、Yoda1组和Yoda1+Dooku1组细胞进行对应处理10 min后检测磷酸化p38 MAPK蛋白水平。结果成功分离培养大鼠肺动脉成纤维细胞;12 dyn/cm 2流体剪切力环境培养24 h后,相较于对照组,流体剪切力组细胞中Piezo1蛋白和mRNA水平均显著升高(P<0.05)。PBS组、Yoda1组和Yoda1+Dooku1组细胞培养24 h后,相较于PBS组和Yoda1+Dooku1组,Yoda1组细胞IL-6蛋白和mRNA水平均显著增高(P<0.05),相较于PBS组,Yoda1+Dooku1组细胞IL-6蛋白和mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。相较于PBS组、ERK抑制剂组和JNK抑制剂组,p38 MAPK抑制剂组IL-6 mRNA水平受到抑制而显著降低(P<0.05),但PBS组、ERK抑制剂组和JNK抑制剂组IL-6 mRNA水平两两相比差异均无统计学意义(P>0.05)。PBS组、Yoda1组和Yoda1+Dooku1组细胞培养10 min后各组磷酸化p38 MAPK水平显示,相较于PBS组,Yoda1组磷酸化p38水平显著升高(P<0.05),而Yoda1+Dooku1组磷酸化p38水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论血管内流体剪切力改变可上调并激活肺动脉成纤维细胞Piezo1的表达,介导Ca 2+内流活化p38 MAPK通路促进IL-6的分泌,进一步导致血管重塑,加快PAH进程。

丹参有效成分最佳配伍对载脂蛋白E^(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨丹参水溶性有效成分最佳配伍(SABP)对载脂蛋白E^(-/-)小鼠体内和体外血管外膜成纤维细胞(VAFs)增殖的干预作用。方法:对原代培养C57BL/6J小鼠、载脂蛋白E^(-/-)小鼠VAFs,体外分别给予正常培养基、SABP、瑞舒伐他汀。将载脂蛋白E^(-/-)小鼠分为模型组、SABP组、瑞舒伐他汀组,C57BL/6J小鼠作正常对照组,原代培养给药后的各组小鼠VAFs,采用CCK-8法检测VAFs的增殖情况。结果:体外和体内结果均显示,SABP和瑞舒伐他汀均明显抑制了载脂蛋白E^(-/-)小鼠VAFs的增殖,且SABP作用更显著。结论:SABP对载脂蛋白E^(-/-)小鼠VAFs的增殖有明显的抑制作用,有望改善血管重构,成为治疗心血管疾病替代药物。

黄芪-当归6种活性成分配伍对大鼠血管外膜成纤维细胞合成细胞外基质的影响

目的观察黄芪-当归活性成分阿魏酸(ferulic acid,FA)、毛蕊异黄酮苷(calycosinglucoside,CG)、芒柄花素(formononetin,FMN)、黄芪皂苷Ⅰ(astragaloside Ⅰ,ASⅠ)、黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,ASⅣ)、毛蕊异黄酮(calycosin,CAL)配伍对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞(vascular adventitia fibroblasts,VAF)合成细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法以AngⅡ诱导VAF增殖模型,采用目标成分“敲除/敲入”的方法,将细胞分为空白组、模型组、IC10配伍组、某一活性成分敲除组、某一活性成分敲入组,分别检测细胞及培养液中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,COLⅠ)、Ⅲ型胶原(collagen type Ⅲ,COLⅢ)含量,并检测细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶组织抑制剂2(tissue inhibitor of metalloproteinase 2,TIMP2)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达,研究黄芪-当归6种活性成分配伍对VAF合成ECM的影响。结果黄芪-当归6种活性成分配伍抑制VAF合成FN、LN、COLⅠ、COLⅢ(P<0.01)。FA、CG、FMN、ASⅠ敲入后抑制FN、LN合成的作用增强(P<0.05或P<0.01),FA、CAL、FMN、ASⅠ、ASⅣ敲入后抑制COLⅠ、COLⅢ合成的作用增强(P<0.05或P<0.01)。黄芪-当归6种活性成分配伍促进MMP2、TIMP2的表达(P<0.01),FA、CG、FMN、ASⅣ、CAL敲入后促进MMP2表达的作用增强(P<0.05或P<0.01),FMN、ASⅣ、CAL敲入后促进TIMP2表达的作用增强(P<0.05或P<0.01);黄芪-当归6种活性成分配伍抑制TGF-β1表达(P<0.05),FA、CG、FMN敲入后抑制TGF-β1表达的作用增强(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪-当归6种活性成分配伍可抑制VAF合成ECM,其作用可能是通过调节TGF-β1、MMP2、TIMP2发挥的。

血管外膜成纤维细胞在肺动脉高压中的作用及研究进展

肺血管壁细胞的过度增殖和凋亡抵抗引起的肺血管重构是PAH的特征性病理改变,成纤维细胞作为血管外膜最丰富的细胞类型,是损伤刺激的首要“感知细胞”,在PAH肺血管重构过程中,成纤维细胞能被多种途径激活,活化的成纤维细胞出现过度增殖、抗凋亡、促炎和代谢异常的癌性表型,既可分化为肌成纤维细胞迁移至中膜甚至内膜促进血管壁增厚,又可通过分泌趋化因子、细胞因子和生长因子等并刺激循环炎性细胞参与血管炎性反应,以及显著改变ECM蛋白的产生和降解参与ECM重塑,释放ROS参与氧化应激,同时,活化的成纤维细胞通过代谢重编程调节其癌性表型,从而在PAH肺血管增殖性重构中起重要作用。本文从成纤维细胞的活化、分化、参与炎性反应和氧化应激以及代谢变化等方面对其在PAH中的作用及研究进展加以综述。

YC-1对低氧诱导的大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的初步探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5'-羟基甲基-2'-呋喃基)-1-苯基吲哚(YC-1)对低氧诱导的大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖和胶原生成的影响,以及可能的分子机制。方法在低氧条件下培养的大鼠肺动脉成纤维细胞,将细胞随机分为常氧组、低氧组、低氧+YC-1(0.01、0.05和0.1 mmol/L)组。分别采用MTT法检测细胞增殖情况,3~H-脯氨酸掺入法测定胶原合成,蛋白免疫印迹法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应检测转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达情况。结果低氧组的成纤维细胞增殖及3~H-脯氨酸掺入量显著高于常氧组(均P<0.01)。YC-1组的成纤维细胞增殖及3~H-脯氨酸掺入量显著低于低氧组,但仍高于常氧组;低氧组HIF-1α蛋白、TGF-β1 mRNA的表达明显高于常氧组(P<0.01),YC-1呈剂量依赖性抑制缺氧刺激的HIF-1α蛋白、TGF-β1 mRNA表达,其中YC-1 0.1 mmol/L组中HIF-1α蛋白及TGF-β1 mRNA的表达分别抑制了65%和61%(均P<0.01)。结论 YC-1能抑制低氧诱导的大鼠肺动脉外膜成纤维细胞增殖及胶原合成,并呈剂量依赖关系,其作用可能与下调HIF-1α、TGF-β1 mRNA表达有关。

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞增殖活性增强

目的:探讨动脉外膜成纤维细胞增殖与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。方法:选择6周龄载脂蛋白E基因敲除[apoE(-/-)]小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和10周后,在各个时点处死动物前24 h经腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),后选取升主动脉制备连续切片,通过HE染色观察组织形态学的变化,用免疫组化方法观察不同时点血管外膜及内膜BrdU的表达变化。体外培养高脂喂养2周的apoE(-/-)小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,通过BrdU掺入法测定细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞周期。结果:体内实验发现apoE(-/-)小鼠高脂喂养2周后,在无可见内膜病灶形成之前,首先在主动脉外膜发现BrdU标记的阳性细胞,之后才在损伤内膜观察到BrdU标记细胞。而C57BL/6小鼠在任何时点都未检测到BrdU标记的细胞。体外实验观察到apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞BrdU标记的细胞数显著多于C57BL/6小鼠(P<0.01),apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞S期及G2/M期所占百分比明显高于对照组(P<0.05)。结论:血管外膜成纤维细胞增殖可能参与早期动脉粥样硬化病灶形成。

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞

目的探讨动脉外膜成纤维细胞表型转化与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。方法选择6周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和8周后,在各个时间点处死动物后选取升主动脉制备连续切片,用免疫组织化学方法观察不同时间血管外膜α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1的表达变化。体外培养高脂喂养2周的载脂蛋白E基因敲除小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,免疫荧光染色检测α平滑肌肌动蛋白的表达,通过透射电镜观察细胞超微结构,Western Blot检测α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1蛋白的表达。结果体内实验发现载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂喂养2周、4周后血管外膜检测到α平滑肌肌动蛋白的阳性表达,8周后呈现弱阳性,随高脂喂养时间增加,载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉外膜细胞转化生长因子β1表达增强。而C57BL/6小鼠血管外膜细胞一直未检测到α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1的阳性表达。体外实验观察到载脂蛋白E基因敲除小鼠血管外膜成纤维细胞部分表现为α平滑肌肌动蛋白阳性,肌丝明显增多,α平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1蛋白表达水平都明显高于野生型C57BL/6小鼠(P<0.05),而C57BL/6小鼠血管外膜成纤维细胞则表现为α平滑肌肌动蛋白阴性,超微结构无明显改变。结论动脉粥样硬化病灶形成早期血管外膜成纤维细胞表型即转化为肌成纤维细胞。

野百合碱所致肺动脉高压大鼠模型中碱性成纤维细胞生长因子、内皮素-1及其受体的表达和外源性NO的作用

目的 :探讨野百合碱 (MCT)肺动脉高压模型大鼠肺组织中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、内皮素 - 1(ET - 1)和内皮素A受体 (ETAR)的表达 ,并观察吸入外源性NO的作用。方法 :通过腹腔注射MCT建立肺动脉高压大鼠模型 ;使用NO吸入装置给予大鼠外源性NO ;采用免疫组织化学方法定量检测不同组间肺组织中bFGF、ET - 1及ETA 受体的表达。结果 :模型组肺动脉压、右心室肥厚程度、bFGF、ET - 1及ETA 受体的表达明显高于对照组 ,外源性NO吸入能明显减低肺动脉压、右室肥厚程度、bFGF、ET - 1及ETA 受体的表达。结论 :bFGF、ET -1及ETA 受体可能参与了MCT所致肺动脉高压的发生发展 ,外源性NO吸入可能通过ET - 1及ETA 受体途径阻止或逆转肺动脉高压的发展 ,但如何通过bFGF起作用还有待探讨。

损伤动脉外膜重塑和成纤维细胞表型的变化

观察兔腹主动脉损伤后血管外膜及外膜细胞增殖和表型特征的变化 ,采用病理形态学、计算机图像分析、免疫组织化学和透射电镜方法观察兔腹主动脉损伤后血管外膜和外膜细胞的变化。结果发现 ,球囊损伤后 3天、7天、14天和 2 8天血管外膜厚度均显著增加。外膜细胞密度在损伤后 3天开始增加 ,7天显著增加。外膜细胞增殖指数在损伤后 3天达到高峰 ,7天仍显著增高。外膜细胞的α actin染色反应在损伤后 3天由阴性转为弱阳性 ,7天和 14天呈强阳性。损伤后 7天和 14天外膜细胞大量微丝和粗面内质网明显扩张 ,呈现出肌成纤维细胞的特征。结果提示 ,动脉损伤后早期血管外膜显著增厚 ,外膜细胞增殖活跃 ,成纤维细胞逐渐转化为肌成纤维细胞 ,伴有收缩蛋白合成增加 。

干扰素诱导蛋白p204过表达抑制大鼠主动脉血管外膜成纤维细胞凋亡、增殖与迁移

目的:观察干扰素诱导蛋白p204过表达对大鼠主动脉血管外膜成纤维细胞(VAFs)凋亡、增殖与迁移的影响。方法:分别应用携带p204基因(Ifi204)的慢病毒颗粒(Ifi204-Lv组)、空载慢病毒颗粒(Con-Lv组)感染VAFs,未经处理的VAFs作为阴性对照组。用噻唑蓝(MTT)比包法检测VAFs增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(realtime q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)分别检测p204、抑癌因子p53及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21WAF(p21)的mRNA和蛋白表达。结果:Ifi204-Lv组与Con-Lv组、阴性对照组相比较,细胞增殖降低[(吸光度值),48 h:0.53±0.05 vs 0.66±0.03、0.63±0.06;72 h.0.89±0.06 vs 1.02±0.06、1.01±0.07]及迁移距离缩短[(像素),61.00±1.83 vs 74.50±6.25、75.50±7.85]、数量降低(61.75±10.69 vs 155.25±10.21、153.75±9.40),差异均有统计学意义(P均<0.05),但组问比较细胞凋亡率差异无统计学意义。与Con-Lv组、阴性对照组相比,Ifi204-Lv组的p204(3.45±0.15 vs 2.09±0.10、2.06±0.09)、p53(3.41±0.09 vs2.06±0.07、2.10±0.06)及p21(3.0l±0.08 vs2.05±0.06、2.11±0.08)的mRNA和蛋白表达均上调,差异均有统计学葸义(P均<0.05)。结论:p204过表达可抑制大鼠VAFs增殖与迁移,其机制可能部分与激活p53及p21表达有关。

NR1D1在血管外膜成纤维细胞增殖和迁移中的作用

目的探讨核受体亚家族1组D成员1(nuclear receptor subfamily 1,group D,member 1,NR1D1)在小鼠血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblasts,AFs)增殖和迁移中的作用及机制。方法培养C57BL/6J小鼠原代AFs,用携带Nr1d1基因的腺病毒转染AFs过表达NR1D1,用SKL2001恢复β-连环蛋白(β-catenin)表达。增殖细胞核抗原(Ki-67)细胞免疫荧光染色和CCK-8试剂盒用于检测细胞增殖,划痕实验用于检测细胞迁移速度。qPCR检测Nr1d1的mRNA水平,Western blot检测NR1D1、β-catenin蛋白水平。为了探究NR1D1在血管内膜增生中的作用,将20只雄性野生型C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、颈动脉内皮损伤组、假手术+SR9009(NR1D1激动剂)组以及颈动脉内皮损伤+SR9009组,每组5只。造模完成后按组分别腹腔注射DMSO或SR9009(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),持续14 d。造模成功28 d后取材,HE染色观察颈动脉内膜增生程度。结果过表达NR1D1明显降低Ki-67阳性细胞率(P<0.01)及总细胞数目(P<0.01),并且使AFs划痕愈合速度减慢(P<0.01)。过表达NR1D1明显抑制β-catenin表达(P<0.05)。SKL2001恢复β-catenin表达后,过表达NR1D1对AFs增殖和迁移的抑制作用消失(P<0.01)。上调NR1D1活性能减轻颈动脉内皮损伤后内膜增生(P<0.01)。结论NR1D1可能通过抑制β-catenin表达,从而抑制小鼠AFs的增殖和迁移。

川芎、黄芪对自发性高血压大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨川芎、黄芪对自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的抑制作用。方法:以单用川芎或川芎黄芪合剂的 SHR 血清检测对培养的 SHR 胸主动脉外膜成纤维细胞~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入的影响。结果:川芎和川芎、黄芪合用对 SHR 的血压和心率没有影响,川芎血清组和川芎黄芪合剂血清组与 SHR 血清组比较,~3H-TdR 的掺入量差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:川芎、黄芪能抑制 SHR 胸主动脉外膜成纤维细胞增殖,这些效应可能与它们的钙离子拮抗有关。

血管外膜成纤维细胞在动脉粥样硬化及PCI后再狭窄中的作用

血管外膜是动脉粥样硬化(AS)和经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄等血管重构疾病的"积极参与者"。血管外膜不仅发挥简单的支持血管、提供营养物质的作用,越来越多的研究表明,外膜还主动参与了AS和PCI后再狭窄的病理过程。作为血管外膜最重要的组成部分,外膜成纤维细胞(AF)通过活化、增殖、迁移,分泌细胞因子和细胞外基质导致血管外膜和内膜的增厚和管腔狭窄。另外,AF活化后还通过参与一氧化氮的调节、氧化应激和炎症反应等促进AS和PCI后再狭窄的形成。

损伤家兔动脉后外膜成纤维细胞增殖、表型变化与TGF-β1表达的关系

目的 :观察损伤家兔动脉后外膜成纤维细胞增殖、表型变化与TGF -β1表达的关系。 方法 :采用免疫组化、透射电镜和原位杂交技术 ,观察兔腹主动脉损伤后外膜细胞增殖、细胞表型、超微结构和TGF -β1mRNA表达水平的变化。结果 :损伤后 3d和 7d血管外膜PCNA阳性细胞显著增多 ,14d接近正常。外膜细胞在损伤后逐渐获得α -actin表达 ,3d呈弱阳性 ,7d和 14d呈强阳性改变。损伤后 7d和 14d外膜细胞发生了显著的超微结构改变 :大量的微丝出现和粗面内质网明显扩张 ,呈现出肌成纤维细胞的特征。损伤后 3d ,外膜开始出现TGF -β1mRNA表达 ,7d和 14d表达持续上调 ,至 2 8d表达开始下调。结论 :提示动脉损伤后外膜成纤维细胞增殖水平和表型变化与TGF

缺氧对肺动脉成纤维细胞MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的:探讨缺氧对肺动脉成纤维细胞(Fpa)分泌基质金属蛋白酶(MMPs)、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)的影响。方法:采用酶谱法测定Fpa培养基中MMP-2的酶活性,免疫印迹法检测培养基中MMP-2、TIMP-1的蛋白水平,免疫组化法测定细胞原位的蛋白表达,RT-PCR法检测mRNA表达量。结果:缺氧后Fpa分泌的MMP-2酶活性、细胞内外蛋白表达量、mRNA表达量均下降;而TIMP-1的表达则呈相反变化。结论:缺氧可使肺动脉成纤维细胞MMP-2/TIMP-1的表达失衡,可能参与缺氧性肺血管重建。

罗格列酮及环格列酮对血管紧张素Ⅱ体外诱导大鼠主动脉外膜成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体(PPAR)γ激动剂罗格列酮、环格列酮对大鼠主动脉外膜成纤维细胞(AF)增殖的影响,并比较电流排除(ECE)、四甲基偶氮唑盐(MTT)2种方法检测增殖的差异。方法:采用组织贴块法原代培养AF并传代。取第5代纯化细胞血清饥饿24h,然后用不同浓度(0、1、5、10、50μmol/L)的罗格列酮、环格列酮加或不加血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激24h,用ECE、MTT2种方法检测细胞增殖活力。结果:与未加AngⅡ组比较,加AngⅡ组的细胞活力升高(P<0.05),10、50μmol/L罗格列酮、环格列酮能够抑制AF增殖(P<0.05),5、10、50μmol/L罗格列酮、环格列酮能够抑制AngⅡ诱导的AF增殖(P<0.05)。ECE与MTT结果相关性好(r=0.667,P<0.001)。结论:罗格列酮、环格列酮能够抑制AngⅡ诱导的AF增殖,ECE法可准确检测细胞增殖。

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠主动脉外膜成纤维细胞迁移的影响

目的:探讨PPARγ激动剂罗格列酮(ROSI)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠主动脉外膜成纤维细胞(AFs)迁移的影响。方法:采用组织贴块法原代培养AFs并传代。取第5代纯化细胞用于实验,分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+0.1μmol/LROSI组、AngⅡ+1.0μmol/LROSI组、AngⅡ+10μmol/LROSI组,采用TranswellChamber测试细胞迁移。另取AFs分为4组:空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+10μmol/L ROSI组和AngⅡ+10μmol/L ROSI+GW9662组,用Western blotting检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达。另取AFs同上分为4组,采用明胶酶谱法检测MMP-2活性。结果:AngⅡ能促进AFs的迁移,ROSI可呈剂量依赖地抑制AFs的迁移(P<0.05)。ROSI能够降低AFs MMP-2蛋白的表达及MMP-2的活性。结论:ROSI可抑制AngⅡ诱导的大鼠AFs的迁移,其机制可能与抑制MMP-2的表达及活性有关。

碱性成纤维细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞移植治疗肺动脉高压

背景:目前正在兴起的干细胞治疗技术及基因修饰技术有可能在肺动脉高压治疗中获得独特疗效。目的:探讨携带碱性成纤维细胞生长因子基因的骨髓间充质干细胞移植对肺动脉高压大鼠血流动力学水平的影响。方法:选择3周龄SD雄性大鼠,于体外进行骨髓间充质干细胞培养及纯化,在腺病毒介导下实施基因转染,使碱性成纤维细胞生长因子基因成功导入骨髓间充质干细胞。将60只SD大鼠给予野百合碱腹腔注射(50 mg/kg)进行肺动脉高压模型复制,随机分成3组,其中肺动脉高压组于颈内静脉移植1 m L的L-DMEM培养基,骨髓间充质干细胞组于颈内静脉移植1 m L空腺病毒载体转染的骨髓间充质干细胞悬液,碱性成纤维细胞生长因子组于颈内静脉移植1 m L腺病毒介导下碱性成纤维细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞悬液。结果与结论:经3周治疗后,各组大鼠动脉血压差异无显著性意义(P>0.05);其中碱性成纤维细胞生长因子组大鼠的肺动脉收缩期压力和平均肺动脉压明显低于肺动脉高压组、骨髓间充质干细胞组,差异有显著性意义(P<0.05);各组大鼠右心室的肥大指数比较差异无显著性意义(P>0.05);碱性成纤维细胞生长因子组大鼠血浆内皮素1水平明显低于肺动脉高压组、骨髓间充质干细胞组,差异有显著性意义(P<0.05)。结果显示携带碱性成纤维细胞生长因子的骨髓间充质干细胞移植,能够改善肺动脉高压大鼠肺血管的血流动力学水平,保护机体血管的内皮细胞,并拮抗血管的收缩。