肺岩宁方介导Atg5对肺癌A549细胞自噬调控抗肺癌侵袭转移的实验研究

目的探讨肺岩宁方(Feiyan Ning Decoction,FYN)通过介导Atg5(自噬相关靶向基因5,Autophagy-related gene 5)自噬相关基因调控人肺腺癌A549细胞自噬,及其对A549肺癌细胞增殖、迁移、侵袭等作用的影响。方法肺岩宁方干预培养肺癌A549细胞,通过运用CCK-8(Cell Counting kit-8)细胞增殖实验检测肺岩宁方对细胞增殖抑制率的影响,显微镜下观察肺岩宁方作用后的细胞形态学改变;采用划痕实验检测肺岩宁方及自噬抑制剂氯喹(Chloroquine diphosphate salt,CQ)对肺癌A549细胞迁移能力;运用Transwell细胞侵袭实验检测肺岩宁方及氯喹对肺癌A549细胞侵袭能力;运用Western Blot检测自噬相关蛋白Atg5、LC3表达情况;运用透射电子显微镜观察肺癌A549细胞在肺岩宁方干预下的自噬结构形态改变情况。结果CCK8检测试验结果:肺岩宁方能有效抑制A549细胞增值活力(P<0.01),其优化浓度为200μg mL-1;划痕实验结果:与对照组比,肺岩宁方干预A549细胞迁移能力减弱(P<0.05),A549细胞在FYN联合CQ的作用下迁移能力明显减弱(P<0.01);Transwell实验结果:与对照组比较,肺岩宁方抑制细胞侵袭转移能力(P<0.05),FYN联合CQ细胞侵袭力明显抑制(P<0.05);Western Blot实验结果:肺岩宁方下调自噬相关蛋白Atg5、LC3表达能力(P<0.01);透射电子显微镜观察结果:肺岩宁方抑制自噬结构的出现。结论肺岩宁方介导Atg5自噬相关基因,具有调控人肺腺癌A549细胞自噬能力,可抑制A549细胞增殖活力、迁移能力、侵袭转移水平。

缺氧条件下肺岩宁方抑制TC2N的表达对肺癌细胞培养基诱导的HUVEC细胞增殖、迁移侵袭和管腔形成的影响

目的探讨缺氧条件下肺岩宁方(FYN)对肺癌细胞培养基诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移侵袭和管腔形成的影响。方法使用不同浓度的肺岩宁方(200-6400μg·mL^(-1))处理HUVEC细胞,CCK-8法检测细胞存活率,计算其半数抑制浓度(IC_(50)),确定最佳干预浓度。使用A549细胞培养基在缺氧条件下诱导血管新生模型,将HUVEC细胞分为对照组(Control)、模型组(Model)、800μg·mL^(-1)肺岩宁方组(FYN)、100μg·mL^(-1)贝伐珠单抗组(Bevacizumab,阳性对照)、800μg·mL^(-1)肺岩宁方+慢病毒载体组(FYN+vector)、800μg·mL^(-1)肺岩宁方+TC2N过表达组(FYN+TC2N),每组设置6个复孔。分别检测细胞增殖、迁移与侵袭,管腔生成实验评价血管形成,qRT-qPCR检测HIF-1α、TC2N基因水平,Western blot法检测HIF-1α、TC2N、E-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达。结果肺岩宁方对HUVEC细胞的IC_(50)为893.00μg·mL^(-1);与对照组比较,模型组细胞存活率、细胞迁移与侵袭能力、管腔形成节点数、Vimentin、Snail、HIF-1α、TC2N基因及蛋白表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05);与模型组比较,肺岩宁方组与贝伐珠单抗组细胞存活率、细胞迁移与侵袭能力、管腔形成节点数、Vimentin、Snail、HIF-1α、TC2N基因及蛋白表达降低,E-cadherin表达升高(P<0.05);与肺岩宁方+慢病毒载体组比较,肺岩宁方+TC2N过表达组细胞存活率、细胞迁移与侵袭能力、管腔形成节点数、Vimentin、Snail、TC2N基因及蛋白表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05)。结论肺岩宁方可通过抑制TC2N的表达,抑制HUVEC细胞增殖、迁移、侵袭与血管生成。

基于网络药理学与实验验证探讨肺岩宁方治疗非小细胞肺癌机制

目的通过网络药理学筛选肺岩宁方治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的潜在靶点和相关通路并通过实验验证其可能的作用机制。方法检索TCMSP数据库和相关文献,获取肺岩宁方的有效化学成分和潜在作用靶点,查询Genecards、DisGeNET疾病数据库预测非小细胞肺癌疾病相关靶点。以非小细胞肺癌疾病靶点与肺岩宁方潜在作用靶点的交集靶点作为研究对象,采用Cytoscape3.7.2软件构建活性成分-靶点网络图。利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络图,通过设置拓扑参数筛选出肺岩宁方治疗非小细胞肺癌的重要靶点,进行GO和KEGG分析,通过GEPIA数据库得到与肺癌病人生存相关的核心靶点。制备不同浓度的肺岩宁方干预HCC827细胞,采用CCK8法检测细胞增殖情况并计算IC_(50);平板克隆形成实验检测肺岩宁方对HCC827细胞克隆形成能力的影响;Transwell侵袭实验检测肺岩宁方对HCC827细胞侵袭能力的抑制作用。采用qP-CRarray技术检测网络药理学预测的核心靶点mRNA的表达水平。结果肺岩宁方共有133个活性成分、521个相关靶点作用于非小细胞肺癌,GO和KEGG分析表明肺岩宁方通过11种成分影响71个重要靶点而发挥抗非小细胞肺癌作用,其中有14个靶点与肺癌病人生存相关,可能与PI3K-AKT等多种信号通路相关。肺岩宁方能抑制HCC827细胞的增殖能力,克隆形成能力以及侵袭能力,并下调PI3K-AKT信号通路的关键基因KIT的mRNA水平。结论肺岩宁方治疗NSCLC的作用机制可能是通过下调KIT调控PI3K-AKT信号通路来实现的。

肺岩宁方组分对小鼠肿瘤血管生成与MMP-2、MMP-9关系的研究

目的观察中药肺岩宁方组分对C57BL/6小鼠Lewis肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9mRNA及蛋白表达的影响。方法建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组。灌胃21天,第22天处死,取肿瘤组织,链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)检测C57BL/6小鼠Lewis肿瘤MVD,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法和SP法检测MMP-2、MMP-9mRNA及蛋白表达水平。结果肺岩宁组、补肾组、抗癌组小鼠肿瘤MVD均较模型组和益气组显著降低(P<0·01,P<0·05),而益气组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0·05)。肺岩宁及其拆方的各组MMP-2mRNA和蛋白(除益气组外)表达显著低于模型组(P<0·05,P<0·01),补肾组、抗癌组肿瘤MMP-2mRNA表达也显著低于益气组(P<0·05);肺岩宁组、补肾组、抗癌组的小鼠肿瘤MMP-9mRNA和蛋白表达均显著低于模型组和益气组(P<0·05,P<0·01)。结论补肾、抗癌中药抑制肿瘤血管生成的靶点可能与抑制MMP-2、MMP-9表达、保护肿瘤微环境有关。

肺岩宁方联合抗瘤增效方对中晚期肺腺癌患者化疗后癌因性疲乏、免疫功能及肿瘤标志物影响的临床研究

目的观察肺岩宁方联合抗瘤增效方对中晚期肺腺癌患者化疗后癌因性疲乏、免疫功能及肿瘤标志物的影响。方法将132例中晚期肺腺癌化疗后患者随机分为治疗组和对照组,每组66例。对照组予抗瘤增效方,治疗组予肺岩宁方联合抗瘤增效方。两组疗程均为3个月,观察比较癌因性疲乏量表(CFS)与简易疲乏量表(BFI)评分、免疫相关指标[CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD56^+16(NK)、CD19^+]、肿瘤标志物(CEA、CA199、CYFRA21-1、CA125)水平的变化情况。结果①最终完成试验者124例,其中治疗组63例,对照组61例。②组间治疗后比较,治疗组BFI评分及CFS评分中的躯体维度、情感维度、总分明显低于对照组(P<0.05)。③组间治疗后比较,治疗组CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD56^+16(NK)水平明显高于对照组(P<0.05)。④组间治疗后比较,治疗组CYFRA21-1、CA125水平明显低于对照组(P<0.05)。结论与单用抗瘤增效方相比,肺岩宁方联合抗瘤增效方可更好地改善化疗后中晚期肺腺癌患者的癌因性疲乏程度,提高其外周血淋巴细胞水平,降低血清肿瘤标志物(CYFRA21-1、CA125)水平,从而改善患者的预后及生存质量。

肺岩宁方抗C57小鼠Lewis肿瘤血管生成的实验研究

目的观察肺岩宁方对C57小鼠Lewis肿瘤微血管密度(MVD)、血管阳性面积和血管内皮生长因子(VEGF)的影响,并探讨其作用机理。方法120只小鼠接种Lewis肺癌细胞株造模,随机分为对照组、化疗组、肺岩宁组、综合组,接种后第5d进行药物干预;在治疗的第14d、21d、28d每组分别随机处死10只小鼠,石蜡包埋肿瘤组织,免疫组化法测定肿瘤切片的MVD、血管阳性面积和VEGF表达。结果第14d,化疗组、综合组、肺岩宁组小鼠肿瘤MVD和血管阳性面积均显著低于对照组(P<0.05);第21d和28d,综合组和肺岩宁组小鼠肿瘤MVD和血管阳性面积均显著低于化疗组(P<0.05);对照组和化疗组VEGF表达逐渐升高,而肺岩宁组和综合组呈降低趋势。结论肺岩宁方可减少VEGF表达和降低肿瘤MVD以抑制肿瘤血管生成。

肺岩宁方调节上皮-间质细胞转化因子Twist、Snail、Sip1及E-cadherin的研究

目的:研究中药复方肺岩宁方对上皮-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)因子Twist、Snail、Sip 1及E-cadherin mRNA表达的影响。方法:选用C57小鼠Lewis肺癌转移肿瘤模型,采用实时PCR的方法观察肺岩宁方作用前后肿瘤组织和转移肺组织中Twist、Snail、Sip 1及E-cadherin的mRNA表达。结果:Twist、Snail在C57 Lewis肺癌转移肺组织中mRNA表达较正常C57小鼠肺组织中明显增高(P<0.01),Sip 1则无明显差异(P>0.05),而E-cadherin mRNA表达降低(P<0.01);C57Lewis肺癌小鼠经过肺岩宁方治疗后,Twist、Snail在肿瘤组织和转移肺组织中mRNA表达较模型组明显降低(P<0.05)。而E-cadherin的表达增高(P<0.01),但Sip 1 mRNA表达在肺岩宁方治疗前后无明显变化(P>0.05)。结论:在C57小鼠Lewis肺癌转移肿瘤模型中证实了上皮-间质细胞转化是肿瘤转移的关键步骤之一,调节上皮-间质细胞转化核转录因子Twist、Snail和标志因子E-cadherin是肺岩宁方抗肿瘤转移的重要途径之一。

肺岩宁方及其不同组分对小鼠Lewis肺癌移植瘤VEGF、bFGF表达及血管生成的影响

肺岩宁方是徐振晔教授研制的具有防治肺癌侵袭转移作用的经验方,本实验在前期观察到肺岩宁方有抑制肺癌血管生成作用的基础上,进一步研究肺岩宁方及其不同组分对Lewis小鼠移植瘤VEGF、bFGF表达的影响,探讨该方抑制肿瘤血管生成的可能有效组分和作用靶点。

肺岩宁方对晚期非小细胞肺癌患者血清调节性T细胞CD_4^+CD_(25)^+的影响

目的:观察益气养精的中药方剂肺岩宁方对晚期非小细胞肺癌患者血清调节性T细胞CD4+CD25+、CD3、CD4、CD8、NK水平以及中医证候的影响。方法:30例确诊为Ⅲa、Ⅲb、Ⅵ期非小细胞肺癌患者,中医辨证为精气亏虚型,中药肺岩宁方治疗2个月,观察患者血清CD4+CD25+、CD3、CD4、CD8、NK以及中医证候的变化。结果:肺岩宁方可以提高晚期非小细胞肺癌患者CD3、CD4及NK细胞水平,同时显著降低CD4+CD25+调节性T细胞水平,对中医证候改善的总有效率为87%,同时观察到治疗前后中医证候积分与CD4+CD25+调节性T细胞水平具有正相关性。结论:肺岩宁方可以明显改善患者细胞免疫功能,这可能是肺岩宁方抑制肿瘤生长以及抗侵袭转移的作用机制之一。

肺岩宁方对肿瘤坏死因子α诱导的人肺癌细胞系核转录因子κB基因表达的影响(英文)

目的:探讨中药肺岩宁方含药血清对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人肺癌细胞系A549核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)基因表达的影响。方法:制备肺岩宁方含药血清,以肺癌细胞系A549为靶细胞,确定肺岩宁方含药血清用药浓度。将A549细胞分为对照血清组、TNF-α组、肺岩宁方含药血清组和综合治疗组。观察用药前后A549细胞大体形态变化;四唑单钠盐法测定肺岩宁方含药血清对细胞增殖的影响;蛋白印迹法检测肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核NF-κB及抑制性核转录因子(inhibitorκBα,IκBα)表达的影响;将人NF-κB重组质粒用脂质体转染法导入A549细胞24h后,用肺岩宁方含药血清治疗24h,采用双荧光素酶报告基因系统测定肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核NF-κBp65转录活性的影响。结果:与对照血清比较,15%和20%肺岩宁方含药血清对A549细胞具有明显的增殖抑制作用(P<0.05,P<0.01)。1μg/LTNF-α能够明显提高NF-κB基因的表达,与肺岩宁方含药血清共同作用后,能够显著抑制它的表达(P<0.01),而细胞内IκBα的表达差异无统计学意义(P<0.05);肺岩宁方含药血清能够显著降低A549细胞经NF-κB重组质粒转染后的转录活性(P<0.01)。结论:肺岩宁方含药血清可抑制人肺癌细胞系增殖,可能是通过对TNF-α诱导的NF-κB基因活性的抑制作用实现的。

肺岩宁方对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及管腔形成的影响

目的:观察中药肺岩宁方含药血清对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、迁移及管腔形成的影响。方法:采用新鲜产后脐带,分离HUVEC。SD大鼠灌胃肺岩宁方制备肺岩宁方含药血清,采用人肺腺癌细胞A549制备条件培养液。用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法观察肺岩宁方含药血清对HUVEC、人肺腺癌细胞A549和A549细胞条件培养液诱导HUVEC增殖的抑制作用;采用Boyden Chamber Transwell法检测其对HUVEC细胞迁移的影响;管腔形成实验评价其对HUVEC形成管腔能力的影响。结果:与同浓度对照血清相比,肺岩宁方含药血清能够抑制HUVEC及肺癌细胞条件培养液诱导的内皮细胞的增殖(P<0.01,P<0.05),高浓度肺岩宁方含药血清能够抑制肿瘤细胞A549的体外增殖,肺岩宁方含药血清(12.5%～37.5%)在体外能抑制20%胎牛血清诱导的内皮细胞的迁移(P<0.05,P<0.01)以及初级管腔的形成。结论:肺岩宁方具有明显的抑制新生血管生成的作用,这可能是肺岩宁方抗肺癌侵袭转移的机制之一。

肺岩宁方下调裸鼠人肺腺癌细胞移植瘤中磷酸化Akt和缺氧诱导因子1α蛋白表达

目的:观察肺岩宁方对人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤中缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达的丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号调节的影响。方法:32只A549荷瘤裸鼠随机分为4组:模型组、顺铂组、肺岩宁方组和综合治疗(顺铂加肺岩宁方)组,每组8只。化疗组和综合治疗组于第1、3、5天腹腔注射顺铂各0.1mg,肺岩宁方组和综合治疗组予肺岩宁方0.4ml灌胃,持续21d。观察抑瘤率,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reac-tion,RT-PCR)检测移植瘤中HIF-1α mRNA表达,免疫组化法检测移植瘤中HIF-1α和磷酸化Akt(phos-phorylated Akt,p-Akt)蛋白表达。结果:肺岩宁方组裸鼠抑瘤率为34.17%,综合治疗组为64.38%。RT-PCR结果显示,综合治疗组HIF-1α mRNA的表达水平低于模型组(P<0.05)。免疫组化实验显示,化疗组、肺岩宁方组和综合治疗组移植瘤HIF-1α蛋白表达均明显低于模型组(P<0.01);肺岩宁方组和综合治疗组p-Akt蛋白表达明显低于模型组(P<0.05)。结论:益气养精法为主的肺岩宁方可抑制肺癌肿瘤生长,并与顺铂有协同作用。肺岩方对HIF-1α蛋白表达的抑制作用可能与下调p-Akt表达有关。

肺岩宁方对A549裸鼠移植瘤VEGF与HIF-1α表达的影响

目的观察肺岩宁方对A549裸鼠移植瘤的抑制作用及对VEGF、HIF-1α表达的影响。方法将A549荷瘤鼠随机分为4组:模型组、化疗组、肺岩宁方组和综合治疗组,化疗组和综合治疗组DDP0.1mg腹腔注射3d,肺岩宁方组和综合治疗组中药灌胃21d。观察抑瘤率,RT-PCR和免疫组化法检测移植瘤VEGF和HIF-1α表达。结果肺岩宁方组抑瘤率为34.17%,低于模型组(P<0.05);RT-PCR结果显示,综合治疗组、肺岩宁方组和化疗组的VEGF mRNA的表达明显低于模型组(P<0.05,P<0.01);综合治疗组HIF-1α mRNA的表达水平低于模型组(P<0.05),其余各组无显著差异。VEGF、HIF-1α光密度指数化疗组、肺岩宁方组和综合治疗组均明显低于模型组(P<0.01)。结论益气养精法为主的肺岩宁方有一定的抑制肺癌生长的作用,且与顺铂有协同作用,肺岩宁方可能通过对HIF-1α的抑制,达到对VEGF的表达调控,从而抑制血管生成,控制肿瘤生长。

肺岩宁方调控MALAT1抑制A549肺癌细胞侵袭的机制研究

目的探讨肺岩宁方调控肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)抑制A549肺癌细胞侵袭的机制。方法向A549细胞转染LV-vector、LV-over/MALAT1慢病毒载体,应用肺岩宁方(0～500μg/ml)干预细胞,应用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测MALAT1表达情况;应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测肺岩宁方对肿瘤细胞增殖的影响;细胞侵袭实验检测肿瘤侵袭能力;Western blot法检测Wnt/β-catenin/EMT信号通路相关蛋白的表达。结果细胞侵袭实验结果显示,过表达MALAT1可增强A549细胞的侵袭能力,与正常对照组和慢病毒载体组相比,差异有统计学意义(P<0.01);与正常对照组相比,肺岩宁方可抑制A549细胞侵袭,差异有统计学意义(P<0.01),但过表达MALAT1后可减弱肺岩宁抑制细胞侵袭的能力。MTT结果显示,肺岩宁方可抑制肺癌A549细胞增殖,且呈浓度依赖性。qRT-PCR结果显示,肺岩宁方可下调MALAT1表达。Western blot结果显示,MALAT1可下调E-cadherin蛋白,上调N-cadherin、Snail及细胞核中β-catenin的蛋白水平,肺岩宁方能上调E-cadherin蛋白,下调N-cadherin、Snail及细胞核中β-catenin的蛋白水平,但过表达MALAT1可削弱肺岩宁对这些蛋白的调控作用。结论 MALAT1过表达通过激活Wnt/β-catenin通路,加速EMT进程促进A549肺癌细胞侵袭;肺岩宁方能够通过下调MALAT1,抑制Wnt/β-catenin/EMT信号轴,从而阻止A549肺癌细胞侵袭。

整合素连接激酶在C57小鼠Lewis肺癌中的表达及肺岩宁方对其的调控作用

目的探讨肺岩宁方对整合素连接激酶(integrin-linked kinase.ILK)mRNA及蛋白表达的影响。方法建立C57小鼠Lewis肺癌模型。将C57BL-6纯系10周龄雄性小鼠随机分为正常组、模型组、顺铂(DDP)组、肺岩宁方组,每组10只。正常组正常饲养;模型组以0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;顺铂组在造模后第5天开始给药,在开始给药的第1、3、5天,DDP溶液1ml(含DDP0.1mg)腹腔注射,0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;肺岩宁方组在造模后第5天开始给予肺岩宁方药液0.4ml(生药含量36.1g/kg)灌胃。采用Real time PCR和Western blot方法分别检测ILK在移植瘤组织和转移灶发生的肺组织中mRNA、蛋白水平的表达。结果与正常组比较,模型组肿瘤肺转移率、转移灶及Ilk基因表达差异均有统计学意义(P<0.01),说明模型成功。与模型组比较,肺岩宁方组可以显著降低肺转移灶的发生的作用(P<0.01)。各组移植肿瘤组织中,肺岩宁方组ILK基因表达与模型组比较显著降低(P<0.01);各组肺组织中,与模型组比较,肺岩宁方组ILK基因表达显著下降(P<0.01),而化疗组ILK基因表达反而升高(P<0.01)。与模型组比较,肺岩宁方组ILK蛋白的表达明显降低(P<0.01)。结论肺岩宁具有显著降低ILK基因表达的作用,调控Snail信号途径的关键信号分子ILK基因有可能是肺岩宁方抗肿瘤转移的有效作用靶点所在。

基于中医要素分析以及源于精气理论运用肺岩宁方治疗肺癌

目的:探讨肺癌的中医症候要素分布与临床相关因素的关系以及源于精气理论的肺岩宁方对中医要素的影响。方法:选取2016年11月至2017年11月潍坊市中医院肿收治的肺癌患者118例作为研究对象。采用临床病理学调查方法对118例对象进行阴虚要素、阳虚要素、气虚要素、血虚要素及无虚症要素5种要素类型分型分析,分别应用单因素方差分析、秩和检验、卡方检验分析各要素与年龄、性别、病程、ECOG评分、治疗方法、病理类型及肿瘤位置的关系,并观察肺岩宁方对各中医要素的影响。结果:肺癌的中医要素以阴虚及气虚要素为主,占总要素的94. 07%;阳虚要素与放疗、手术有关(P <0. 05);血虚要素与病程、ECOG评分、手术有关(P <0. 05);气虚要素与ECOG评分有关(P <0. 05);肺岩宁方对阴虚及气虚要素改善明显(P <0. 05)。结论:阴虚要素及气虚要素在肺癌的中医要素分布上占主导地位,具有显著性;肺岩宁方对改善精气两亏型肺癌患者的症状及生命质量上有显著的疗效,具有重要的应用价值。

中药肺岩宁方治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察——对血清CEA CYFRA21-1及免疫功能的影响

目的:观察肺岩宁方对晚期非小细胞肺癌患者血清CEA、CYFRA21-1水平,免疫功能以及中医证候的影响。方法:50例确诊为Ⅲa、Ⅲb、Ⅳ期非小细胞肺癌患者,中医辨证为精气亏虚型,中药肺岩宁方治疗2个月。结果:肺岩宁方可以降低血清CEA和CYFRA21-1水平,提高晚期非小细胞肺癌患者CD3、CD4、CD4/CD8细胞水平,降低CD8细胞水平。患者神疲乏力、动则气喘、腰膝酸痛、少气懒言等症状明显改善,卡氏评分上升6.06。结论:肺岩宁方具有明显改善晚期肺癌患者的生活质量,显著提高患者的免疫功能的作用。

肺岩宁方对Lewis荷瘤小鼠肿瘤相关性巨噬细胞极化的调控作用研究

目的:探究肺岩宁方对Lewis荷瘤小鼠肿瘤相关性巨噬细胞极化的调控作用及分子机制。方法:36只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、正常肺岩宁组、模型肺岩宁组,采用Lewis肺癌细胞株皮下注射建立移植瘤模型。实验干预2周后测小鼠瘤质量计算抑瘤率,免疫组化染色后采用Image J图像分析软件计算小鼠皮下瘤组织中CD68、CD206阳性表达结果,ELISA检测小鼠血清中IL-4、IL-10含量,Western blotting检测小鼠皮下瘤组织中PI3K、C/EBPβ、PD-1、PD-L1表达水平。结果:模型肺岩宁组小鼠瘤质量明显低于模型对照组(P<0.05),模型肺岩宁组抑瘤率为60.59%。模型肺岩宁组小鼠瘤组织中CD68的平均光密度值明显高于模型对照组(P<0.05),CD206的平均光密度值明显低于模型对照组(P<0.05)。模型对照组小鼠血清IL-4、IL-10含量明显高于正常对照组、正常肺岩宁组(P<0.05),模型肺岩宁组小鼠血清IL-4、IL-10含量明显低于模型对照组(P<0.05)。模型肺岩宁组小鼠瘤组织中PI3K、C/EBPβ、PD-1、PD-L1表达水平明显低于模型对照组(P<0.05)。结论:肺岩宁方可能通过下调IL-4、IL-10分泌,抑制PI3K/C/EBPβ和PD-1/PD-L1信号通路,调控肿瘤微环境中TAMs极化,促使其表型向M1型转变,从而发挥抑瘤作用。

肺岩宁方联合吉非替尼对肺腺癌H1975细胞体外增殖的影响

目的观察吉非替尼耐药肺腺癌H1975细胞在肺岩宁方、吉非替尼作用下体外增殖情况,探讨肺岩宁方逆转吉非替尼耐药可能的机制。方法选取肺腺癌T790M突变耐药株H1975细胞,分为对照组、吉非替尼组、肺岩宁方组和联合干预组。CCK-8法检测各组细胞在不同时间点(0 h、24 h、48 h、72 h)的增殖率;Western blot检测EGFR-PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果CCK-8结果显示,肺岩宁方组对于H1975细胞在体外增殖呈剂量依赖性抑制,即随着药物浓度的提高而增加;联合干预组对于抑制细胞体外增殖效果较单药明显。Western blot显示,联合干预组可下调p-EGFR、p-Akt、pmTOR的表达。结论肺岩宁方联合吉非替尼可抑制H1975细胞的体外增殖,体外抑制效果较单药治疗明显;其延缓吉非替尼耐药机制可能与下调EGFR-PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达有关。

肺岩宁方通过RANK-RANKL途径调节肺癌骨转移中破骨细胞活化机制的研究

目的:探讨肺岩宁方对肺癌骨转移裸小鼠模型转移性骨破坏及破骨细胞活化的影响。方法:将40只BALB/c裸鼠随机分为空白组、模型组、唑来膦酸组、肺岩宁组,每组10只,除空白组外均采用骨髓腔内注射人肺腺癌A549细胞悬液的方法建立骨转移模型,各干预组给予对应药物治疗,共28d,期间记录体重及生存状态,28d后取骨组织进行Mirco-CT摄片分析、HE染色及抗酒石酸的酸性磷酸酶(TRAP)染色。结果:肺岩宁组和唑来膦酸组小鼠体重及生存质量较模型组更高;模型组见明显溶骨性骨破损、肿瘤细胞密集、TRAP(+)细胞数量增多,肺岩宁组和唑来膦酸组骨组织轻度破坏、肿瘤细胞减少、TRAP(+)细胞数量减少。结论:肺岩宁方可能通过抑制RANK-RANKL途径达到减少转移性骨质破坏及破骨细胞活化的作用,显示其作为抗肺癌骨转移药物的应用前景。