基于Wnt/β-catenin信号通路探讨清胰汤对重症急性胰腺炎肺泡上皮细胞损伤的修复机制

目的:探究Wnt/β-catenin信号通路在重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤发病机制中的作用及清胰汤(QYD)的干预机制。方法:将40只大鼠分为假手术(Sham)组、Sham+QYD组、SAP组和SAP+QYD组。采用经胆胰管逆行注射3.5%牛磺胆酸钠建立SAP大鼠模型,造模48 h后取胰腺和肺组织,苏木素-伊红(HE)染色检测组织病理损伤,真空干燥法检测肺湿/干重比值(W/D),ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6水平,TUNEL试剂盒和蛋白免疫印迹法(WB)检测肺组织凋亡情况。免疫荧光法检测CyclinD1、β-catenin与SFTPC双染情况。WB法检测肺组织中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白和下游细胞周期蛋白的表达。结果:与Sham组相比,SAP组大鼠HE切片显示胰腺和肺部病变严重,IL-6含量明显升高,SFTPC表达减少,提示肺泡上皮细胞严重损伤。与SAP大鼠相比,清胰汤治疗后大鼠胰腺和肺组织病理评分、W/D等各项指标均有不同程度改善,IL-6含量减少,凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白和下游细胞周期蛋白表达明显上调,免疫荧光双染结果显示清胰汤治疗组出现更多的双染细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:清胰汤通过激活Wnt/β-catenin信号通路减少肺泡上皮细胞凋亡,进而在促进急性胰腺炎相关肺损伤修复中发挥关键作用。

金合欢素通过调节Sirt1介导的AMPK/Nrf2信号通路改善肺炎链球菌感染引起的肺泡上皮细胞损伤

目的:探讨金合欢素通过调节沉默信息调节因子相关酶1(Sirt1)介导的5'-磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对肺炎链球菌(SP)感染引起的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法:SP感染体外培养的肺泡上皮细胞A549建立细胞损伤模型,采用终浓度分别为0、5、25、50、100、150、200μmol/L的金合欢素处理,CCK-8检测各处理组细胞活力并筛选金合欢素最佳作用浓度。体外培养的A549细胞随机分为5组:对照组、模型组、金合欢素(150μmol/L)组、EX527(Sirt1抑制剂,40μmol/L)组、金合欢素(150μmol/L)+EX527组(40μmol/L),对照组不进行处理,其余各组以SP感染建立细胞损伤模型,150μmol/L金合欢素和40μmol/L EX527分别处理,CCK-8、流式细胞术分别检测各组细胞活力与凋亡率;试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及IL-10、IL-1β、TNF-α水平;免疫印迹法检测各组细胞增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白caspase-9、Bax表达、Sirt1与AMPK/Nrf2信号通路蛋白p-AMPK/AMPK、Nrf2表达。结果:与对照组比较,模型组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS水平、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05)。与模型组、金合欢素+EX527组分别比较,金合欢素组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达均升高(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS、IL-1β、TNF-α水平均降低(P<0.05);EX527组A549细胞活力、SOD、IL-10水平、p-AMPK/AMPK、Sirt1、Nrf2、Ki-67与PCNA蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、MDA、LDH、ROS、IL-1β、TNF-α水平均升高(P<0.05)。结论:金合欢素可通过上调Sirt1表达激活AMPK/Nrf2信号,进而促进抗炎因子分泌,减少ROS和促炎因子产生,减轻炎症与氧化应激,最终缓解神经元损伤。

阿奇霉素对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎症损伤的作用及机制研究

为了探究阿奇霉素对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞增殖、凋亡及Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录启动因子3(STAT3)通路的调控作用,体外培养人肺泡上皮细胞A549,分为空白组(不做干预)、LPS组(10μg/m L LPS处理24 h)、低/中/高浓度试验组(10μg/mL LPS+1、2、4μg/mL阿奇霉素)、阿奇霉素组(10μg/mL LPS+4μg/mL阿奇霉素)、抑制剂组(10μg/mL LPS+50μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂AG490)、阿奇霉素+抑制剂组(10μg/mL LPS+4μg/m L阿奇霉素+50μmol/L AG490)、阿奇霉素+激活剂组(10μg/m L LPS+4μg/m L阿奇霉素+0.5μmol/L JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin)。干预24 h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Hoechst 33258染色法、蛋白免疫印迹法检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平、细胞活力、增殖率、凋亡率、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、细胞周期素D1(Cyclin D1)及JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达水平。结果显示:LPS组细胞炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α表达水平高于空白组,细胞活力低于空白组;与LPS组相比,高浓度试验组炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α表达水平显著降低,细胞活力显著升高。选择在LPS组基础上有差异的4μg/m L阿奇霉素作为阿奇霉素组进行后续试验。LPS组细胞增殖率、Cyclin D1蛋白表达水平低于空白组,细胞凋亡率、Caspase-3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平高于空白组。阿奇霉素组和抑制剂组显著扭转了LPS组上述指标的变化。与阿奇霉素组相比,阿奇霉素+抑制剂组细胞增殖率、Cyclin D1蛋白表达水平进一步显著升高,细胞凋亡率、IL-6、IL-8、TNF-α、Caspase-3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平进一步显著降低,阿奇霉素+激活剂组则显著逆转了上述指标的变化。本研究表明,阿奇霉素可通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻LPS诱导的A549细胞炎症损伤,促进细胞增殖并抑制凋亡。

扁蒴藤素调节CCL2-CCR2信号轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的 探究扁蒴藤素(PT)调节CC趋化因子配体2(CCL2)-CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法 常规培养肺泡上皮细胞A549,将其随机分为Control组(正常培养)、LPS组(10μg/mL LPS处理)、PT-L组(1μmol/L PT)、PT-H组(2μmol/L PT)和PT-H+RS504393组(2μmol/L PT+50 ng/mL CCL2抑制剂RS504393)。采用CCK-8法检测细胞活力;采用EdU实验测定细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;采用Western Blot检测各组细胞中CCL2、CCR2和凋亡相关蛋白表达水平。结果 与Control组比较,LPS组A549细胞吸光度(A)450(48、72 h)、细胞增殖率、Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,CCL2、CCR2、Bax蛋白表达水平上升(P<0.05)。与LPS组比较,PT-L组、PT-H组A549细胞A450(48、72 h)、细胞增殖率、Bcl-2蛋白表达水平上升(P<0.05),细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,CCL2、CCR2、Bax蛋白表达水平下降(P<0.05)。CCL2抑制剂RS504393促进了PT对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的改善作用。结论 PT可能通过下调CCL2-CCR2信号轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤具有改善作用。

肺泡上皮细胞分泌的外泌体调控巨噬细胞极化在急性肺损伤中的作用

外泌体作为细胞间微环境中的信使,能够将信号在细胞之间进行传递。肺泡上皮细胞通过分泌外泌体来调节机体固有免疫反应。在特定的刺激条件下,肺泡上皮细胞分泌的外泌体通过传递不同效应活性物质,靶向调节巨噬细胞极化通路中的基因表达,参与控制肺部炎症反应的巨噬细胞极化调节。本篇综述主要阐述肺泡上皮细胞源性外泌体,通过靶向调节巨噬细胞极化,调控急性肺损伤(acute lung injury,ALI)作用的最新研究进展,为相关研究提供参考。

膜联蛋白A1拟肽AC2-26调控ERK/NF-κB信号通路改善体外循环血清诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤

目的探究AC2-26对体外循环(CPB)血清诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的影响及其作用机制。方法收集16例风湿性心脏病手术患者CPB停机后的无菌血液并分离血清,建立体外循环血清诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤模型。提取健康SD大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞,培养72 h后,随机分为5组即对照组(C组),肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)损伤组(M组),AC2-26+AECⅡ损伤组(A组),AECⅡ损伤+Boc2组(B组),AC2-26+AECⅡ损伤+Boc2组(A+B组)。CCK-8、流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;免疫荧光检测各组肺泡Ⅱ型上皮细胞甲酰肽受体2(FPR2)和肺泡表明活性物质(SPC)表达情况;透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体的影响;Western blot检测各组肺泡Ⅱ型上皮细胞ERK、NF-κB表达情况。结果应用AC2-26后,CPB血清诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖率明显升高,凋亡率明显降低(P<0.05),AC2-26明显抑制ERK及NF-κB蛋白的磷酸化(P<0.05),促进SPC的表达,改善细胞内板层小体结构及形态,这一现象可被甲酰肽受体抑制剂Boc2阻断。结论AC2-26可以减轻CPB血清诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤,其作用机制可能与FPR2调节ERK、NF-κB信号通路有关。

重症急性胰腺炎肺损伤发病机制中的肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的作用及乌司他丁干预的实验研究

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)发病机制中其肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的作用并对乌司他丁对其干预的作用进行分析。方法将42只健康大鼠随机分为3组,分别为假手术组、模型组与乌司他丁干预组,每组14只,以向大鼠十二指肠乳头内侧胰胆管注射脱氧胆酸钠建立SAP大鼠模型,假手术组大鼠仅打开大鼠腹腔轻轻翻动其胰腺后关闭腹腔,乌司他丁干预组于大鼠建模后给予乌司他丁注射。对几组大鼠术后肺组织及胰腺组织的病理变化及相关指标差异进行分析。结果与假手术组比较,SAP组及乌司他丁干预组TNF⁃α、AMY及MDA水平明显更高,乌司他丁干预组与SAP组比较,TNF⁃α、AMY及MDA水平明显更低(P<0.05)。SAP大鼠伴随着明显的肺损伤状况,假手术组、SAP组、乌司他丁干预组肺湿/干比值分别为3.62±0.56、6.48±0.77、4.69±0.63,血气指标PaCO_(2)、PaO_(2)分别为(31.25±1.03)mmHg、(106.52±2.03)mmHg,(48.67±2.01)mmHg、(73.57±2.44)mmHg和(35.22±1.32)mmHg、(90.22±3.01)mmHg),SAP组及乌司他丁干预组大鼠肺湿/干比值及PaCO_(2)明显上升,PaO_(2)明显下降,相较于SAP组,乌司他丁干预组大鼠的肺湿/干比值及PaCO_(2)更低,PaO_(2)更高(P<0.05)。假手术组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率[(3.58±0.57)%]及Ca^(2+)浓度[(34.52±2.35)%]均显著低于SAP组凋亡率[(29.67±4.52)%]及Ca^(2+)浓度[(82.66±4.66)%]及乌司他丁干预组凋亡率[(14.62±3.67)%]及Ca^(2+)浓度[(46.77±5.02)%],乌司他丁干预组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率及Ca^(2+)浓度显著低于SAP组(P<0.05)。假手术组大鼠Caspasee⁃8、BaxmRNA表达均显著低于SAP组及乌司他丁干预组,乌司他丁干预组大鼠Caspasee⁃8、BaxmRNA表达显著低于SAP组(P<0.05)。SAP肺损伤大鼠线粒体细胞破坏明显,乌司他丁对减少线粒体细胞破坏数量具有明显作用。结论SAP肺损伤中肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡可能参与了其作用机制,TNF⁃α、AMY、MDA、Caspasee⁃8、BaxmRNA在肺损伤机制中存在重要作用,乌司他丁干预有利于缓解SAP肺损伤状况,有利于控制病情进展。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

肺泡上皮细胞损伤及修复对急性肺损伤预后的影响

ALI／ARDS是由弥漫性肺损伤，肺泡上皮与微血管内皮屏障的广泛破坏，使肺泡与间质内聚积大量富含蛋白的水肿液。因此有效的肺泡上皮修复至关重要。研究上皮细胞损伤及修复机制对研发ALI的有效治疗策略至关重要。

组蛋白乙酰转移酶GCN5对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的作用

目的探讨组蛋白乙酰转移酶GCN5介导的组蛋白H3乙酰化对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(A549细胞)增殖、凋亡及炎性因子表达的作用。方法将A549细胞随机分为6组:对照组、LPS组、NC+LPS组、GCN5+LPS组、MB-3(GCN5抑制剂)+LPS组和GCN5+MB-3+LPS组。分别比较对照组、LPS组和GCN5+LPS组,以及LPS组、MB-3+LPS组和GCN5+MB-3+LPS组的组蛋白H3乙酰化水平、GCN5表达水平、细胞活性与增殖情况、细胞凋亡情况、炎性因子水平的差异。采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测GCN5 mRNA表达水平;CCK-8试剂盒检测细胞活性;EdU实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测GCN5、H3K9ac、H3K14ac、H3K23ac、Caspase-3和Bcl-2蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果与对照组A549细胞比较,LPS组的H3K9ac、H3K14ac、H3K23ac、Bcl-2蛋白及GCN5 mRNA与蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),细胞活性和增殖能力下降(P<0.05),细胞凋亡、Caspase-3蛋白和炎性因子水平增高(P<0.05)。与LPS组比较,NC+LPS组GCN5 mRNA与蛋白表达水平差异不明显(P>0.05);GCN5+LPS组H3K9ac、H3K14ac、H3K23ac蛋白及GCN5 mRNA与蛋白表达水平均明显增高(P<0.05),细胞活性和增殖能力增高(P<0.05),细胞凋亡和炎性因子水平降低(P<0.05)。与GCN5+LPS组比较,GCN5+MB-3+LPS组的H3K9ac、H3K14ac、H3K23ac蛋白表达水平及细胞活性与增殖能力均降低(P<0.05),细胞凋亡和炎性因子水平增高(P<0.05)。结论GCN5过表达可抵抗LPS诱导的肺泡上皮细胞增殖与凋亡异常及炎性因子分泌,这可能与其提高组蛋白H3乙酰化水平有关。

二甲双胍对肺泡上皮细胞氧化损伤的抑制作用及其机制

目的观察二甲双胍对过氧化氢(H2O2)诱导的人肺泡上皮细胞A549氧化损伤的抑制作用,并基于上皮—间质转化(EMT)及核因子κB(NF-κB)信号通路调控探讨相关机制。方法体外培养A549细胞并分为对照组、模型组、二甲双胍组、BAY 11-7082组、抑制剂组和激活剂组。对照组不给予药物干预,模型组、二甲双胍组、BAY 11-7082组、抑制剂组、激活剂组均给予400µmol/L H2O2刺激24 h构建体外急性肺损伤细胞模型;二甲双胍组分为三个浓度亚组,分别给予2.5、5、10 mmol/L的二甲双胍;BAY 11-7082组加入5 mmol/L的NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082;根据CCK-8法检测细胞活力结果,选择5 mmol/L为二甲双胍最佳作用浓度,抑制剂组、激活剂组造模后给予5 mmol/L二甲双胍,并分别加入5µmol/L的BAY 11-7082和1µmol/L的NF-κB信号通路激活剂Prostratin。各组均干预24 h。倒置显微镜下观察细胞形态;采用ELISA法检测细胞培养液上清中的丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD);采用细胞划痕试验测算细胞迁移率;采用Western blotting法检测细胞中的EMT相关蛋白及NF-κB信号通路相关蛋白。结果模型组细胞较对照组生长受到抑制、细胞形态不规则、细胞碎片增多,MDA、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维黏连蛋白及p-NF-κB p65蛋白水平升高,SOD、E-钙黏蛋白水平降低(P均<0.05);二甲双胍组和BAY 11-7082组细胞生长抑制作用较模型组减弱、细胞形态正常、细胞碎片少,MDA、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维黏连蛋白及p-NF-κB p65蛋白水平降低,SOD、E-钙黏蛋白水平升高,且抑制剂组较二甲双胍组上述指标变化更显著(P均<0.05);激活剂组上述指标变化趋势与二甲双胍组相反(P均<0.05)。结论二甲双胍对H2O2诱导的A549氧化损伤具有抑制作用,可能与其阻滞NF-κB信号通路、抑制细胞迁移和EMT有关。

下调lncRNA NEAT1通过NF-κB信号传导途径抑制TNF-α诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症因子释放

目的:探究下调lncRNA NEAT1对TNF-α诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症因子释放的影响。方法:将肺泡上皮细胞A549分成Control组、TNF-α组(TNF-α处理)、sh-NC组(转染shRNA control,TNF-α处理)、sh-NEAT1组(转染NEAT1 shRNA,TNF-α处理)、sh-NEAT1+PMA组(转染NEAT1 shRNA,TNF-α和NF-κB信号激活剂PMA处理)。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,硫代巴比妥酸法检测细胞中MDA含量,黄嘌呤氧化法检测细胞中SOD活性,CellROX Green法检测细胞中ROS水平,ELISA检测IL-6、IL-8、IL-1β水平,Western blot检测Cleaved caspase-3、p65蛋白表达。结果:与Control组相比,TNF-α组肺泡上皮细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,MDA含量、ROS水平升高,SOD活性降低,细胞分泌IL-6、IL-8、IL-1β增多,细胞中p65蛋白表达水平升高。与sh-NC组相比,sh-NEAT1组肺泡上皮细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,MDA含量、ROS水平降低,SOD活性升高,细胞分泌的IL-6、IL-8、IL-1β减少,细胞中p65蛋白表达水平降低。与sh-NEAT1组相比,sh-NEAT1+PMA组肺泡上皮细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved caspase-3、p65蛋白表达增多,MDA含量和ROS水平升高,SOD活性降低,细胞分泌的IL-6、IL-8、IL-1β增多。结论:下调NEAT1通过降低NF-κB信号通路激活水平抑制TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤和炎症因子释放。

鹰嘴豆芽素A对LPS诱导的肺泡上皮细胞氧化应激损伤的影响

目的 探讨鹰嘴豆芽素A(BCA)调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞氧化应激损伤的影响。方法 将肺泡上皮细胞BEAS-2B分为ctrl组(正常培养的BEAS-2B细胞)、LPS组(10μg/mL浓度的LPS)、BCA低剂量组(5μmol/L BCA)、BCA中剂量组(10μmol/L BCA)、BCA高剂量组(20μmol/L BCA)、抑制剂组(20μmol/L BCA+5μmol/L Nrf2抑制剂ML385),除ctrl组外,其余组均给予10μg/mL LPS刺激24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,分光光度法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平,试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平,免疫印迹法(Western blotting)检测细胞Nrf2、HO-1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)/半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达。结果 与ctrl组比较,LPS组BEAS-2B细胞的吸光度(A_(450))、SOD活性、Nrf2、HO-1、PCNA表达明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、ROS和MDA水平、TNF-α、IL-6、Bax、cleaved caspase-3/caspase-3表达明显上升(P<0.05);与LPS组比较,BCA低、中、高剂量组BEAS-2B细胞的A_(450)、SOD活性、Nrf2、HO-1、PCNA表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、ROS和MDA水平、TNF-α、IL-6、Bax、cleaved caspase-3/caspase-3表达明显降低(P<0.05);BCA高剂量处理细胞并加入Nrf2抑制剂ML385后,BCA对BEAS-2B细胞增殖的促进作用减弱,细胞凋亡率、炎症反应和氧化应激损伤增强。结论 BCA可通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞氧化应激损伤。

LncRNA MINCR靶向miR⁃223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系;Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、cleaved caspase-3蛋白表达均显著增加(P<0.05),miR-223、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与Si NC组相比,Si MINCR组细胞凋亡率、TNF-α和IL-6水平、MINCR和cleaved caspase-3蛋白表达均显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05);与miR-223 NC相比,miR-223 mimic组细胞凋亡率、TNF-α和IL-6水平、cleaved caspase-3蛋白表达均显著降低(P<0.05),miR-223、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05)。miR-223 antagomir可逆转Si MINCR发挥的作用(P<0.05)。结论沉默lncRNA MINCR的表达可能通过靶向激活miR-223表达,抑制A549细胞凋亡以及炎性反应,减少LPS诱导的A549细胞损伤。

甲状腺激素T3抑制内质网应激保护大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞和减轻大鼠低氧性肺损伤

目的:探讨甲状腺激素能否减轻高原低氧环境中大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞与肺组织损伤,并探寻其作用机制。方法:将20只SPF级别、8周周龄的雄性SD大鼠分为正常对照组与高原模型组,每组10只。高原模型大鼠置于模拟海拔6 000 m低氧环境的模拟舱内构建高原低氧模型,正常对照组大鼠生活海拔与当地一致。造模结束后在正常海拔下收集两组动物血清与肺组织。电镜和TUNEL染色法观察大鼠肺组织细胞凋亡情况,使用RT-qPCR与Western blot检测大鼠肺组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和转录激活因子6(ATF6)mRNA与蛋白表达。甲状腺滤泡上皮细胞分为常氧组与低氧组。常氧组正常条件培养,低氧组缺氧培养24 h,用CCK-8试剂盒检测细胞增殖率,用ELISA法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、甲状腺激素T3和T4含量。大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞分为常氧组、常氧+甲状腺激素(T3)组、低氧组和低氧+T3组,按组别加入T3后进行缺氧处理,CCK-8法检测细胞增殖率,细胞染色观察活死细胞比例,ELISA检测细胞LDH含量,TUNEL染色观察细胞凋亡,RT-qPCR与Western blot法检测Ⅱ型肺泡上皮细胞中GRP78、IRE1α、PERK和ATF6的mRNA与蛋白表达,免疫荧光法对细胞GRP78、ATF6和Bax进行共定位检测。结果:高原组大鼠肺组织凋亡细胞增加,GRP78、IRE1α、PERK和ATF6的mRNA与蛋白表达水平显著升高(P<0.01);甲状腺细胞缺氧培养后细胞增殖率与T3、T4含量降低,LDH含量显著升高(P<0.01);与低氧组相比,低氧+T3组Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖率显著升高,凋亡率与LDH含量显著降低,GRP78、IRE1α、PERK和ATF6的mRNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:外源性甲状腺激素可以减轻大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞低氧性损伤,其机制可能与抑制肺泡上皮细胞中内质网应激通路相关基因表达有关。

Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p调控上皮钠离子通道减轻高氧性急性肺损伤

目的探讨Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC-Ⅱ)来源外泌体(exosomes,Exos)-miR-21-5p(miR-21)调控上皮钠离子通道(epithelial sodium channel,ENaC)对高氧性急性肺损伤(hyperoxia-induced acute lung injury,HALI)的保护效应及可能机制。方法6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠60只,其中20只使用差速贴壁离心法提取原代AEC-Ⅱ并培养,采用密度梯度离心法提取AEC-Ⅱ来源外泌体,透射电镜鉴定外泌体形态。余40只小鼠按随机数字表法分为(n=10):常氧(Control)组、高氧(HALI)组、高氧+Exos-miR-21(HALI+miR-21)组和高氧+siPI3K+Exos-miR-21(HALI+siPI3K+miR-21)组。除Control组外,余3组小鼠暴露于95%O 2的自制高氧饲养箱中构建HALI模型。72 h后RT-qPCR检测肺组织及外泌体miR-21表达;HE染色观察肺组织形态学变化并行肺损伤病理评分,计算肺组织湿/干质量比及肺泡液体清除率(alveolar fluid clearance,AFC);可见分光光度法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)水平;荧光分光光度法测定活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot检测PTEN、AKT、p-AKT、PI3K及α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与PTEN靶向关系。结果原代AEC-Ⅱ提取的囊泡状物质经鉴定为外泌体,外泌体中miR-21表达显著增高(P<0.05),PTEN为miR-21靶基因。与Control组比较,HALI组HE染色可见肺组织肺间隔增厚、大量炎症细胞浸润及肺泡萎陷,HALI组、HALI+miR-21组及HALI+siPI3K+miR-21组肺损伤病理评分、肺湿/干质量比、MDA及PTEN蛋白表达升高(P<0.05);SOD、T-AOC、AFC、miR-21及p-Akt、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC蛋白表达水平降低(P<0.05),以HALI+siPI3K+miR-21组最明显。与HALI组比较,HALI+miR-21组HE染色可见肺间隔增厚、炎症细胞浸润明显减少,肺泡萎陷显著减轻;肺损伤病理评分、肺湿/干质量比、MDA及PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05);而SOD、T-AOC、AFC、miR-21及p-Akt、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路调控上皮钠离子通道减轻高氧性急性肺损伤。

肾小管上皮细胞损伤后的适应性修复异常及其机制的研究进展

肾小管上皮细胞是肾单位重要的组成结构之一,对维持肾脏正常生理功能具有重要作用。近年研究提示,近端小管严重损伤或多次损伤将导致不可逆的结构破坏和功能丢失,引起间质小管炎症和纤维化、肾小球硬化,以及毛细血管稀疏等慢性化表现。当肾小管上皮细胞损伤后,会发生适应性修复异常,具体机制包括细胞衰老、代谢紊乱和部分上皮细胞-间充质转化等,这将导致肾脏纤维化的发生发展。在大多数存活的患者中,尤其是在轻度损伤的情况下,可以观察到肾小管的再生和成功的肾修复。在适应性修复中,存活的肾小管上皮细胞经历去分化和增殖,以恢复功能。然而在严重、重复性损伤或肾脏老化的情况下,肾小管上皮细胞可能会出现适应性修复异常的情况,这会导致进行性肾脏纤维化。本文就近年来肾小管上皮细胞损伤后的适应性修复异常及其机制的研究进展做如下综述。

人胎盘间充质干细胞降低肺泡上皮屏障通透性缓解小鼠急性肺损伤

目的探讨人胎盘间充质干细胞(hPMSCs)对急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡上皮屏障通透性的影响。方法将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分成对照组、ALI组、hPMSCs组,每组8只,气管滴注脂多糖(LPS)制备ALI模型,12 h后,hPMSCs组尾静脉注射hPMSCs,对照组尾静脉注射等量DMEM,24 h后处死小鼠,收集肺组织。苏木-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺组织病理改变并评分,检测肺组织湿干重比(W/D),计算肺泡灌洗液(BALF)与血清中伊文思蓝的比值检测肺泡上皮屏障通透性,免疫组化、Western blot检测肺组织紧密连接蛋白occludin的表达。结果hPMSCs成脂及成软骨诱导分化培养后染色均呈阳性,其表面特异性抗原CD73高表达,未检测到造血标记物CD34的表达。与对照组相比,ALI组肺组织病理损伤严重,肺损伤评分、W/D值、肺泡上皮屏障通透性均增加(P均<0.01),免疫组化和Western blot显示occludin蛋白表达降低(P<0.001)。与ALI组相比,hPMSCs组肺组织病理损伤减轻,肺损伤评分、W/D值、肺泡上皮屏障通透性均降低(P均<0.05);免疫组化和Western blot结果显示occludin蛋白表达升高(P<0.01)。结论hPMSCs可能通过降低肺泡上皮屏障通透性减轻小鼠ALI。

T细胞在肺上皮细胞损伤与修复中的作用和机制

肺上皮细胞在呼吸系统中起着重要的保护作用。然而,各种病理因素如感染、创伤和炎症等可以导致肺上皮细胞的损伤,进而引发呼吸系统疾病。在肺上皮细胞损伤和修复过程中,T细胞扮演着关键角色,并通过接触或者释放多种免疫介质来参与这一过程。不同亚群的T细胞分别承担着增强抗炎反应、清除感染的致炎作用以及促进血管新生和上皮细胞增殖的修复作用。本综述旨在总结T细胞在肺上皮细胞损伤和修复中的作用,并阐述其参与肺疾病发病和缓解的可能机制。

利多卡因对LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用

目的:观察利多卡因(lidocaine,L ido)抗LPS所致的大鼠肺泡Ⅱ型上皮(AT-Ⅱ)细胞凋亡作用。方法:体外培养的大鼠AT-Ⅱ细胞暴露到LPS和L ido中2 4 h后,采用流式细胞仪(FCM)及电镜检测AT-Ⅱ细胞凋亡和坏死率;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH活性。结果:LPS可直接导致AT-Ⅱ细胞损伤,表现为AT-Ⅱ细胞坏死和凋亡发生率增高,LDH释放量增多。L ido能降低AT-Ⅱ细胞凋亡率。结论:L ido对LPS所致的AT-Ⅱ细胞凋亡和坏死有直接的抑制作用。