沙尘暴PM_(2.5)、PM_(10)对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

目的 探讨了沙尘暴PM2 5、PM10 对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响。方法 沙尘暴颗粒物采集自北京市城区 ,细胞毒性测定用MTT法 ,巨噬细胞吞噬功能采用流式细胞法 ,以荧光标记的胶珠 (Latexbeads ,D =2 4 μm)来测定。 结果 MTT结果显示 ,随着染毒浓度的增加 ,巨噬细胞存活率逐渐减低 ,高剂量组约为对照的 85 %左右。流式细胞仪分析表明 ,各颗粒物染毒组细胞的平均荧光强度逐渐减弱 ,提示巨噬细胞摄入沙尘暴颗粒物后 ,其吞噬荧光胶珠的能力明显减低 ;另外各染毒组的平均侧向光散射强度 ,即摄入的总颗粒数 (沙尘暴颗粒 +荧光胶珠 )低于对照 ,提示巨噬细胞的吞噬功能受到了损伤。沙尘暴PM2 5的细胞毒性比相同浓度的PM10 大 ,对吞噬功能的损伤也更明显。结论 沙尘暴PM2 5、PM10 均能损伤大鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能 ,削弱其非特异性防御能力。

慢性阻塞性肺疾病肺泡巨噬细胞吞噬功能低下机制的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是目前世界范围内老年人中致死性疾病上升速度最快的疾病之一,造成了严重的经济和社会负担。COPD急性加重(AECOPD)是COPD患者病程中造成病情进展、肺功能恶化的非常重要的过程,是造成COPD患者住院率和死亡率增加的最主要原因。众所周知,多种炎性细胞和肺部的结构细胞参与了COPD的发病,其中肺泡巨噬细胞(AM)因直接暴露于环境中的香烟烟雾。

高糖及高胰岛素对肺泡巨噬细胞吞噬功能和超微结构的影响

目的和方法：选用正常大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ），在高糖及高糖＋高胰岛素环境下培养，用卡介苗（ＢＣＧ）、干扰素ａ－２ｂ（ＩＦＮα－２ｂ）或两者联合活化，检测其贴壁率、四唑氮兰（ＮＢＴ）还原功能、ＮＯ和ＴＮＦ－α释放量并观察其超微结构改变。结果：高糖及高糖＋高胰岛素环境下活化ＡＭ贴壁延迟（Ｐ＜０．０１），ＮＢＴ还原功能明显被抑制（Ｐ＜０．０１）；ＢＣＧ和ＩＦＮα－２ｂ＋ＢＣＧ活化ＡＭ时，其ＮＯ和ＴＮＦα释放量均明显低于对照组（Ｐ＜０．０１）；ＩＦＮα－２ｂ活化ＡＭ时，其ＮＯ和ＴＮＦ－α释放量与对照组无明显差别（Ｐ＞０．０５）；细胞表面伪足减少、变短，胞质内高尔基氏体、粗面内质网减少。结论：在短期内高糖及高糖＋高胰岛素环境均抑制ＡＭ吞噬功能及改变超微结构，从而使糖尿病个体易发生肺部感染。

流式细胞术检测大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能方法探讨

目的:比较不同实验条件对检测肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响,为流式细胞术检测肺泡巨噬细胞吞噬功能筛选快速、灵敏、稳定的实验方法。方法:支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,将肺泡巨噬细胞分别与转红色荧光蛋白基因质粒细菌〔E.coliDH5α(pJZ402rfp)〕及未转质粒细菌(E.coliDH5α)孵育,并选择〔E.coliDH5α(pJZ402rfp)〕与肺泡巨噬细胞按不同的细菌与细胞比例(50:1、100:1、200:1)、孵育时间(30min、60min、120min、180min)及培养溶液(PBS、Hanks、无血清1640)进行孵育,流式细胞仪检测肺泡巨噬细胞的吞噬功能。结果:E.coliDH5α(pJZ402rfp)具有稳定的红色荧光,用E.coliDH5α(pJZ402rfp)检测肺泡巨噬细胞的吞噬功能比用E.coliDH5α获得更多的参数。肺泡巨噬细胞的吞噬率随着细菌与细胞比例的增大而增加,而吞噬指数在细菌与细胞比例为100:1时为最高(P<0.05);肺泡巨噬细胞的吞噬率从30分钟到120分钟变化不大,但到180分钟吞噬率有明星的降低(P<0.05),吞噬指数则在60分钟时最高,有显著差异(P<0.05);Hanks液组肺泡巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数显著高于PBS组及1640组(P<0.05)。结论:在室温(260C)以肺泡巨噬细胞与E.coliDH5α(pJZ402rfp)比为1:100的Hanks液中孵育1小时,是流式细胞术检测肺泡巨噬细胞吞噬功能的快速、灵敏、稳定的实验方法。

高迁移率族蛋白1在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用。方法脂多糖（LPS）注射复制大鼠急性肺损伤模型，在LPS致伤后不同时相点（有或无正丁酸钠SB干预时）获取肺组织及肺泡巨噬细胞（AM）。RT—PCR检测肺组织HMGB1 mRNA表达，应用鸡红细胞吞噬实验检测AM的吞噬功能，并对二者做平行比较。结果与对照组比较，LPS致伤后6、12、24h时相点AM吞噬率及吞噬指数明显降低；SB干预组AM吞噬功能于24h时相点出现较明显下降。与LPS组比较，6～12h时相点AM吞噬功能无明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；LPS致伤后6～24h肺组织HMGB1 mRNA表达明显增高。正丁酸钠（SB）处理组动物肺组织于伤后6～12h肺组织HMGB1 mRNA表达均显著抑制，与LPS组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；相关性分析显示，肺泡巨噬细胞吞噬率及吞噬指数与肺组织HMGB1表达水平呈显著负相关。结论HMGB1高表达可能参与AM吞噬功能改变；AM吞噬功能减低可能是HMGB1参与急性肺损伤发生、发展的机制之一。

矽肺大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能检测方法研究

目的研究适用于矽肺模型大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的检测方法。方法气管注入法制备矽肺模型,分别两次通过气道、腹腔给予矽肺大鼠模型及正常对照动物卡介苗(BCG)。第2次免疫后35天气道注入鸡红细胞,评价肺泡巨噬细胞的吞噬功能。结果矽肺动物肺泡巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率、吞噬指数都显著低于正常对照大鼠。结论本实验室应用的大鼠半体内肺泡巨噬细胞吞噬功能测定方法,简单适用,能反映动物肺泡巨噬细胞吞噬功能;矽肺动物肺泡巨噬细胞吞噬功能显著下降。

脾切除以后对肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

本研究以日本大耳白兔为研究对象,采用^(51)Cr标记的方法观察脾切后对肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响,同时还利用扫描电镜观察了其表面结构的变化。结果表明,吞噬指数显著降低(P<0.01),表面伪足变短迟钝,甚至光秃。并讨论了该方法所具有的先进性,客观性特点。

地塞米松对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

目的:通过研究地塞米松对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响,探讨地塞米松治疗急性肺损伤的作用机理。方法:健康雄性Wistar大鼠放血处死后全肺灌洗获取肺泡巨噬细胞(PAMs),贴壁纯化,在预培养20 h后重悬PAMs,分3组分别处理4 h。正常对照(C)组:不做任何干预;脂多糖(LPS)组:按10μg/mL的剂量加入LPS刺激;脂多糖加地塞米松(LPS+Dex)组:将含Dex终浓度1×10 mmol/L^1×6 mmol/L的RPMI 1640培养基加入LPS。收集PAMs,与1%鸡红细胞悬液培育后制片,瑞氏染色观察并计算吞噬率和吞噬指数,对两者做相关回归分析并采用单因素方差分析比较组间差异。结果:各组AM的吞噬率和吞噬指数呈线性相关性关系,从高到低依次为:C组(12.50±2.07)%,2.29±0.08;LPS+Dex组(8.25±1.67)%,1.73±0.18;LPS组(3.50±1.20)%,1.16±0.19;各组间的差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:LPS可抑制体外培养PAMs的吞噬活性;Dex对LPS抑制的PAMs吞噬活性有一定的活化作用。

不同药物雾化吸入对重型颅脑损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

目的研究不同药物雾化吸入对重型颅脑损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响。方法采用大鼠颅脑局部气压冲击伤模型,将58只雄性SD大鼠随机分为正常组、生理盐水组、庆大霉素组及γ-干扰素组。正常组4只动物不作任何处理,其余3组每组18只动物,均于致伤后第1天开始分别给予生理盐水、生理盐水+庆大霉素、生理盐水+γ-干扰素雾化吸入,2次/d,观察1、3、7 d处死动物,用支气管肺泡灌洗获取标本,用白色念珠菌法观察肺泡巨噬细胞的吞噬率。结果γ-干扰素组3 d和7 d肺泡巨噬细胞的吞噬率(0.742±0.073、0.778±0.033)高于生理盐水组(0.312±0.040、0.560±0.075)和庆大霉素组(0.388±0.074、0.415±0.089),P<0.001。结论γ-干扰素雾化吸入可提高重型颅脑损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬率,庆大霉素吸入7 d时可使肺泡巨噬细胞吞噬率下降。

烟雾吸入性损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能与炎症消散关系研究

目的 :探讨烟雾吸入性损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能与炎症消散关系。方法 :建立大鼠烟雾吸入损伤模型后于伤后 2、6、12、2 4h及 2、3、4、5d各时相点动态观察 (1)肺泡巨噬细胞体外对鸡红细胞吞噬功能 ;(2 )肺泡巨噬细胞体内对凋亡中性粒细胞吞噬功能。结果 :(1)致伤后 2～ 6h肺泡巨噬细胞对鸡红细胞吞噬率、吞噬指数下降 ,12h后逐渐恢复正常 ,2～ 5d仍保持较高的吞噬功能。 (2 )肺泡巨噬细胞对凋亡中性粒细胞吞噬在伤后 2h即开始逐渐升高 ,2 4h达峰值 ,然后逐渐下降。结论 :(1)烟雾吸入伤早期 (2～ 6h)肺泡巨噬细胞吞噬功能受损害 ,然后逐渐恢复正常 ,并保持较高吞噬活性 ,它有利于清除异物、细菌等。 (2 )肺内中性粒细胞发生凋亡 。

云锡等生产性粉尘对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

用巨噬细胞吞噬酵母菌的方法检测吞噬粉尘后大鼠肺泡巨噬细胞功能。发现:云锡氧化矿尘、云锡硫化矿尘、香花岭矿尘、二氧化硅尘、宣威煤烟尘等五种粉尘不同程度地抑制巨噬细胞的吞噬功能。SiO2在染尘后第二周即有改变。其它生产性粉尘均在染尘后3～6周致肺泡巨噬细胞吞噬功能下降,并在第6周仍维持较低水平。结果表明:云锡等生产性粉尘对大鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能有抑制作用,从而使体内非特异免疫受到影响,破坏免疫监视系统,这可能是促使肺癌发生和发展的一个有利因素之一。

急性肺损伤小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能降低

目的探讨急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的变化及其影响因素。方法昆明种小鼠随机分为正常对照组、ALI模型组,脂多糖经气道滴入激发构建ALI模型小鼠;通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AM),流式细胞术及荧光显微镜观察ALI小鼠AM吞噬功能的变化;免疫印迹与ELISA检测ALI小鼠肺组织白介素-33(IL-33)的表达和分泌情况;ELISA检测不同浓度脂多糖刺激肺泡上皮细胞株MLE-12细胞IL-33分泌的情况;采用不同浓度的脂多糖和IL-33作用正常组AM,观察这些刺激因素对AM吞噬荧光微球的影响。结果与正常小鼠AM(75.1%±3.0)%相比,ALI小鼠AM吞噬荧光微球百分率(57.0±4.3)%明显降低,但ALI小鼠肺组织IL-33的表达和支气管肺泡灌洗液中IL-33的分泌均明显升高(P<0.05);脂多糖(100~1000 ng/mL)促进肺泡上皮细胞IL-33分泌增加(P<0.01);脂多糖(10~500 ng/mL)和IL-33(100 ng/mL)均明显抑制了AM的吞噬功能(P<0.05)。结论 ALI小鼠AM吞噬功能降低,这可能是由于脂多糖直接刺激AM引起,或者脂多糖激发肺泡上皮细胞产生的预警素IL-33也可抑制AM吞噬功能。

糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及释放肿瘤坏死因子α变化的研究

目的:研究肺泡巨噬细胞变化在糖尿病机体肺组织局部防御功能减弱的机制中的作用。方法:链脲佐菌素一次性腹腔注射复制大鼠糖尿病(DM)模型,通过支气管肺泡灌洗(BAL)获取肺泡巨噬细胞(AM),HE染色测定对鸡红细胞吞噬率及AM体外培养ELISA法测定上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果:糖尿病4周及8周组大鼠肺泡巨噬细胞对鸡红细胞吞噬率均明显下降,差别有统计学意义(P<0.01),肺泡巨噬细胞体外培养上清糖尿病4周组与对照组比较有下降趋势,但差别不具有统计学意义,糖尿病8周组下降明显(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞在非特异性及特异性免疫反应降低,随病程延长改变明显。

云锡等生产性粉尘对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

用巨噬细胞吞噬酵母菌的方法检测吞噬粉尘后大鼠肺泡巨噬细胞功能。发现:云锡氧化矿尘、云锡硫化矿尘、香花岭矿尘、二氧化硅尘、宣威煤烟尘等五种粉尘不同程度地抑制巨噬细胞的吞噬功能。SiO_2在染尘后第二周即有改变。其它生产性粉尘均在染尘后3～6周致肺泡巨噬细胞吞噬功能下降,并在第6周仍维持较低水平。结果表明:云锡等生产性粉尘对大鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能有抑制作用,从而使体内非特异免疫受到影响,破坏免疫监视系统,这可能是促使肺癌发生和发展的一个有利因素之一。

30%TBSAⅢ度烧伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的动态变化

目的探讨严重烧伤后肺泡巨噬细胞吞噬功能的动态变化。方法建立30%TABSⅢ度烧伤大鼠模型后于伤后1、3、6、12、24h,通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,体外测定肺泡巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力。结果烧伤早期(1～3h)肺泡巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能明显增强,而6h后吞噬功能明显受抑制,24h降至最低(P<0.01)。结论烧伤后肺泡巨噬细胞早期激活然后抑制,可能与全身炎症反应综合征、多脏器功能损害发生有密切关系。

基于PPARγ信号通路研究香烟烟雾提取物干预不同时间下对肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能影响的分子机制

目的:观察香烟烟雾提取物(CSE)干预不同时间下肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能的变化,探讨其对肺部疾病炎症反应的影响及分子机制。方法:大鼠肺泡巨噬细胞NR8383采用10%CSE分别干预6 h、12 h、24 h、48 h,分为6 h空白对照组、6 h-10%CSE组、12 h空白对照组、12 h-10%CSE组、24 h空白对照组、24 h-10%CSE组、48 h空白对照组、48 h-10%CSE组。10%CSE干预12 h后联用PPAR抑制剂/激动剂,分为PPAR抑制剂组、PPAR激动剂组。Alamar Blue法检测PPAR激动剂对NR8383细胞增殖及毒性作用;流式细胞术检测NR8383细胞胞葬、吞噬功能及M1、M2极化分型;酶联免疫吸附实验检测TNF-α、TGF-β1、MFG-E8含量;免疫印迹法检测PPARγ信号通路及下游分子CD36蛋白表达;qPCR检测PPARγ、CD36 mRNA的表达。结果:10%CSE干预6 h后,NR8383细胞吞噬及胞葬功能均有所升高,PPARγ表达下调,CD36 mRNA表达增加,TNF-α、TGF-β1、MFG-E8表达均升高,但无明显极化方向;干预12 h,NR8383细胞吞噬功能及胞葬率显著降低,PPARγ、CD36表达显著下调,TNF-α表达增强,TGF-β1、MFG-E8表达降低,向M1型巨噬细胞极化;干预24 h后,NR8383细胞胞葬率降低,但吞噬大肠杆菌的功能增强,PPARγ表达下调,CD36蛋白表达降低,TNF-α表达降低但差异无统计学意义,TGF-β1、MFG-E8表达仍处于降低状态,有明显的M1型极化倾向;48 h后NR8383细胞胞葬率仍旧降低,但吞噬能力显著提升,PPARγ表达显著降低,CD36表达显著增加,TNF-α表达降低,TGF-β1、MFG-E8表达增加,巨噬细胞向M1、M2方向极化均增加。选择10%CSE干预12 h联合PPAR激动剂、抑制剂后发现,PPAR激动剂增强NR8383细胞胞葬及吞噬能力,上调PPARγ、CD36表达,抑制炎症因子TNF-α表达,促进抑炎因子TGF-β1、胞葬辅助因子MFG-E8表达。结论:随着CSE干预时间的变化,肺泡巨噬细胞从早期炎症反应的活化状态,逐渐进展为慢性炎症反应状态,进而导致肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能障碍,该机制与PPARγ通路被抑制有关。

IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL~500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。

基于PPARγ/LXR-α信号通路探讨槲皮素对急性肺损伤肺泡巨噬细胞胞葬功能影响机制

目的 观察槲皮素对急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞胞葬功能的影响,并基于过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)/肝X受体α(LXR-α)信号通路研究其作用机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只。槲皮素低、中、高剂量组分别于造模前给予10 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg的槲皮素灌胃,地塞米松组给予5 mg/kg的地塞米松灌胃,正常组和脂多糖组给予等量生理盐水灌胃,均1次/d。连续灌胃14 d后,除正常组外,其余组均采用鼻滴法给予脂多糖建立急性肺损伤模型。于造模后24 h,检测各组大鼠肺泡巨噬细胞胞葬功能,原位末端转移酶标记法(TUNEL)测定肺组织细胞凋亡率,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平,HE染色观察肺组织病理形态,免疫组化法检测肺组织中PPARγ、LXR-α、CD68蛋白阳性表达情况,RT-PCR法检测肺组织中PPARγ、LXR-α、CD68 mRNA表达情况。结果 与正常组比较,脂多糖组大鼠肺泡巨噬细胞胞葬功能明显减弱(P<0.05),肺组织细胞凋亡率和血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均明显增高(P均<0.05),血清IL-10水平明显降低(P<0.05),肺细胞肿胀、变性及大量炎性细胞浸润,肺组织中PPARγ、LXR-α、CD68蛋白阳性表达平均光密度值及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05);与脂多糖组比较,槲皮素各组及地塞米松组大鼠肺泡巨噬细胞胞葬功能均明显增强(P均<0.05),槲皮素中、高剂量组及地塞米松组肺组织细胞凋亡率和血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均明显降低(P均<0.05),槲皮素各剂量组血清IL-10水平均明显升高(P均<0.05),槲皮素高剂量组肺组织病理损伤明显改善,槲皮素中、高剂量组PPARγ、LXR-α、CD68阳性表达平均光密度值和PPARγ、LXR-α、CD68 mRNA相对表达量均明显高于脂多糖组(P均<0.05),地塞米松组PPARγ和CD68阳性表达平均光密度值、PPARγ和LXR-α mRNA相对表达量均明显高于脂多糖组(P均<0.05)。结论 槲皮素可增强脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞胞葬功能,减轻肺组织病理损伤,其机制可能与激活PPARγ/LXR-α信号通路有关。