流感病毒感染小鼠体内肺泡巨噬细胞极化模式的研究

目的:研究流感病毒感染小鼠体内肺泡巨噬细胞在不同时期的极化状态。方法:建立小鼠流感病毒感染模型;20G静脉留置针对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术;贴壁培养分离巨噬细胞并提取其RNA,荧光定量PCR测定其表达水平;取肺泡灌洗液,用ELISA试剂盒检测细胞因子(白细胞介素(IL)-12)。结果:感染组体质量呈下降趋势,之后处于恢复期上升,对照组体质量平缓上升;感染组表达流感病毒PR8 M1基因,第5天显著升高(P<0.000 1),第14天没有检测出M1基因;感染组IL-1β和一氧化氮合酶2(NOS2)表达水平呈先上升后下降趋势,其第5天表达水平明显高于对照组(P<0.000 1);感染组IL-10表达水平在第5天高于第1天,且高于对照组(P<0.05);感染组精氨酸酶表达水平呈先上升后下降趋势,在第1天无检出并低于对照组,第5天达最高值(P<0.000 1);感染组第1天TGFβ表达水平与对照组比低于正常水平(P<0.05);感染组肺泡灌洗液中IL-12浓度在第5天最高(P<0.000 1)。结论:流感病毒感染会致肺泡巨噬细胞极化,在早期肺泡巨噬细胞极化为M1型,随着时间推移,巨噬细胞极化亚型表现为M2型。

维生素A缺乏调节肺泡巨噬细胞M1极化在新生大鼠ARDS中的作用及其机制

目的 探讨维生素A缺乏(VAD)调节肺泡巨噬细胞极化在新生大鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)中的作用及其机制。方法 将60只新生SD大鼠分为维生素A正常对照组(VAN ctrl组,n=10)、维生素A正常组(VAN组,n=10)、维生素A缺乏对照组(VAD ctrl组,n=10)、维生素A缺乏组(VAD组,n=10)、维生素A挽救对照组(VADR ctrl组,n=10)及维生素A挽救组(VADR组,n=10),其中,VADR ctrl及VADR组SD大鼠于生后第2天一次性给予腹腔注射25μg VA。6组新生大鼠分别予以脂多糖(LPS)建立ARDS新生大鼠模型并收集血清及肺组织标本。记录建模前各组新生大鼠的体重,采用May-Grunwald-Giemsa染色法检测肺泡灌洗液(BALF)中主要细胞数量,HE染色观察肺组织病理损伤情况,免疫荧光染色评估肺泡巨噬细胞极化情况,qRT-PCR、ELISA检测肺泡巨噬细胞极化下游标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、精氨酸酶1(Arg-1)等炎性因子的表达情况,比色法检测肺组织氧化应激标志物超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,TUNEL检测细胞凋亡情况。结果 与VAN组新生大鼠比较,VAD组新生大鼠体重较轻、体格偏小、毛发稀疏,而VADR组新生大鼠体重、一般情况无明显变化;与VAD组比较,VADR组新生大鼠体重增加,毛发光亮。与VAN组比较,VAD组ARDS新生大鼠肺部损伤加重,BALF中主要细胞数量增加、肺泡巨噬细胞M1极化激活(P<0.05),M1极化标志物i NOS、IL-6、TNF-α、CD86表达水平明显升高(P<0.05),氧化应激标志物MDA含量增多(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),而IL-10、Arg-1水平差异无统计学意义(P>0.05);与VAN组相比,VADR组新生大鼠巨噬细胞M1极化及TNF-α、IL-6、SOD、MDA、IL-10、Arg-1水平等差异均无统计学意义(P>0.05);与VAD组比较,VADR组ARDS新生大鼠肺部损伤明显减轻,肺泡巨噬细胞数量及肺泡巨噬细胞M1极化减少(P<0.05),且M1极化标志物iNOS、IL-6、TNF-α、CD86表达水平降低(P<0.05),氧化应激标志物MDA含量及细胞凋亡减少(P<0.05),SOD活性增加(P<0.05)。结论 VAD可通过调节肺泡巨噬细胞M1极化,上调M1极化下游炎症标志物表达,增加肺部氧化应激及细胞凋亡,从而加重新生大鼠ARDS的肺部损伤。