大鼠骨髓来源MSCs对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的研究静脉注射大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对高氧新生大鼠肺损伤的影响。方法采用贴壁选择法分离、培养、扩增大鼠骨髓来源MSCs,并以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)进行标记。3d龄清洁级SD新生大鼠32只,随机分为A、B、C、D四组,每组8只。A、B两组均先将动物置于95%氧环境下,而C、D组则置于空气环境下;7d后,A、C组每只尾静脉注射含5×104MSCs的PBS50μl,B、D组同时仅给予PBS50μl,并将大鼠全部置于空气环境下,72h后处死全部动物,病理学检测肺组织辐射状肺泡计数(RAC),免疫组织化学检测BrdU表达情况,ELASA法检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α(TNFα)、转化生长因子β1(TGFβ1)含量。结果与空气暴露(C、D)组相比,两高氧(A、B)组RAC值显著降低,TNFα、TGFβ1等显著增加;比较A、B二组,A组在RAC、TNFα、TGFβ1等方面与B组存在显著差异;免疫组化显示A、C两组均可见BrdU阳性细胞表达,且两组间差异有显著性。结论给新生大鼠静脉注射MSCs后,MSCs可在肺组织定植,其定植水平与动物暴露的环境有关,并对高氧引致的肺损伤具有保护作用,其机制可能与调控肺部微环境等有关。

高氧暴露下新生大鼠肺组织SP-A表达的动态变化研究

目的:通过观察高氧暴露下新生大鼠RAC值及肺内SP-A表达的动态变化,探讨高氧对肺发育的影响及其机制。方法:将生后2天的W istar大鼠随机分为两组。Ⅰ组:空气组;Ⅱ组:高氧组。高氧组大鼠持续暴露于85%O2中,正常组大鼠呼吸空气。于高氧暴露后4天、7天、14天取肺组织作HE染色行辐射状肺泡计数,采用免疫组化方法观察肺组织中SP-A表达强度。结果:高氧暴露4天时RAC值与空气组相比,差异无显著性意义,P>0.05;高氧暴露7天时RAC值较空气组明显减少,差异有显著性意义,P<0.05;14天时,差异更明显,P<0.01。高氧暴露4d时SP-A表达强度较空气组增强,P<0.05;高氧暴露7天时SP-A表达强度与空气组相比较,差异无显著性意义,P>0.05;高氧暴露14天时SP-A表达强度较空气组减弱,差异有显著性意义,P<0.05。阳性表达明显改变的主要分布于Ⅱ型肺泡上皮细胞,呈棕黄色颗粒。细支气管上皮细胞内也有阳性表达。结论:长时间暴露于高氧环境,使Ⅱ型肺泡上皮细胞受损,SP-A分泌随之减少,导致PS功能丧失,阻碍肺发育,促进BPD发生。

沙参麦冬汤对新生大鼠支气管肺发育不良的保护作用及其机制

目的:观察沙参麦冬汤作用下慢性支气管肺发育不良(BPD)新生大鼠肺的发育情况,阐明沙参麦冬汤对高体积分数氧(高氧)所致新生大鼠慢性BPD的影响及其作用机制。方法:200只新生大鼠分为对照组,模型组,地塞米松组,低和高剂量沙参麦冬汤组,每组40只。除对照组外,其余4组大鼠采用持续吸入高氧造模,沙参麦冬汤组和地塞米松组大鼠灌胃给予6.00和24.0 mg·kg-1沙参麦冬汤及0.75μg·kg-1地塞米松注射液,对照组大鼠给予等量生理盐水。给药21 d后检测各组大鼠肺组织湿质量/干质量(W/D)值,HE染色法观察各组大鼠肺组织病理形态表观,计算各组大鼠肺组织中辐射状肺泡计数(RAC),检测各组大鼠肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,ELISA方法检测各组大鼠肺组织中细胞炎性因子白细胞间介素1(IL-1)、白细胞间介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2和caspase-3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肺组织W/D值明显升高(t=3.144,P<0.05),可见明显肺水肿;氧暴露21 d后肺泡腔扩大、结构简化,间隔增厚,RAC明显减少(t=3.989,P<0.05),炎症细胞浸润,肺组织中MDA、SOD、GSH-Px、IL-1和TNF-α水平以及Bax和caspase-3蛋白表达水平明显升高(t=6.562,t=1.971,t=1.972,t=20.241,t=32.808,t=22.663,t=19.234,P<0.05),IL-10水平明显降低(t=7.857,P<0.05);与模型组比较,地塞米松组和不同剂量沙参麦冬汤组大鼠肺水肿程度改善,肺组织W/D值明显降低(t=1.018,t=2.691,t=0.760,P<0.05),肺泡结构紊乱情况减轻,肺组织中MDA、SOD、GSH-Px、IL-1和TNF-α水平以及Bax和caspase-3蛋白表达水平降低(t=6.562,t=1.971,t=1.972,t=20.241,t=32.808,t=22.663,t=19.234,P<0.05),IL-10水平和Bcl-2蛋白表达水平升高(t=7.857,t=7.743,P<0.05),且以高剂量沙参麦冬汤组效果为佳。结论:沙参麦冬汤能有效保护由高氧造成的新生大鼠支气管和肺的损伤。

高氧诱导支气管肺发育不良模型新生大鼠肺组织中miR-21-5p的表达

目的建立高氧诱导新生SD大鼠支气管肺发育不良(BPD)模型,探讨微小RNA-21-5p (miR-21-5p)在BPD大鼠肺组织中的表达。方法将60只新生SD大鼠随机分为高氧组和对照组,每组30只,于生后第1、4、7天,留取大鼠双肺标本,右肺用于观察肺组织病理改变,比较2组大鼠肺泡直径、肺泡腔切面面积及辐射状肺泡计数(RAC)变化;左肺用于实时荧光定量PCR检测肺组织中mi R-21-5p的相对表达量。结果高氧组大鼠随着吸氧时间的增加,肺泡直径、肺泡腔切面面积增大,RAC逐渐减少,mi R-21-5p的表达呈减少趋势;对照组大鼠随着生后日龄的增加,肺泡直径、肺泡腔切面面积减小,RAC逐渐增多,miR-21-5p的表达呈增加趋势。比较2组大鼠生后第4、7天的肺泡直径、肺泡腔切面面积、RAC及miR-21-5p的相对表达量,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论持续高浓度氧暴露7 d后可成功建立大鼠BPD模型。miR-21-5p可能通过表达下调在BPD的形成过程中发挥重要作用。

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺泡损伤及肺泡上皮细胞的变化

下载PDF阅读器目的 探讨高浓度氧致新生鼠肺损伤时肺泡形态学变化和肺泡上皮细胞动态变化.方法 通过吸入85%～90%高浓度氧气建立新生鼠慢性肺疾病组织模型.80只新生鼠分为实验组和对照组,实验组（n=40）吸人85%～90%氧气,对照组（n=40）吸入空气.分别留取1、3、7、14、21 d的肺组织,应用放射状肺泡计数（RAC）并且测量肺泡间隔厚度以判定肺泡发育情况,应用免疫组化及RT-PCR技术测定肺组织表面活性蛋白C（SPC）、水通道蛋白-5（AQP5）蛋白及mRNA表达.结果 在生后1 d和3 d,两组RAC和肺泡间隔厚度差异无显著性（P〉0.05）.在7 d和14 d,实验组的RAC明显低于对照组（P〈0.01）,肺泡间隔厚度高于对照组（P〈0.01）,21 d时肺泡间隔厚度升至最高,与对照组间比较差异有显著性（10.62±5.01 vs 3.62±0.88,P〈0.001）,RAC降至最低,与对照组间比较差异有显著性（3.57±1.24 vs10.47±0.88,P〈0.001）.高氧肺损伤实验组SPC 3 d时表达明显减少,7d后开始增多,14 d、21d明显高于对照组;而AQP5随着肺损伤的加重表达进行性下降.结论 高氧肺损伤可导致肺泡发育停滞,明显损伤肺泡上皮细胞,肺泡上皮细胞特异性标志物SPC、AQP5表达结果提示I型肺泡上皮细胞损伤严重,Ⅱ型肺泡上皮细胞虽然数量有所增加但其分化与转化能力明显下降.

角质细胞生长因子对吸入高体积分数氧新生大鼠肺组织的影响

目的研究角质细胞生长因子(KGF)对高体积分数氧(高氧)暴露下新生大鼠肺组织结构的影响。方法将新生的108只SD大鼠随机分为空气组、高氧组和KGF干预组,每组36只。每组又分为3 d、7 d、14 d 3个亚组。高氧组、KGF干预组大鼠持续暴露于氧体积分数>950 mL.L-1氧箱中,KGF干预组于吸氧同时背部皮下注射重组人角质细胞生长因子(rhKGF)1 mg.d-1,连用3 d后改为0.5 mg.d-1直至实验结束。空气组和高氧组给予等量9 g.L-1盐水。空气组大鼠呼吸空气。3 d、7 d、14 d亚组在相应时间点取肺组织,通过肉眼及光镜下观察其肺组织病理学变化,并作肺泡辐射状计数(RAC)。结果空气组7 d时出现肺泡化,14 d时肺泡化成熟。高氧组时小血管扩张充血,肺间质细胞增多,7 d时肺间隔变厚,肺泡腔大小不一,肺泡数减少,14 d时肺泡数明显减少,肺泡大小不等,出现明显纤维化。KGF干预组7 d时可见肺泡结构较完整,14 d时少数肺泡融合,间质细胞增生不严重。高氧组3 d时RAC与空气组相比差异无统计学意义(P>0.05),7 d、14 d时RAC与空气组相比差异均有统计学意义(Pa>0.01)。KGF干预组各时间点RAC与空气组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05)。结论长时间暴露于高氧环境,可导致新生大鼠肺组织发育障碍,但KGF能促进肺泡的发育,减轻纤维化,可有效减轻高氧吸入对新生大鼠肺组织的损伤。