产ESBLs并高产AmpC酶肺炎克雷伯氏杆菌中整合子的基因研究

目的 :观察 4株从临床分离产超广谱内 β内酰胺酶 (ESBLs)及AmpC酶肺炎克雷伯氏杆菌的多重耐药情况 ,分析其中整合子的存在 ,对整合子的特性进行研究 ,探讨整合子基因盒表达对肺炎克雷伯杆菌耐药表型的影响。方法 :采用微量稀释法测定复方新诺明等 15种抗菌药物对细菌的最低抑菌浓度 (MIC)。PCR技术检测整合子基因 ,DNA测序研究整合子插入耐药基因盒情况。结果 :这 4株菌对多种抗菌素耐药。其中 1株存在整合子 (扩增片段 2 0 0 0bp左右 ) ,携有dhfrXII和aadA2基因。结论 :4株菌中仅 1株存在整合子结构 ,尽管产ESBLs和AmpC酶基因未位于整合子的基因盒上 ,但整合子参与多重耐药的产生。

大熊猫肺炎克雷伯氏杆菌的分子诊断

建立了PCR分子诊断技术 ,并对大熊猫主要肠道病原菌肺炎克雷伯氏杆菌进行检测。结果表明 ,该方法简单、快速、敏感、结果可靠 ,适用于大熊猫肠道病原菌的早期诊断 ,该方法具有广阔的应用前景。

164例肺炎克雷伯氏杆菌院内感染的临床与药敏分析

目的:探讨肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的流行病学特点以及抗生素治疗策略。方法:对温州医学院第一附属医院2000年1月-2002年10月医院内164例克雷伯肺炎的临床资料进行回顾性分析。结果:医院内产ESBLs的肺炎克雷伯菌菌株发生率为30.5%;高龄、长期住院、严重基础疾病、广谱抗生素及激素的使用、侵袭性操作均是克雷伯肺炎的高危因素;肺炎克雷伯菌仅对亚胺培南高度敏感,对其他β-内酰胺类抗生素敏感性已下降;产ESBLs克雷伯肺炎对多种抗生素的耐药性呈上升趋势。结论:合理使用抗生素,积极防治原发病,增强患者免疫功能,减少住院时间,有利于预防克雷伯菌肺炎感染,尤其预防产ESBLs的克雷伯菌引起的肺炎的产生。

大熊猫感染性泌尿生殖道血尿症病原—肺炎克雷伯氏杆菌

对一只长期在秋冬季节交替或炎热夏季发生血尿症大熊猫的尿液进行细菌的分离、培养,并对分离株进行了小白鼠毒性试验和药敏试验。通过对分离菌株的染色镜检和生化试验,最后确定为肺炎克雷伯氏杆菌。作者对肺炎克雷伯氏杆菌引发大熊猫的疾病类型进行了探讨,指出肺炎克雷伯氏杆菌除可引发大熊猫肠炎和败血症外,还可导致大熊猫发生以排血样尿液为主要临床表现的泌尿生殖道感染。

35例小儿肺炎克雷伯氏杆菌肺炎临床与药敏分析

随着β-内酰胺类抗生素临床广泛应用，产ESBLs的肺炎克雷伯菌株日益增多，导致临床治疗异常困难。现将我科2006年1月～2008年1月由于肺炎克雷伯杆菌引起的小儿肺炎35例报告如下。

小儿肺炎克雷伯氏杆菌肠炎51例临床分析

目的 :探讨小儿肺炎克雷伯氏杆菌肠炎的临床特征、药敏试验及治疗等问题。方法 :对经粪便细菌培养证实的 51例小儿肺炎克雷伯氏杆菌肠炎的临床资料进行回顾性分析。结果 :735例腹泻患儿粪便标本中 ,肺炎克雷伯氏杆菌检出率 6 .9% ,51例病例中 ,迁延性及慢性腹泻占 78.4 % ,2岁以下婴幼儿占 76 .5% ,药敏试验结果对头孢哌酮、丁胺卡那霉素较敏感。结论 :肺炎克雷伯氏杆菌是本地区小儿腹泻的主要致病菌之一 ,易引起 2岁以下婴幼儿迁延性及慢性腹泻 ,治疗上强调调整肠道微生态平衡 ,加强支持治疗 ,必要时选用敏感抗生素 ,防止滥用广谱抗生素及糖皮质激素。

鸡肺炎克雷伯氏杆菌病现状及防治措施

近几年来,克雷伯氏杆菌属中的肺炎克雷伯氏杆菌引起的细菌性慢性传染病,由于血清型较多,给临床治疗带来了一定的困难.如不及时治疗,其败血症死亡率和发病率几乎相等.现将诊治情况报告如下.

基于非理性设计的肺炎克雷伯氏杆菌甘油脱水酶的分子定向进化

1,3-丙二醇是一种具有广泛应用前景和巨大市场潜力的平台化合物。在生物体转化甘油合成1,3-丙二醇的代谢途径中,甘油脱水酶是代谢途径的限速酶,然而自然界中的甘油脱水酶却存在着诸多的不足。本研究采用易错PCR技术对来源于肺炎克雷伯氏杆菌的甘油脱水酶进行非理性设计的分子定向进化,通过高通量筛选方法筛选获得了一个酶学性质得到了改善的突变酶γ-F97G。当以甘油作为酶催化的底物时,突变酶的酶比活力为(583.8±49.4)U/mg,相比较野生型的酶比活力提高了约94%;当以1,2-丙二醇作为酶催化底物时,突变酶的酶比活力为(147.9±5.5)U/mg,相比较野生型的酶比活力提高了约72%。经分析酶蛋白的三维结构后发现酶蛋白发生突变的位点属于远距离突变位点,实验结果表明远距离突变有时同样是一条优化和改善酶的酶学性质的好途径。

克雷伯氏菌引起婴儿腹泻的病原分离鉴定及耐药性检测

通过对急性腹泻患儿粪便标本镜检、细菌分离培养、生化特性、药敏试验和致病性分析后分离鉴定出克雷伯氏菌．药敏试验结果显示对头孢哌酮、丁胺卡那霉素较敏感．在临床小儿感染性腹泻的诊治中,应注意肺炎克雷伯氏杆菌的分离鉴定和选用敏感抗生素对症治疗,以防止滥用广谱抗生素及耐药性的形成．

一株适用于短程反硝化的细菌筛选及其脱氮特性

从水稻田土壤中筛选出一株短程反硝化作用明显的菌株D5,结合细菌的形态结构以及16S rDNA序列分析,鉴定为肺炎克雷伯氏杆菌(Klebsiella pneumoniae),并进一步采用单因素实验方法探究了环境因子(碳源种类、C/N和温度)对该菌株脱氮性能的影响。结果表明,多种环境因子均对菌株D5的短程反硝化效果具有较大影响,最佳碳源为柠檬酸钠,最佳C/N为3,最佳温度为25℃和30℃。结果显示,菌株D5具有优良的短程反硝化性能,通过调控环境条件可以取得最佳的短程反硝化效果。

呼吸内科病房革兰阴性杆菌分布及耐药性分析

目的了解呼吸内科病房革兰阴性杆菌的分布情况,并对其耐药性进行分析。方法分析呼吸内科住院患者358株临床分离菌中的革兰阴性杆菌分布情况,并将其进行药敏试验。结果 358株临床分离菌中共检出革兰阴性杆菌232株,肺炎克雷伯氏杆菌,大肠埃希氏杆菌,铜绿假单胞菌为前三位,依次占34.1%,31.9%和14.7%。肺炎克雷伯杆菌对头孢他啶,氯霉素和庆大霉素较敏感,大肠埃希氏杆菌对氨曲南和头孢他啶的耐药率较低,铜绿假单胞菌仅对庆大霉素较为敏感。结论革兰氏阴性杆菌耐药现象较多,应根据药敏结果选择敏感抗生素。

一株产1,3-丙二醇的克雷伯氏菌的噬菌体生物学特性

【目的】克雷伯氏菌发酵生产1,3-丙二醇过程中发生噬菌体感染会严重影响宿主菌的生长和目标产物的生成,因此分离克雷伯氏菌噬菌体并考察其生物学特性对预防和控制噬菌体感染具有重要意义。【方法】采用敏感指示菌法及Adams双层平板法从感染噬菌体的肺炎克雷伯氏杆菌发酵液中分离得到一株噬菌体;纯化后用磷钨酸负染法电镜观察;手工法提取噬菌体核酸,酶切后琼脂糖凝胶电泳分析;同时考察了其最佳感染复数、一步生长曲线及对温度、pH、紫外线、乙醚和氯仿等理化因素的敏感性等生理特性;最后考察了噬菌体对肺炎克雷伯氏杆菌生长和发酵的影响。【结果】分离出一株肺炎克雷伯氏杆菌溶源性噬菌体,其噬菌斑为无晕环透明圆斑,直径约1.5 mm;其头部为直径约60 nm-70 nm的球体,有一长约160 nm的丝状长尾;基因组核酸能被双链DNA内切酶EcoRⅠ及HindⅢ切开,大小约42 kb;对高温和紫外线敏感,耐碱性而受强酸抑制,对氯仿不敏感;最佳感染复数为1,潜伏期与裂解期均为50 min,裂解量为343个;感染噬菌体的肺炎克雷伯氏杆菌的细胞生长延滞约8 h,代谢流偏向乳酸途径。【结论】该噬菌体属于无包膜长尾噬菌体,能改变克雷伯氏菌发酵生产1,3-丙二醇的代谢规律,为1,3-丙二醇发酵生产过程中噬菌体感染的预防和控制研究奠定了基础。

一株环境Klebsiella pneumoniae硝化与反硝化研究

文章对分离于自然环境中的一株异养硝化-好氧反硝化菌的氮代谢特性进行研究,以期为解释异养硝化和好氧反硝化的机制和为生物脱氮工艺提供理论依据。用16S r DNA基因序列分析法对分离菌株进行鉴定。以铵盐、硝酸盐、亚硝酸盐作为细菌氮源,每隔3 h连续取样,检测培养基中氮和细菌浓度的变化。经鉴定该菌株属于肺炎克雷伯氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)。该菌株具有降解铵盐、硝酸盐和亚硝酸盐的作用,24 h内的降解率分别为96%、100%、100%,氮去除速率分别为4.8、2.2、3.3 mg/(L·h)。该研究为中国内首次报道环境肺炎克雷伯氏杆菌具异养硝化与好氧反硝化特性,提示该类细菌具重要生态作用,广泛参与环境氮循环,也是污水中去除氮的一类可选微生物资源。

Klebsiella pneumoniae甘油脱水酶α亚基基因的克隆与序列分析

甘油脱水酶是1,3 丙二醇发酵过程中的重要限速酶,具有很好的工业应用前景.其中α亚基为甘油脱水酶的主要组成部分,该基因的正确克隆与分析对甘油脱水酶的正确表达起重要作用.作者采用PCR技术,从肺炎克雷伯氏杆菌A.S.1.1736基因组中扩增得到了编码甘油脱水酶α亚基的gldA基因,并将其克隆至pMD18 T载体中.经核苷酸序列分析证实,gldA基因开放阅读框架由1668bp组成.经GenBank检索对照分析,gldA基因序列与国外文献报道的同源性达99.34%,表明所克隆的gldA基因即为克雷伯氏甘油脱水酶α亚基基因.

原生质体紫外诱变技术选育1,3-丙二醇高产菌株

以肺炎克雷伯氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)为研究对象,应用原生质体紫外诱变技术提高其对甘油及1,3-丙二醇的耐受性,获得1,3-丙二醇高产菌。在原生质体制备过程中,运用滤膜去除酶解后细胞悬液中的正常菌体,简化菌体酶解过程,提高再生率及形成率。经过原生质体诱变后,以耐受高浓度甘油和1,3-丙二醇及高产酸能力为筛选方向,最终筛选到了3株高产菌株(Kp-1、Kp-4和Kp-5)。在补料发酵实验中,上述诱变菌产1,3-丙二醇能力分别为70.24、65.21和75.51 g/L,比野生菌株WT(55.78 g/L)分别提高了25.92%、16.91%和35.37%。

重组依赖辅酶B12的甘油脱水酶基因表达系统构建

采用PCR方法从肺炎克雷伯氏杆菌基因组中分别扩增得到了编码依赖辅酶B12的甘油脱水酶α、β、γ三个亚基的基因gldA、gldB、gld将gldBC基因克隆至pSIM—T载体上，经测序正确后亚克隆至pGEX-4T-1载体中。将gldA进行T-A克隆后测定核苷酸序列正确，亚克隆至连有gldBC基因的pGEX-4T-1载体中。从而成功的构建了gldABC基因的同向串联原核融合表达载体pGEX—gldABC。