中性粒细胞/淋巴细胞比值在肺炎支原体肺炎预后中的预测价值研究

目的:探索中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)在肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)预后中的评估价值。方法:纳入2019年1月—2023年12月在徐州医科大学附属宿迁医院住院的2375例MPP患儿。根据病情将患儿分成重症肺炎支原体肺炎(severe Mycoplasma pneumoniae pneumonia,SMPP)组(n=125)和非SMPP组(n=2250)以及难治性肺炎支原体肺炎(refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia,RMPP)组(n=451)和非RMPP组(n=1924)。收集患儿基本资料及临床信息,回顾性分析NLR在SMPP及RMPP预后中评估价值。结果:NLR是独立预测SMPP的指标(OR=1.188,95%CI:1.123~1.299,P=0.033)。与低NLR组相比,高NLR组SMPP发生率更高(P<0.001)。NLR也是独立预测RMPP的指标(OR=1.320,95%CI:1.145~1.432,P<0.001)。高NLR组的SMPP发生率、RMPP发生率、ICU住院发生率、总发热时间、住院天数以及住院费用高于低NLR组(P<0.001)。结论:NLR可独立预测MPP患儿预后,为SMPP及RMPP的早期诊疗提供指导。

住院患儿肺炎支原体肺炎大环内酯类耐药情况及临床诊治

目的 总结2023年4月至10月呼吸科住院儿童肺炎支原体(MP)感染流行病学特征和耐药率,并分析该段时期肺炎支原体肺炎(MPP)临床及治疗特征。方法 采集社区获得性肺炎患儿住院当日咽拭子标本,行tNGS病原体及MP大环内酯类耐药基因突变检测,分析MP阳性率及大环内酯类耐药率。MPP患儿根据所处月份分为平日组(6月)和流行高峰组(9月);根据是否检出大环内酯类耐药基因分为敏感组和耐药组,比较各组间患儿临床特征。将耐药组分为平日耐药组和流行高峰耐药组,比较两组间治疗差异。结果 在1 425例社区获得性肺炎患儿中,男686例、女739例,中位年龄为6(3~8)岁。MP阳性率57.1%(813例)。4至10月各月份间MP阳性率差异有统计学意义(P<0.001),MP阳性率逐月上升(12.5%~71.6%)。813例MPP住院患儿中627例检出大环内酯类耐药基因突变,MP总耐药率为77.1%。MP非流行期(4~6月)的耐药率93.9%,流行高峰期(8~10月)耐药率显著降低,为71.9%。4至10月各月份间MP耐药率差异有统计学意义(P<0.001)。平日组76例,流行高峰组189例。与平日组相比,流行高峰组住院天数延长,CRP和LDH水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。敏感组64例,耐药组201例。与敏感组相比,耐药组住院天数延长,LDH水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。201例耐药MPP患儿中,平日耐药组71例,流行高峰耐药组130例。与平日耐药组相比,流行高峰耐药组应用甲基泼尼松龙后退热所需时间更长,四环素类抗生素使用率更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 2023年8—10月为MP流行高峰,感染率高于平日,但住院患儿的MP耐药率低于平日。与平日相比,流行高峰期的MPP免疫应答反应更强,表现为更长的住院时间和更高的炎症指标,需考虑存在新突变的可能。大环内酯类联合糖皮质激素治疗对流行高峰期耐药MPP治疗效果欠佳,需要加用四环素类药物控制感染。

肺炎支原体肺炎患儿外周血PCT、IL-6水平与MP抗体滴度、MP-DNA的相关性分析

目的探究肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血降钙素原(PCT)和白细胞介素-6(IL-6)水平与肺炎支原体(MP)抗体滴度、肺炎支原体DNA(MP-DNA)的相关性。方法选取2023年3月至2024年3月武汉市第三医院收治的97例MPP患儿为研究对象,根据病情严重程度将其分为轻症组(n=63)和重症组(n=34),根据血清MP抗体滴度不同分为1∶160亚组(n=19)、1∶320亚组(n=56)和≥1∶640亚组(n=22)。比较轻症组和重症组患儿临床肺部感染评分(CPIS)、外周血PCT和IL-6水平、血清MP抗体滴度及MP-DNA阳性率,分析外周血PCT和IL-6水平与血清MP抗体滴度、MP-DNA阳性率的相关性。结果重症组患儿CPIS评分、外周血PCT水平、IL-6水平和MP-DNA阳性率均高于轻症组(P<0.05);两组患儿血清MP抗体滴度分布比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同血清MP抗体滴度亚组患儿外周血PCT、IL-6水平及MP-DNA阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05),外周血PCT、IL-6水平随血清MP抗体滴度增加而升高(P<0.05),血清MP抗体滴度1∶160亚组的MP-DNA阳性率低于MP抗体滴度1∶320亚组和≥1∶640亚组(P<0.05);Spearman分析结果显示,MPP患儿外周血PCT和IL-6水平、MPP重症、CPIS评分与血清MP抗体滴度、MP-DNA阳性结果均呈正相关(P<0.05)。结论MPP患儿外周血PCT和IL-6水平随病情严重程度而升高,与血清MP抗体滴度和MP-DNA阳性结果呈正相关,二者对MPP患儿病情评估具有一定参考价值。

儿童重症肺炎支原体肺炎的临床特征分析

目的 探讨儿童重症肺炎支原体肺炎(severe mycoplasma pneumoniae pneumonia, SMPP)的临床特征。方法回顾性收集2018年1月1日至2021年12月31日间在华中科技大学同济医学院附属同济医院儿童重症监护室住院治疗的SMPP患儿的临床资料,并分析其临床特征数据。结果 84例SMPP患儿中,72月龄最常见。年长儿组人数明显多于婴幼儿组(59 vs.25,P<0.05)。SMPP检出率最高的月份是7月。主要临床表现为发热、咳嗽、肺外症状。73.8%的患儿出现了肺部体征的改变,33.3%的患儿在病程中存在肺外并发症。支气管肺泡灌洗液病原宏基因组二代测序(metagenomic next-generation sequencing, mNGS)中肺炎支原体阳性率为100.0%,核酸检测的阳性率为80.5%,高于其他检测方式。年龄、入科氧流量、入院乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)值是引起SMPP需要连续气道正压通气或有创呼吸机等高级呼吸支持的独立危险因素。结论 SMPP患儿发热以高热为主,发热时间长,可伴有严重肺外并发症。年龄越小的SMPP患儿其肺部病变越重。支气管肺泡灌洗液mNGS是一种快速、特异性高的诊断方法。

BALF-mNGS在难治性肺炎支原体肺炎中的应用1例

难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)是肺炎支原体感染的一种严重状态。该病以发热持续时间长、住院时间长和易出现肺外并发症为特点。本文收治1例快速进展的肺炎支原体肺炎患儿,怀疑合并肺炎克雷伯菌感染。通过宏基因组二代测序(mNGS)确诊,使用头孢哌酮舒巴坦联合米诺环素抗感染及纤维支气管镜下肺泡灌洗治疗后,病情转归良好。病原mNGS在病原学混合感染诊断中具有重要的意义,对于RMPP患者,积极早期应用纤维支气管镜下肺泡灌洗治疗,可以明确诊断同时获得良好的治疗效果。

BD-77雾化吸入给药对肺炎支原体感染小鼠的治疗作用

目的评价BD-77雾化吸入给药对肺炎支原体肺炎小鼠模型的治疗作用。方法Balb/c小鼠按照体质量随机分为正常对照组、模型对照组、阿奇霉素对照组(42 mg·kg^(-1)·d^(-1))、BD-77高剂量组(75 mg·mL^(-1),雾化15 min)、BD-77低剂量组(37.5 mg·mL^(-1),雾化15 min)。以肺炎支原体滴鼻感染建立小鼠支原体肺炎模型,雾化给药4 d后,通过小鼠体重及肺重计算肺指数和肺指数抑制率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织中白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及血清中C反应蛋白(CRP)水平,苏木精-伊红(HE)染色评估小鼠肺组织病理学变化,全面评价BD-77对小鼠支原体肺炎的治疗作用。结果BD-772个剂量组雾化吸入给药15 min均可显著降低小鼠肺指数,减轻肺部炎症病变,降低肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α含量及血清CRP水平。结论BD-77雾化吸入可治疗支原体感染小鼠肺炎,本研究为BD-77开发作为防治肺炎支原体肺炎的药物提供了实验室数据支持。

金花清感颗粒联合布地奈德、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联雾化吸入疗法在儿童肺炎支原体肺炎中的应用观察

目的分析金花清感颗粒联合布地奈德、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联雾化吸入治疗儿童肺炎支原体肺炎(MPP)的效果。方法前瞻性选取2022年2月—2023年2月常熟市第二人民医院收治的114例MPP患儿为研究对象,按照随机数字表法分为对照组、研究组,每组57例。对照组给予布地奈德、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联雾化吸入治疗,研究组在对照组基础上给予金花清感颗粒,连续治疗10 d评估效果。比较两组症状改善情况、肺功能、临床疗效、气道重塑指标、炎症因子、T淋巴细胞亚群及药物不良反应发生情况。结果研究组发热消退时间、咳嗽消失时间、肺部啰音消失时间均短于对照组(P<0.05)。研究组治疗前后的达峰时间比、达峰容积比、呼吸频率的差值均高于对照组(P<0.05)。研究组总有效率高于对照组(P<0.05)。研究组治疗前后的气道壁厚度/外径比值、气道面积/总横截面积比值的差值均高于对照组(P<0.05)。研究组治疗前后的超敏C反应蛋白、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α的差值均高于对照组(P<0.05)。研究组治疗前后的CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)的差值均高于对照组(P<0.05)。两组总不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论金花清感颗粒联合布地奈德、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联雾化吸入治疗儿童MPP疗效显著,可改善肺功能,抗气道重塑,抑制炎症反应,改善T淋巴细胞亚群,且安全性良好。

维生素C辅助阿奇霉素序贯疗法治疗儿童肺炎支原体肺炎的疗效

目的:探讨维生素C辅助阿奇霉素序贯疗法治疗儿童肺炎支原体肺炎(MPP)疗效及其对免疫功能的影响。方法:选取106例MPP患儿为研究对象,按照治疗方式不同分为观察组和对照组,每组各53例。观察组患者采用维生素C辅助阿奇霉素序贯疗法治疗;对照组采用阿奇霉素治疗,疗程均为7 d。比较两组患儿临床疗效、症状缓解时间、肺功能、免疫功能及不良反应发生情况。结果:观察组患儿临床总有效率高于对照组(98.11%vs.86.79%,P<0.05)。治疗后,观察组患儿高热、咳嗽、肺啰音、胸片缓解时间短于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患儿用力呼气肺活量占预计值百分比(FVC)、第1秒用力呼气肺活量(FEVl)、FEVl/FVC无统计学差异(P>0.05);治疗后,两组患儿FVC、FEVl、FEVl/FVC均升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患儿外周血免疫球蛋白IgA、IgM、IgG水平无统计学差异(P>0.05);治疗后,两组患儿外周血IgA、IgG水平均升高,且观察组高于对照组(P<0.05);IgM水平均降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。两组患儿治疗期间不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿奇霉素序贯疗法联合维生素C治疗儿童肺炎支原体肺炎能够提高疗效和免疫功能,值得临床推广。

儿童大环内酯类耐药肺炎支原体肺炎诊疗理念与实践

2023年7月以来我国乃至全球迎来了肺炎支原体肺炎的流行高峰,给儿童健康、家庭及社会均带来了沉重的负担。尽管大环内酯类抗菌药物为指南推荐的首选用药,本次流行的肺炎支原体肺炎住院患儿中,以大环内酯类耐药为主。这对传统的诊疗模式带来了巨大的挑战,特别是肺动脉栓塞病例的增多,需要临床医师思考并实践新的诊疗理念。

NLR、LDH、IL-6在肺炎支原体肺炎患儿病情及预后评估中的价值

目的探讨肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)患儿中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、白细胞介素-6(lnterleukin-6,IL-6)水平在预后评估中的价值。方法采用前瞻性研究方法,选取2020年9月至2021年2月昆明市儿童医院收治的180例MPP患儿作为观察组,其中普通患儿104例,重症患儿76例;另选取同期健康体检儿童60例作为对照组。比较观察组和对照组NLR、LDH、IL-6水平,评价NLR、LDH、IL-6对MPP患儿病情严重程度的评估价值。根据MPP预后情况,将患儿分为预后不良组(n=35)和预后良好组(n=145)。比较不同预后MMP患儿的临床资料、NLR、LDH、IL-6水平,分析MPP患儿预后影响因素及NLR、LDH、IL-6与临床肺部感染评分(Clinical Pulmonary Infection Score,CPIS)、白细胞计数(white blood cell count,WBC)、降钙素原(procalcitonim,PCT)及C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的相关性。统计学方法采用t检验、χ^(2)检验、Logistic回归分析、受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析、Spearman模型分析。结果观察组普通、重症患儿及对照组儿童NLR分别为1.5±0.3、2.2±0.3、1.2±0.2,LDH水平分别为(439.8±30.1)U/L、(528.6±35.6)U/L、(125.8±28.9)U/L,IL-6水平分别为(18.3±1.3)ng/L、(25.8±2.1)ng/L、(9.5±1.2)ng/L;观察组普通、重症患儿NLR、LDH、IL-6水平高于对照组(NLR:t=10.135、27.514,LDH:t=86.323、103.974,IL-6:t=44.834、84.297,P值均<0.05),且观察组普通患儿NLR、LDH、IL-6水平低于重症患儿(NLR:t=20.599,LDH:t=26.252,IL-6:t=48.065,P值均<0.05)。NLR、LDH、IL-6联合评估的曲线下面积(area under the curve,AUC)最大,为0.911,灵敏度、特异度分别为82.89%、89.42%;CPIS评分(OR=7.232,95%CI:5.055~10.347)、WBC(OR=6.839,95%CI:4.752~9.844)、PCT(OR=8.882,95%CI:6.375~12.374)、CRP(OR=11.520,95%CI:8.125~16.333)、NLR(OR=11.517,95%CI:7.852~16.894)、LDH(OR=11.881,95%CI:7.698~18.337)、IL-6(OR=12.424,95%CI:8.025~19.235)均为MPP患儿预后的独立危险因素(P值均<0.05);MPP患儿NLR、LDH、IL-6水平与CPIS评分、WBC、PCT、CRP均呈正相关(P值均<0.05)。结论MPP患儿NLR、LDH、IL-6水平明显升高,可作为MPP病情及预后评估的潜在指标。

南宁地区社区获得性肺炎支原体肺炎患儿的临床特征及重症风险模型构建

目的探讨南宁地区儿童肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)的临床特征及重症肺炎支原体肺炎(severe Mycoplasma pneumoniae pneumonia,SMPP)的危险因素并构建风险预测模型。方法收集2019年1月至2022年12月广西自治区妇幼保健院收治入院的6264例社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)患儿的临床资料,其中包括MPP患儿1212例,分析其流行病学特点;进一步选取实验室指标完整的258例MPP患儿,根据病情严重程度分为轻症组(MPP组)106例和重症组(SMPP组)152例,比较两组之间各项实验室指标的差异;经多因素逐步Logistic回归分析,排除共线性问题,构建SMPP风险预测模型,并绘制ROC曲线以检验其预测效能。结果CAP患儿中以2019年(478例,39.4%)的MPP患儿占比最高,此外,学龄期组(175例,54.0%)、女童(577例,23.7%)和夏季(354例,29.2%)的MPP患儿占比较高(P均<0.05);通过Logistic回归筛选出住院时间、中性粒细胞百分比(Neu%)、清蛋白(Alb)和总T淋巴细胞(CD3+T)4项指标并建立联合预测儿童SMPP的模型,该模型的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.925(95%CI:0.894~0.956,P<0.001),敏感性为0.816,特异性为0.906。结论儿童MPP多发生在学龄期,以女童、夏季多见。基于住院时间、Neu%、Alb、CD3+T指标建立的Logistic回归模型对儿童SMPP具有良好的预测效能。

ACE与ACE2在儿童重症肺炎支原体肺炎中的水平变化及预测价值

目的探讨血管紧张素转化酶(ACE)与血管紧张素转化酶2(ACE2)在儿童重症肺炎支原体肺炎(SMPP)中的水平变化,并评估其在预测SMPP临床发展中的价值。方法选择2020年10月至2023年12月在兰州大学第二医院住院的71例普通肺炎支原体肺炎(MPP)患儿(MPP组)、63例重症肺炎支原体肺炎(SMPP)患儿(SMPP组),并选择同期20名健康体检儿童为健康对照组。测定并比较3组儿童血清中ACE与ACE2质量浓度,同时收集MPP组和SMPP组患儿的实验室检查指标结果进行比较及相关性分析,绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析比较不同指标单独及联合预测SMPP的价值。结果3组儿童的血清ACE质量浓度中,SMPP组最高、健康对照组最低;血清ACE2质量浓度中,MPP组最高、健康对照组最低(P均<0.008);与MPP组相比,SMPP组白细胞计数、中性粒细胞百分比、C-反应蛋白(CRP)、淀粉样蛋白A、降钙素原、白介素-6(IL-6)、红细胞沉降率、D-二聚体(D-dimer)水平均升高(P<0.001)且与ACE质量浓度呈正相关(P<0.05)、与ACE2质量浓度呈负相关(P<0.05),SMPP组淋巴细胞百分比(LY%)降低(P<0.001)且与ACE2质量浓度呈正相关(P<0.05)、与ACE质量浓度呈负相关(P<0.05),SMPP组乳酸脱氢酶(LDH)水平较高(P<0.05)且与ACE2质量浓度呈负相关(P<0.05)、与ACE质量浓度无相关性(P>0.05),SMPP组单核细胞百分比(MO%)差异既无统计学意义也无相关性(P均>0.05);ROC曲线分析结果显示ACE、ACE2、CRP、D-dimer、LDH及ACE+ACE2联合检测、CRP+D-dimer+LDH联合检测对SMPP均具有预测价值,其中ACE+ACE2联合检测的预测价值最高,其AUC为0.991(95%CI 0.981~1.000)。结论ACE和ACE2水平很可能与SMPP患儿的病情发生、发展有关,可以作为预测SMPP的良好指标。

阿奇霉素、多西环素静脉滴注治疗小儿肺炎支原体肺炎临床对比观察

目的 对比观察阿奇霉素、多西环素静脉滴注治疗小儿肺炎支原体肺炎(MMP)临床效果。方法 MPP患儿515例,根据治疗方法不同分为3组,国产阿奇霉素组(61例,均为2023年10月住院患儿)静滴国产阿奇霉素,进口阿奇霉素组(105例,均为2023年10月住院患儿)静滴进口阿奇霉素,多西环素组(2023年9月住院患儿30例、2023年10月住院患儿90例、2023年11月住院患儿114例、2023年12月住院患儿115例)静滴多西环素,比较各组用药后退热时间、咳嗽缓解时间、肺部啰音消失时间、住院时间及全血WBC、全血CRP、血浆IL-6、血浆LDH水平和激素使用率、支气管镜使用率、合并感染率、不良反应发生率。结果 与进口阿奇霉素组比较,国产阿奇霉素组退热时间、咳嗽缓解时间短,多西环素组啰音持续时间短(P均<0.05);与2023年11月住院患儿比较,多西环素组2023年10月住院患儿咳嗽缓解时间长,2023年12月住院患儿啰音持续时间长(P均<0.05);与2023年12月住院患儿比较,多西环素组2023年9月和11月住院患儿咳嗽缓解时间、肺部啰音消失时间短(P均<0.05)。3组全血WBC、CRP及血浆IL-6、LDH水平比较无统计学差异(P均>0.05),多西环素组不同时间全血WBC、CRP及血浆IL-6、LDH水平比较无统计学差异(P均>0.05)。国产阿奇霉素组、进口阿奇霉素组、多西环素组激素使用率比较无统计学差异(P均>0.05);多西环素组2023年9月住院患儿、2023年10月住院患儿、2023年11月住院患儿、2023年12月住院患儿激素使用率比较无统计学差异(P均>0.05)。国产阿奇霉素组、进口阿奇霉素组、多西环素组支气管镜使用率比较无统计学差异(P均>0.05);与2023年10月住院患儿比较,多西环素组2023年12月住院患儿支气管镜使用率高(P<0.05)。国产阿奇霉素组、进口阿奇霉素组、多西环素组合并感染率比较无统计学差异(P均>0.05);与2023年10月住院患儿比较,多西环素组2023年12月住院患儿合并感染率高(P<0.05)。与进口阿奇霉素组比较,多西环素组不良反应发生率高(P<0.05);多西环素组2023年9月住院患儿、2023年10月住院患儿、2023年11月住院患儿、2023年12月住院患儿不良反应发生率比较无统计学差异(P均>0.05)。结论 阿奇霉素和多西环素在治疗MMP的有效性和安全性有差异,多西环素改善啰音方面优于国产和进口阿奇霉素,不良反应发生率高于国产和进口阿奇霉素,国产阿奇霉素和进口阿奇霉素在疗效和安全性无显著性差异。不同季节(月份)合并不同感染会影响多西环素治疗MMP的效果,临床在治疗期间需要根据患儿的具体情况及流行病学提供合理有效的诊疗方案。

射干麻黄汤加减治疗小儿肺炎支原体感染后寒性咳嗽探析

肺炎支原体感染是小儿呼吸系统疾病的主要病因之一,其感染后咳嗽为儿科常见疾病,临床主要有刺激性干咳、咳痰等症状,年长儿可诉咽痛、胸闷、胸痛等,患儿咳嗽时间长、频率高。因该病具有迁延难愈的特点,常致小儿咳嗽反复。笔者按照“治病必求于本”的原则,认为小儿肺炎支原体感染后寒性咳嗽因外寒引动伏饮、内外合邪而致病,治疗当从外邪、寒饮、肺脾等着手,治以宣肺散寒、温肺化饮为法,临证予以射干麻黄汤加减治疗肺炎支原体感染后寒性咳嗽,每获良效。

儿童肺炎支原体对大环内酯类抗菌药物的耐药现状及抗菌药物治疗的研究进展

肺炎支原体(MP)是社区获得性肺炎的主要病原体之一,该类肺炎尤其常见于儿童和青少年,大环内酯类抗菌药物是目前国内外指南推荐的针对儿童MP感染的首选药物。然而近年来MP对大环内酯类抗菌药物的耐药日趋严重,全球各地耐大环内酯类抗菌药物MP菌株检出率逐年增多,给临床治疗带来了很大的挑战,给人类特别是儿童的健康带来了巨大的威胁。MP对大环内酯类抗菌药物的耐药促使临床医生关注其他抗菌药物的选择。本文就儿童MP对大环内酯类抗菌药物的全球耐药现状、抗菌药物治疗的进展及体外耐药情况作一述评。

猪肺炎支原体通过抑制SPLUNC1功能破坏呼吸道炎性反应平衡

【背景】猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)通过定植猪呼吸道黏膜层,破坏呼吸道炎性反应平衡,引起炎性损伤和持续性感染。短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(short palate lung and nasal epithelial clone1,SPLUNC1)是呼吸道黏膜分泌的具有重要抗菌和抗炎功能的蛋白,被认为是呼吸道黏膜面对危险信号时的“信号传感器”。【目的】从Mhp和SPLUNC1相互作用入手,分析Mhp感染对SPLUNC1表达的影响以及SPLUNC1对Mhp引起的炎性反应的调控作用,揭示Mhp引起炎性损伤的新机制,为解决Mhp持续性感染问题提供参考。【方法】利用猪肺炎支原体对猪支气管上皮细胞(porcine bronchial epithelial cells,PBECs)感染模型和猪体感染模型,通过荧光定量PCR、间接免疫荧光和Western-blotting等方法,分别检测Mhp感染后对肺脏中SPLUNC1以及体外PBECs中SPLUNC1转录和表达的影响。克隆并扩增猪源SPLUNC1基因通过酶切鉴定,构建成功SPLUNC1真核和原核表达重组质粒pCDNA3.1-SPLUNC1以及pET28a-SPLUNC1。与此同时,设计靶向SPLUNC1的siRNA干扰片段。利用体外SPLUNC1蛋白孵育、体内呼吸道黏膜SPLUNC1抗体封闭,通过Mhp CCU50检测明确SPLUNC1对Mhp体内外生长的影响。在猪支气管上皮细胞中,通过过表达或siRNA干扰SPLUNC1基因,后感染Mhp,利用Western-blotting、间接免疫荧光以及酶联免疫吸附方法,明确SPLUNC1对Mhp的黏附作用、诱导炎性因子表达以及MAPK信号通路活化的影响。【结果】Mhp感染猪后可引起肺脏实变,主要组织病理表现为肺脏炎性损伤,同时显著上调肺泡灌洗液中趋化因子CXCL8和炎性因子TNFα和IL-1β分泌。Mhp体内外感染后,体内肺脏和体外猪支气管上皮细胞中SPLUNC1的转录和表达均显著下调。以上研究表明,Mhp可诱导肺脏炎性反应,抑制SPLUNC1表达。另一方面,体外PBECs中过表达SPLUNC1后,Mhp感染引起的CXCL8表达显著减少;siRNA干扰SPLUNC1后,Mhp感染引起的CXCL8表达显著增加,表明SPLUNC1负调控Mhp感染引起的CXCL8表达。基于Mhp感染入侵呼吸道过程,本研究进一步解析SPLUNC1负调控CXCL8表达的机制。结果表明:无论是SPLUNC1和Mhp体外孵育,还是SPLUNC1抗体体内封闭,Mhp的体内外生长均未受影响;SPLUNC1的过表达或siRNA干扰对Mhp体外黏附PBECs的能力也无显著影响;过表达SPLUNC1可抑制pERK和IκBα的激活,相反SPLUNC1 siRNA干扰后,可促进pERK和IκBα的激活。以上研究证明SPLUNC1不是通过调控Mhp的生长和黏附,而是通过负调控MAPK-ERK通路的活化来调控CXCL8的表达。【结论】SPLUNC1可通过MAPK-ERK信号通路来调控炎性因子的过度表达,维护宿主炎性平衡;与此同时,Mhp感染后可通过抑制SPLUNC1的表达来破坏宿主炎性反应的平衡调控,进而引起炎性损伤。本研究为解析Mhp感染损伤机制提供依据。

绵羊肺炎支原体小鼠感染模型的建立

旨在探索小鼠作为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)实验室感染模型的可行性,筛选建立Mo感染小鼠模型的最佳方法。将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、Mo感染组1、感染组2、感染组3和感染组4(n=12)。Mo感染组1小鼠分别滴鼻30μL和腹腔注射25μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液各1次,Mo感染组2和3小鼠分别滴鼻2和3次30μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液,Mo感染组4小鼠喉头喷雾50μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液2次,对照组用正常培养基处理。分别于感染后第0、7和14天称量小鼠体重。感染后第14天处死所有小鼠,采集血液和肺组织。通过HE染色法进行肺组织病理学检查、剖检进行肺组织病理评分、qPCR方法检测肺组织中Mo的载荷量和ELISA检测血清Mo IgG水平,确定小鼠感染模型是否建立成功及最佳建立方法。Mo感染组2和组4中小鼠体重第14天时分别比对照组显著降低17.2%(P<0.05)和21.6%(P<0.05);感染第13天,感染组2和组4小鼠出现死亡;感染后第14天剖检,Mo感染组2和组4小鼠肺部有炎症,肺病变平均评分分别为3.5和3.3,均显著高于Mo感染组1(P<0.05)和组3(P<0.05),而对照组小鼠无病变;组织病理学检查发现,Mo感染组小鼠肺可见不同程度的间质性肺炎,肺泡腔内有炎细胞浸润;对照组小鼠肺组织结构正常、完整,肺泡内未见明显细胞浸润。小鼠肺组织中Mo DNA拷贝数在Mo感染组1和组3中分别为10^(2.56)和10^(3.21)拷贝·g^(-1);感染组2和组4分别为10^(3.84)和10^(3.77)拷贝·g^(-1),且显著高于Mo感染组1(P<0.05)和组3(P<0.05),对照组为阴性。小鼠血清Mo抗体OD_(450 nm)值在Mo感染组1、组2、组3和组4分别为0.63、1.05、0.81和0.99,均显著高于对照组(P<0.05),且组2和组4均显著高于1组(P<0.05)。本研究通过1×10^(8 )CCU·mL^(-1)的Mo NJ01株菌液滴鼻2次或喉头喷雾2次均可成功建立Mo感染小鼠模型。为绵羊肺炎支原体的致病机制及防治策略研究奠定基础。

猪肺炎支原体LAP的结构预测及其抑制剂Bestatin对支原体生长的影响

本研究旨在以猪肺炎支原体为代表,研究支原体LAP酶活中心的高级结构及其被抑制后对支原生长的影响。亮氨酸氨肽酶(LAP)是一类广泛存在于各类生物的氨基酸代谢酶,有研究表明病原微生物的LAP酶活中心被抑制后可以直接影响微生物的代谢和生长。本研究拟以猪肺炎支原体(Mhp)LAP为模型,研究其理化特性和高级结构,探索LAP抑制剂乌苯美司(Bestatin)对支原体生长的影响。本研究首先用Clustal Omega进行序列同源性比较,分析LAP活性位点在不同支原体中的保守情况。然后采用GST融合标签表达猪肺炎支原体LAP蛋白,通过GST亲和层析和分子筛层析纯化蛋白,圆二色谱测定LAP的二级结构,用Alpha fold 2预测三级结构。最后用Bestatin与猪、鸡、羊等不同种属的支原体共培养来观察其影响。结果表明虽然总体序列同源性不高,但是LAP酶活中心的关键位点在常见支原体相对保守。猪肺炎支原体LAP可以通过GST标签进行可溶性表达。酶切GST标签后,分子筛层析显示LAP是六聚体,圆二色谱表明LAP具有正确的二级结构。预测的LAP三级结构显示其具有保守的底物结合关键位点。Bestatin对不同种属支原体的生长均产生抑制,且呈现剂量依赖性,但在不同菌株间存在差异,最低在6μg/mL的浓度可通过抑制氨肽酶的活性抑制猪肺炎支原体的生长。该研究为新一代抗菌药物的研发提供了新的思路。

支气管肺泡灌洗联合俯卧位治疗儿童肺炎支原体肺炎伴肺不张疗效的前瞻性随机对照研究

目的探讨支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage,BAL)联合俯卧位在儿童肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)伴肺不张中的疗效及对肺功能的影响。方法前瞻性选取2020年11月—2023年5月在内蒙古鄂尔多斯市中心医院住院治疗的94例MPP伴肺不张的患儿为研究对象,随机分为治疗组和对照组,每组各47例。治疗组在常规治疗及BAL基础上加以俯卧位治疗,对照组给予常规治疗及BAL。比较两组患儿发热、肺部体征、住院时间、肺复张和肺功能改善情况。结果治疗组肺部体征改善时间、住院时间短于对照组,住院第7天、出院当天及出院后1周肺复张有效率高于对照组(P<0.05)。治疗组出院当天及出院后1周用力肺活量占预测值百分比、第1秒用力呼气量占预测值百分比、第1秒用力呼气量/用力肺活量、用力呼出50%肺活量的呼气流量占预测值百分比、用力呼出75%肺活量的呼气流量占预测值百分比及最大呼气中期流量占预测值百分比均高于对照组(P<0.05)。两组患儿体温降至正常时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论BAL联合俯卧位在儿童MPP伴肺不张治疗中,有利于缩短肺部体征改善时间及住院时间,有利于肺复张和肺功能的改善。

血常规常规指标和衍生指标的变化在诊断小儿肺炎支原体感染中的应用价值

目的:探讨血常规常规指标中血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)、平均血红蛋白浓度(MCHC)和血常规衍生参数中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)的变化在诊断小儿肺炎支原体感染中的价值。方法:回顾分析我院2023年1—9月门诊和住院的166例呼吸道感染患儿作为研究对象,依据肺炎支原体DNA检查结果,分为肺炎支原体(MP)阳性组和肺炎支原体阴性组,同时选取同期83例健康查体并排除感染疾病的儿童作为对照组,对比三组NLR、PLR、PLT、MCHC、PDW、MPV指标水平进行工作特征(ROC)曲线分析,并评价不同指标对于鉴别诊断MP感染的诊断效果。结果:MP阳性组的NLR、PLR,明显高于MP阴性组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);MP阳性组和MP阴性组的PLT、MCHC均低于对照组,PDW高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),而MP阳性组和MP阴性组间PLT、MCHC、PDW比较,差异无统计学意义(P>0.05);三组间MPV比较,差异无统计学意义(P>0.05);将NLR、PLR进行ROC曲线绘制,结果显示NLR、PLR有鉴别诊断意义(P<0.05)。结论:NLR、PLR与肺炎支原体感染具有相关性,可作为MP和非MP感染的鉴别诊断指标,同时也作为MP感染的预测指标,为临床诊断MP提供新的诊疗依据。