重症肺炎支原体肺炎患儿外周血长链非编码核糖核酸P50相关的环氧合酶2外源性核糖核酸与核因子-κB表达的相关性及临床意义

目的探讨重症肺炎支原体肺炎患儿外周血长链非编码核糖核酸(long non-coding RNA,lncRNA)P50相关的环氧合酶2外源性核糖核酸(p50-associated cyclooxygenase-2 extragenic RNA,PACER)与核因子(nuclear factor,NF)-κB表达的相关性及临床意义。方法收集2020年7月—2023年7月间在绵阳市第一人民医院接受治疗的重症肺炎支原体肺炎患儿238例作为重症组,另选取同期在我院接受治疗的轻症肺炎支原体肺炎患儿100例作为轻症组,体检的健康儿童100例作为对照组。分析3组的外周血lncRNA PACER与NF-κB mRNA表达水平的差异及相关性。根据病情转归将重症组患儿分为好转组(n=197)、恶化组(n=41),对比2组入院后早期外周血lncRNA PACER与NF-κB mRNA表达水平的差异,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析重症组患儿外周血lncRNA PACER、NF-κB mRNA表达量对治疗转归的预测价值。结果重症组、轻症组、正常对照组的外周血lncRNA PACER、NF-κB表达水平逐渐降低,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。重症组患儿外周血lncRNA PACER表达水平与血清NF-κB水平呈正相关(P<0.05)。恶化组患儿入院时外周血lncRNA PACER、NF-κB mRNA表达量分别高于好转组患儿,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,入院早期外周血lncRNA PACER表达量预测重症肺炎患儿预后不良的最佳截断值为1.715,曲线下面积(area under curve,AUC)为0.816[95%CI:0.733~0.898],对应的灵敏度、特异度分别为71.15%、74.47%;外周血NF-κB mRNA表达量预测重症肺炎患儿预后不良的最佳截断值为2.890,AUC为0.776[95%CI:0.687~0.865],对应的灵敏度、特异度分别为74.0%、63.27%。结论重症肺炎支原体肺炎患儿外周血lncRNA PACER与NF-κB的表达水平呈正相关且对预后具有预测价值。

RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在儿童支原体肺炎早期诊断及疗效判断中的价值

目的 考察实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)早期临床诊断中的价值及其在评价MPP转归以及判断药物疗效中的作用。方法 选取社区获得性肺炎(CAP)住院患儿451例,所有患儿在入院24 h内采集血清标本,采用被动凝集试验检测肺炎支原体(MP)特异性抗体[MP抗体检测(MP-Ab)],并采集咽拭子标本提取MP-RNA(MP-SAT法)。对MPP患儿在完成大环内酯类药物治疗第1疗程、完成大环内酯类药物治疗第3疗程时复查MP-Ab和MP-RNA。根据MPP诊断标准将其分为MPP组(n=183)和非MPP组(n=268)。比较MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性(敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值)。对病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物的MPP患儿进行动态观察,考察在大环内酯类药物(阿奇霉素)治疗MP不同时间点(入院时、完成第1疗程和完成第3疗程时)MP-SAT和MP-Ab的阳性率以及患儿临床和影像学表现(咳嗽、发热、肺部体征和CT表现)变化情况。结果 MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性比较差异无统计学意义(P>0.05);病程<7 d患儿组中MP-SAT诊断MPP的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均优于MP-Ab(P<0.001或P<0.05或P<0.01)。病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物治疗的MPP患儿共42例,该组患儿在入院时、完成阿奇霉素治疗第1疗程和完成阿奇霉素治疗第3疗程时,MP-SAT检测阳性率分别为88.09%(37/42)、88.09%(37/42)和9.52%(4/42);MP-Ab检测阳性率分别为26.19%(11/42)、100.00%(42/42)和100.00%(42/42),在不同时间点MP-SAT和MP-Ab阳性率比较差异有统计学意义(P<0.001,P<0.05,P<0.001)。该组患儿完成第3疗程时MP-SAT阳性率较入院时明显下降(P<0.001),临床症状(咳嗽、发热)、肺部体征及肺部CT表现较入院时明显好转(均P<0.001),MP-SAT结果与临床症状、肺部体征及肺部影像学表现变化趋势相一致。结论 SAT检测MP-RNA可作为儿童MPP的早期诊断依据,同时也可作为评价MPP转归及判断临床治疗效果的指标。

肺炎支原体抗体免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、脱氧核糖核酸检测在诊断儿童呼吸道感染中的应用价值

目的:探讨肺炎支原体(MP)抗体免疫球蛋白(Ig) G、免疫球蛋白(Ig)M、脱氧核糖核酸(DNA)检测在诊断儿童呼吸道感染中的应用价值。方法:选择2017年2月—2020年5月间开封市人民医院收治的80例呼吸道感染患儿为研究对象(<1岁12例,1~<4岁37例,4~<8岁21例,≥8岁10例),测定MP-IgG、MP-DNA、MP-IgM。分析不同年龄段患儿MP-IgG、MP-DNA、MP-IgM阳性率,分析各指标单一与联合诊断儿童呼吸道感染价值。结果:4~<8岁组和≥8岁组MP-IgG、MP-DNA阳性率高于<1岁组、1~<4岁组,MP-IgM阳性率高于<1岁组,MP-IgM阳性率低于1~<4岁组。1~<4岁组阳性率高于<1岁组。4~<8岁组与≥8岁组MP-IgG、MP-DNA、MP-IgM阳性率和<1岁组、与1~<4岁组MP-IgG、MP-DNA阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。MP-IgG+MP-DNA+MP-IgM诊断儿童呼吸道感染的AUC为0.778,敏感度和特异度分别为78.96%、96.21%,高于各指标单一诊断。结论:不同年龄段患儿免疫系统发育不同,会影响MP的免疫应答,MP-IgG、MP-DNA、MP-IgM联合诊断能够提高儿童呼吸道感染检出率。

绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备

旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到30S rpsE基因片段,经NdeⅠ、XhoⅠ酶切纯化后,将其连接到pET-42b载体上,构建原核表达载体pET-42b-30S rpsE,使用不同浓度IPTG诱导蛋白在大肠杆菌BL21中表达;重组蛋白通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用镍层析法纯化蛋白后,与弗氏佐剂1∶1混合注射免疫家兔,然后采取全血,检测血清抗体效价及特异性。结果:经预测30S rpsE蛋白是亲水无信号肽的膜外蛋白,无跨膜结构域,有一个糖基化位点;成功构建了原核表达载体pET-42b-30S rpsE,表达的重组蛋白分子量约为25.9 ku,以包涵体和可溶性的形式存在;免疫家兔后血清抗体效价为1∶25 600,证实30S rpsE蛋白具有较好的免疫原性。

BD-77雾化吸入给药对肺炎支原体感染小鼠的治疗作用

目的评价BD-77雾化吸入给药对肺炎支原体肺炎小鼠模型的治疗作用。方法Balb/c小鼠按照体质量随机分为正常对照组、模型对照组、阿奇霉素对照组(42 mg·kg^(-1)·d^(-1))、BD-77高剂量组(75 mg·mL^(-1),雾化15 min)、BD-77低剂量组(37.5 mg·mL^(-1),雾化15 min)。以肺炎支原体滴鼻感染建立小鼠支原体肺炎模型,雾化给药4 d后,通过小鼠体重及肺重计算肺指数和肺指数抑制率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织中白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及血清中C反应蛋白(CRP)水平,苏木精-伊红(HE)染色评估小鼠肺组织病理学变化,全面评价BD-77对小鼠支原体肺炎的治疗作用。结果BD-772个剂量组雾化吸入给药15 min均可显著降低小鼠肺指数,减轻肺部炎症病变,降低肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α含量及血清CRP水平。结论BD-77雾化吸入可治疗支原体感染小鼠肺炎,本研究为BD-77开发作为防治肺炎支原体肺炎的药物提供了实验室数据支持。

影像组学联合CT特征鉴别儿童支原体与非支原体肺炎

目的观察影像组学联合CT特征鉴别儿童支原体肺炎(MP)与非MP的价值。方法回顾性收集153例肺炎患儿,根据支原体RNA检测结果分为MP组(n=101)与非MP组(n=52);按7∶3比例分为训练集(n=107,含71例MP、36例非MP)和验证集(n=46,含30例MP、16例非MP)。比较2组CT表现,以F test算法基于训练集数据筛选6个最佳CT征象,以逻辑回归(LR)方法构建CT模型。基于训练集提取及筛选最佳影像组学特征,分别以LR、支持向量机(SVM)、随机森林(RF)、线性判别分析(LDA)及随机梯度下降法(SGD)分类器构建机器学习(ML)模型;基于最佳CT征象及影像组学特征构建CT-ML模型。绘制受试者工作特征曲线,计算曲线下面积(AUC)评估各模型鉴别MP与非MP的效能。结果病变累及右肺上、中、下叶,支气管壁增厚、树芽征及边缘回缩征为最佳CT征象,以之构建的CTLR在验证集的AUC为0.710。验证集中,ML_(LR)、ML_(SVM)、ML_(RF)、ML_(LDA)及ML_(SGD)的AUC分别为0.715、0.663、0.623、0.706及0.494,ML_(LR)为效能最优影像组学模型。CT-ML_(LR)、CT-ML_(SVM)、CT-ML_(RF)、CT-ML_(LDA)及CT-ML_(SGD)在验证集的AUC分别为0.813、0.823、0.649、0.796及0.665,CT-ML_(SVM)为效能最优CT-ML模型。训练集中,CT-ML_(SVM)的AUC(0.840)高于CTLR及ML_(LR)(AUC=0.713、0.740,P均<0.05);验证集中CTLR、ML_(LR)及CT-ML_(SVM)的AUC差异均无统计学意义(AUC=0.710、0.715及0.823,P均>0.05)。结论影像组学联合CT特征能有效鉴别儿童MP与非MP。

金花清感颗粒联合布地奈德、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联雾化吸入疗法在儿童肺炎支原体肺炎中的应用观察

目的分析金花清感颗粒联合布地奈德、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联雾化吸入治疗儿童肺炎支原体肺炎(MPP)的效果。方法前瞻性选取2022年2月—2023年2月常熟市第二人民医院收治的114例MPP患儿为研究对象,按照随机数字表法分为对照组、研究组,每组57例。对照组给予布地奈德、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联雾化吸入治疗,研究组在对照组基础上给予金花清感颗粒,连续治疗10 d评估效果。比较两组症状改善情况、肺功能、临床疗效、气道重塑指标、炎症因子、T淋巴细胞亚群及药物不良反应发生情况。结果研究组发热消退时间、咳嗽消失时间、肺部啰音消失时间均短于对照组(P<0.05)。研究组治疗前后的达峰时间比、达峰容积比、呼吸频率的差值均高于对照组(P<0.05)。研究组总有效率高于对照组(P<0.05)。研究组治疗前后的气道壁厚度/外径比值、气道面积/总横截面积比值的差值均高于对照组(P<0.05)。研究组治疗前后的超敏C反应蛋白、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α的差值均高于对照组(P<0.05)。研究组治疗前后的CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)的差值均高于对照组(P<0.05)。两组总不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论金花清感颗粒联合布地奈德、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联雾化吸入治疗儿童MPP疗效显著,可改善肺功能,抗气道重塑,抑制炎症反应,改善T淋巴细胞亚群,且安全性良好。

血清PCT、CRP及IL-4水平预测小儿支原体肺炎病情严重程度的价值

目的:探讨血清降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)及白细胞介素-4(IL-4)水平预测支原体肺炎患儿病情严重程度的价值。方法:选取2019年1月—2023年1月淮安市第二人民医院儿科收治的102例支原体肺炎患儿作为研究对象,根据病情将患儿分为轻症组59例和重症组43例。比较两组临床资料及基质细胞衍生因子(CXCL12)、γ干扰素(IFN-γ)、硫化氢(H_(2)S)、超氧化物歧化酶(SOD)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、PCT、CRP及IL-4水平,多因素分析采取非条件logistic逐步回归分析,采用ROC曲线分析PCT、CRP及IL-4水平对重症支原体肺炎的预测价值。结果:两组性别、年龄、病程及CXCL12、IFN-γ、H_(2)S、SOD、MMP-9水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);重症组PCT、CRP、IL-4水平显著高于轻症组,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic逐步回归分析结果显示,PCT、CRP及IL-4为重症支原体肺炎独立危险因素(P<0.05)。ROC分析显示,PCT、CRP及IL-4预测重症支原体肺炎的曲线下面积分别为0.896、0.851、0.787。结论:血清PCT、CRP及IL-4水平均参与支气管肺炎患儿的病情进展,且可作为重症支气管肺炎的诊断指标。

儿童大环内酯类耐药肺炎支原体肺炎诊疗理念与实践

2023年7月以来我国乃至全球迎来了肺炎支原体肺炎的流行高峰,给儿童健康、家庭及社会均带来了沉重的负担。尽管大环内酯类抗菌药物为指南推荐的首选用药,本次流行的肺炎支原体肺炎住院患儿中,以大环内酯类耐药为主。这对传统的诊疗模式带来了巨大的挑战,特别是肺动脉栓塞病例的增多,需要临床医师思考并实践新的诊疗理念。

射干麻黄汤加减治疗小儿肺炎支原体感染后寒性咳嗽探析

肺炎支原体感染是小儿呼吸系统疾病的主要病因之一,其感染后咳嗽为儿科常见疾病,临床主要有刺激性干咳、咳痰等症状,年长儿可诉咽痛、胸闷、胸痛等,患儿咳嗽时间长、频率高。因该病具有迁延难愈的特点,常致小儿咳嗽反复。笔者按照“治病必求于本”的原则,认为小儿肺炎支原体感染后寒性咳嗽因外寒引动伏饮、内外合邪而致病,治疗当从外邪、寒饮、肺脾等着手,治以宣肺散寒、温肺化饮为法,临证予以射干麻黄汤加减治疗肺炎支原体感染后寒性咳嗽,每获良效。

猪肺炎支原体通过抑制SPLUNC1功能破坏呼吸道炎性反应平衡

【背景】猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)通过定植猪呼吸道黏膜层,破坏呼吸道炎性反应平衡,引起炎性损伤和持续性感染。短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(short palate lung and nasal epithelial clone1,SPLUNC1)是呼吸道黏膜分泌的具有重要抗菌和抗炎功能的蛋白,被认为是呼吸道黏膜面对危险信号时的“信号传感器”。【目的】从Mhp和SPLUNC1相互作用入手,分析Mhp感染对SPLUNC1表达的影响以及SPLUNC1对Mhp引起的炎性反应的调控作用,揭示Mhp引起炎性损伤的新机制,为解决Mhp持续性感染问题提供参考。【方法】利用猪肺炎支原体对猪支气管上皮细胞(porcine bronchial epithelial cells,PBECs)感染模型和猪体感染模型,通过荧光定量PCR、间接免疫荧光和Western-blotting等方法,分别检测Mhp感染后对肺脏中SPLUNC1以及体外PBECs中SPLUNC1转录和表达的影响。克隆并扩增猪源SPLUNC1基因通过酶切鉴定,构建成功SPLUNC1真核和原核表达重组质粒pCDNA3.1-SPLUNC1以及pET28a-SPLUNC1。与此同时,设计靶向SPLUNC1的siRNA干扰片段。利用体外SPLUNC1蛋白孵育、体内呼吸道黏膜SPLUNC1抗体封闭,通过Mhp CCU50检测明确SPLUNC1对Mhp体内外生长的影响。在猪支气管上皮细胞中,通过过表达或siRNA干扰SPLUNC1基因,后感染Mhp,利用Western-blotting、间接免疫荧光以及酶联免疫吸附方法,明确SPLUNC1对Mhp的黏附作用、诱导炎性因子表达以及MAPK信号通路活化的影响。【结果】Mhp感染猪后可引起肺脏实变,主要组织病理表现为肺脏炎性损伤,同时显著上调肺泡灌洗液中趋化因子CXCL8和炎性因子TNFα和IL-1β分泌。Mhp体内外感染后,体内肺脏和体外猪支气管上皮细胞中SPLUNC1的转录和表达均显著下调。以上研究表明,Mhp可诱导肺脏炎性反应,抑制SPLUNC1表达。另一方面,体外PBECs中过表达SPLUNC1后,Mhp感染引起的CXCL8表达显著减少;siRNA干扰SPLUNC1后,Mhp感染引起的CXCL8表达显著增加,表明SPLUNC1负调控Mhp感染引起的CXCL8表达。基于Mhp感染入侵呼吸道过程,本研究进一步解析SPLUNC1负调控CXCL8表达的机制。结果表明:无论是SPLUNC1和Mhp体外孵育,还是SPLUNC1抗体体内封闭,Mhp的体内外生长均未受影响;SPLUNC1的过表达或siRNA干扰对Mhp体外黏附PBECs的能力也无显著影响;过表达SPLUNC1可抑制pERK和IκBα的激活,相反SPLUNC1 siRNA干扰后,可促进pERK和IκBα的激活。以上研究证明SPLUNC1不是通过调控Mhp的生长和黏附,而是通过负调控MAPK-ERK通路的活化来调控CXCL8的表达。【结论】SPLUNC1可通过MAPK-ERK信号通路来调控炎性因子的过度表达,维护宿主炎性平衡;与此同时,Mhp感染后可通过抑制SPLUNC1的表达来破坏宿主炎性反应的平衡调控,进而引起炎性损伤。本研究为解析Mhp感染损伤机制提供依据。

绵羊肺炎支原体小鼠感染模型的建立

旨在探索小鼠作为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)实验室感染模型的可行性,筛选建立Mo感染小鼠模型的最佳方法。将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、Mo感染组1、感染组2、感染组3和感染组4(n=12)。Mo感染组1小鼠分别滴鼻30μL和腹腔注射25μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液各1次,Mo感染组2和3小鼠分别滴鼻2和3次30μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液,Mo感染组4小鼠喉头喷雾50μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液2次,对照组用正常培养基处理。分别于感染后第0、7和14天称量小鼠体重。感染后第14天处死所有小鼠,采集血液和肺组织。通过HE染色法进行肺组织病理学检查、剖检进行肺组织病理评分、qPCR方法检测肺组织中Mo的载荷量和ELISA检测血清Mo IgG水平,确定小鼠感染模型是否建立成功及最佳建立方法。Mo感染组2和组4中小鼠体重第14天时分别比对照组显著降低17.2%(P<0.05)和21.6%(P<0.05);感染第13天,感染组2和组4小鼠出现死亡;感染后第14天剖检,Mo感染组2和组4小鼠肺部有炎症,肺病变平均评分分别为3.5和3.3,均显著高于Mo感染组1(P<0.05)和组3(P<0.05),而对照组小鼠无病变;组织病理学检查发现,Mo感染组小鼠肺可见不同程度的间质性肺炎,肺泡腔内有炎细胞浸润;对照组小鼠肺组织结构正常、完整,肺泡内未见明显细胞浸润。小鼠肺组织中Mo DNA拷贝数在Mo感染组1和组3中分别为10^(2.56)和10^(3.21)拷贝·g^(-1);感染组2和组4分别为10^(3.84)和10^(3.77)拷贝·g^(-1),且显著高于Mo感染组1(P<0.05)和组3(P<0.05),对照组为阴性。小鼠血清Mo抗体OD_(450 nm)值在Mo感染组1、组2、组3和组4分别为0.63、1.05、0.81和0.99,均显著高于对照组(P<0.05),且组2和组4均显著高于1组(P<0.05)。本研究通过1×10^(8 )CCU·mL^(-1)的Mo NJ01株菌液滴鼻2次或喉头喷雾2次均可成功建立Mo感染小鼠模型。为绵羊肺炎支原体的致病机制及防治策略研究奠定基础。

支气管肺泡灌洗联合俯卧位治疗儿童肺炎支原体肺炎伴肺不张疗效的前瞻性随机对照研究

目的探讨支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage,BAL)联合俯卧位在儿童肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)伴肺不张中的疗效及对肺功能的影响。方法前瞻性选取2020年11月—2023年5月在内蒙古鄂尔多斯市中心医院住院治疗的94例MPP伴肺不张的患儿为研究对象,随机分为治疗组和对照组,每组各47例。治疗组在常规治疗及BAL基础上加以俯卧位治疗,对照组给予常规治疗及BAL。比较两组患儿发热、肺部体征、住院时间、肺复张和肺功能改善情况。结果治疗组肺部体征改善时间、住院时间短于对照组,住院第7天、出院当天及出院后1周肺复张有效率高于对照组(P<0.05)。治疗组出院当天及出院后1周用力肺活量占预测值百分比、第1秒用力呼气量占预测值百分比、第1秒用力呼气量/用力肺活量、用力呼出50%肺活量的呼气流量占预测值百分比、用力呼出75%肺活量的呼气流量占预测值百分比及最大呼气中期流量占预测值百分比均高于对照组(P<0.05)。两组患儿体温降至正常时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论BAL联合俯卧位在儿童MPP伴肺不张治疗中,有利于缩短肺部体征改善时间及住院时间,有利于肺复张和肺功能的改善。

猪肺炎支原体LAP的结构预测及其抑制剂Bestatin对支原体生长的影响

本研究旨在以猪肺炎支原体为代表,研究支原体LAP酶活中心的高级结构及其被抑制后对支原生长的影响。亮氨酸氨肽酶(LAP)是一类广泛存在于各类生物的氨基酸代谢酶,有研究表明病原微生物的LAP酶活中心被抑制后可以直接影响微生物的代谢和生长。本研究拟以猪肺炎支原体(Mhp)LAP为模型,研究其理化特性和高级结构,探索LAP抑制剂乌苯美司(Bestatin)对支原体生长的影响。本研究首先用Clustal Omega进行序列同源性比较,分析LAP活性位点在不同支原体中的保守情况。然后采用GST融合标签表达猪肺炎支原体LAP蛋白,通过GST亲和层析和分子筛层析纯化蛋白,圆二色谱测定LAP的二级结构,用Alpha fold 2预测三级结构。最后用Bestatin与猪、鸡、羊等不同种属的支原体共培养来观察其影响。结果表明虽然总体序列同源性不高,但是LAP酶活中心的关键位点在常见支原体相对保守。猪肺炎支原体LAP可以通过GST标签进行可溶性表达。酶切GST标签后,分子筛层析显示LAP是六聚体,圆二色谱表明LAP具有正确的二级结构。预测的LAP三级结构显示其具有保守的底物结合关键位点。Bestatin对不同种属支原体的生长均产生抑制,且呈现剂量依赖性,但在不同菌株间存在差异,最低在6μg/mL的浓度可通过抑制氨肽酶的活性抑制猪肺炎支原体的生长。该研究为新一代抗菌药物的研发提供了新的思路。

基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体TaqMan检测方法的建立及其遗传演化分析

热休克蛋白70 (heat shock protein 70,Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白,是机体内高度保守的生物分子,但在种间差异大,可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并进一步了解其遗传变异情况,本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征,设计特异性的引物及探针,建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定,并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示,建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri, Mmc)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp)、莱氏无胆甾原体(Acholeplasmalaidlawii, AL)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae, Maga)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, CP)、羊口疮病毒(orf virus, ORFV)、牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)等牛羊常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为5.72 copies·μL^(-1);重复性优,组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.4%和98.0%~100.0%;进一步分析发现,山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明,其均处于ClusterⅠA亚分支(均为山羊源)。综上,本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现,不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高;遗传演化分析证实,Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持,更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。

膳食模式与学龄期肺炎支原体肺炎患儿疾病复发的关系

目的:探讨学龄期肺炎支原体肺炎患儿膳食模式与疾病复发的关系。方法:选取2018年7月—2024年3月在本院确诊的学龄期肺炎支原体肺炎患儿160例,并定期在营养科进行营养咨询,均进行问卷调查、体格检查和实验室检测,采用因子分析提取膳食模式,采用多因素Logistic回归模型分析膳食模式与反复呼吸道感染的关系。结果:复发与未复发患儿在年龄、BMI、MP抗体阳性比例、用免疫增强剂比例、CD4+/CD8+、IgA方面比较,P<0.05,在性别、用抗过敏药比例、用锌剂比例、CD3+、IgG、IgM方面比较,P>0.05;高水平的肉食模式、高水平的素食模式与反复呼吸道感染复发相关,在调整混杂因素以后,高水平肉食模式是反复呼吸道感染复发的危险因素(OR=2.52,95%CI:1.17~5.21),同时高水平的素食模式是反复呼吸道感染复发的保护因素(OR=0.37,95%CI:0.19~0.86)。结论:学龄期肺炎支原体肺炎患儿的膳食模式与疾病复发之间存在着关联性,在学龄期肺炎支原体肺炎患儿的治疗和预防中,应当重视膳食的合理搭配和调节,尤其需要控制肉类的摄入量,适当增加蔬果、谷物、豆类等植物性食物的比例,以提高免疫力,降低呼吸道感染的风险。

小儿难治性支原体肺炎患儿免疫学水平对预后的影响

目的探讨小儿难治性支原体肺炎患儿免疫学水平对预后的影响。方法回顾性选择2021年6月至2022年4月福建省龙岩市第二医院收治的57例小儿难治性支原体肺炎患儿为研究对象,根据治疗预后分为预后良好组(n=46)和预后差组(n=11)。比较两组细胞免疫、体液免疫、白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)水平,采用多因素logistic回归分析小儿难治性支原体肺炎患儿免疫学水平对预后的影响。结果预后良好组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均高于预后差组,CD8^(+)、免疫球蛋白(Ig)G、IgE、IgA、WBC和CRP均低于预后差组,差异有统计学意义(P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示,CD4^(+)(OR=3.582,95%CI=2.482~6.313)、CD4^(+)/CD8^(+)(OR=6.413,95%CI=5.682~8.452)、CD8^(+)(OR=4.083,95%CI=3.235~4.572)、IgG(OR=1.034,95%CI=0.283~4.394)、IgE(OR=1.593,95%CI=1.241~1.786)、IgA(OR=1.246,95%CI=0.987~1.583)、WBC(OR=1.692,95%CI=1.212~1.889)、CRP(OR=1.326,95%CI=1.021~1.984)均为小儿难治性支原体肺炎患儿预后的免疫水平因素(P<0.05)。结论细胞免疫与体液免疫在难治性支原体肺炎患儿中表达异常,能预测患儿治疗预后,可为临床诊疗提供参考依据。

槐杞黄颗粒联合甲泼尼龙琥珀酸钠对肺炎支原体感染致大叶性肺炎患儿临床症状、炎症因子及免疫功能的影响

目的:观察槐杞黄颗粒联合甲泼尼龙琥珀酸钠对肺炎支原体感染致大叶性肺炎患儿临床症状、炎症反应及免疫功能的影响。方法:选取2020年1月~2022年12月某院收治的150例肺炎支原体感染致大叶性肺炎患儿为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组75例。对照组在常规治疗基础上加用甲泼尼龙琥珀酸钠,观察组在对照组治疗基础上加用槐杞黄颗粒。比较两组患儿中医证候积分、炎症因子[高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、降钙素原(PCT)、白细胞介素-17(IL-17)、IL-35]、免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、临床症状(发热、咳喘、肺部阴影)改善时间以及临床疗效。结果:治疗前,两组中医证候积分比较无统计学差异(P>0.05);治疗后,两组中医证候主症积分、次症积分和总积分均降低,且观察组各项积分均低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组HMGB1、PCT、IL-17、IL-35等炎症因子水平比较均无统计学差异(P>0.05);治疗后,两组HMGB1、PCT、IL-17均降低,IL-35均升高(P<0.05),且观察组HMGB1、PCT、IL-17低于对照组,IL-35高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)比较无统计学差异(P>0.05);治疗后,两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均升高,且观察组各指标高于对照组(P<0.05)。观察组退热、咳喘消失、肺部阴影消失时间均短于对照组(P<0.05),且临床治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。结论:槐杞黄颗粒联合甲泼尼龙琥珀酸钠可有效减轻肺炎支原体感染致大叶性肺炎患儿的炎症反应,提高免疫功能,加快临床症状的改善和消失。

绵羊支原体肺炎病原巢式PCR检测方法的建立与应用

[目的]建立一种诊断绵羊支原体肺炎病原的巢式PCR方法,确定肺炎支原体感染的靶器官。[方法]根据GenBank网站上登录的绵羊支原体16S rRNA基因序列,设计并合成2对引物,以肺炎支原体菌株基因组DNA为模板,经过PCR反应条件的优化,通过测序验证扩增产物的正确性,建立了绵羊支原体肺炎病原的巢式PCR检测方法,进而应用建立的方法完成临床阳性病料肺脏、肺淋巴、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、皮肤、小肠和外周血检测以及疑似样本肺脏组织的检测。[结果]建立的巢式PCR方法可扩增出864 bp的特异性目的片段,肺脏和肺淋巴为绵羊肺炎支原体感染的靶器官,临床样本巢式PCR检出率与支原体培养鉴定结果的符合率为100%。[结论]建立的绵羊支原体肺炎病原巢式PCR检测方法可用于临床样本的实验室诊断。

儿童重症肺炎支原体肺炎危险因素的Meta分析

背景近年来,儿童肺炎支原体肺炎的发病率持续上升,重症肺炎支原体肺炎的发病人数也相应升高,引起了临床医师的广泛关注。了解与重症肺炎支原体肺炎相关的危险因素,以判断患儿病情的严重程度、预防重症发生和减少后遗症,一直是研究的热点。虽然已经有许多关于重症肺炎支原体肺炎危险因素的研究,但这些研究在时间和地理区域上存在差异,因此需要进行系统综述及分析以对其进行全面了解。目的系统评价重症肺炎支原体肺炎的危险因素。方法计算机检索中国知网(CNKI)、万方数据知识服务平台(Wanfang Data)、维普网(VIP)、中国生物医学文献数据库(CBM)、独秀学术搜索数据库(Duxiu)、中华医学期刊全文数据库(Yiigle)、Cochrane Library、PubMed、Embase、Web of Science、Science Direct和BioMed Central,检索涉及儿童重症肺炎支原体肺炎危险因素的相关研究,检索时限均从建库至2023年8月。由2位研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,采用Stata 14.0和RevMan 5.4软件进行Meta分析。结果共纳入22个研究,均为回顾性病例对照研究,包括4531例患儿。Meta分析结果显示,C反应蛋白(CRP)(OR=1.92,95%CI=1.72~2.15,P<0.00001)、红细胞沉降率(ESR)(OR=2.61,95%CI=2.12~3.22,P<0.00001)、降钙素原(PCT)(OR=2.60,95%CI=1.43~4.75,P=0.002)、D-二聚体(OR=4.36,95%CI=2.93~6.50,P<0.00001)、白细胞计数(WBC)(OR=1.98,95%CI=1.66~2.36,P<0.00001)、肺下叶病变(OR=5.70,95%CI=3.48~9.35,P<0.00001)、肺大片状病变(OR=6.37,95%CI=4.09~9.92,P<0.00001)、高肺炎支原体抗体滴度(OR=2.83,95%CI=1.78~4.49,P<0.0001)、乳酸脱氢酶(LDH)(OR=1.03,95%CI=1.00~1.05,P=0.05)、发热时间(OR=8.33,95%CI=3.38~20.56,P<0.00001)是儿童重症肺炎支原体肺炎的影响因素。结论炎性标志物(CRP、ESR、PCT、LDH、WBC)的升高、出现影像学特征性改变(大片状实变、下叶病变)、高肺炎支原体抗体滴度、D-二聚体升高以及发热时间延长可能为儿童重症肺炎支原体肺炎的危险因素。未来需要更高质量的研究来进一步探讨其他临床、影像学和实验室结果与儿童重症肺炎支原体肺炎之间的关系,并基于发现的危险因素建立预后模型。