妇幼儿肺炎菌株治疗的用药分析

目的探讨我院妇幼儿肺炎常见致病菌分布及诊治方案的选择,为临床更有效治疗妇幼儿肺炎提供相应的指导。方法选取2018年1月至2019年1月来我院就诊的121例小儿肺炎患儿以及76例成年女性肺炎患者(包含孕妇和哺乳期妇女),以送检的痰标本中分离致病菌和药物敏感性试验作为基本资料进行评估、分析。结果痰标本培养液中中共分离出病菌9种,380例。其中,革兰阴性菌287例(75.57%),革兰性阳性菌93例(24.53%)。其菌株分离率肺炎克雷伯菌最高,共115株,占30.26%,其次是大肠埃希菌,有108株,占28.42%,其他有金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等,分别为75株(19.73%)和51株(13.42%)。在药物敏感性试验中,各抗菌药物的敏感度最高的为阿米卡星、环丙沙星,对头孢克洛、头袍曲松的敏感度最低。结论妇幼儿肺炎常用抗菌药物均产生了一定程度的耐药性,临床用抗生素要针对性、合理用药,防止滥用。

猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株的分离鉴定及耐药性研究

为了确定引起2018年5月江苏泰州某规模化养猪场育肥猪发病死亡的病原,本试验无菌采取病死猪肺脏组织,通过病原分离培养、染色观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,随后对分离菌株进行致病性和耐药性试验。结果显示,该分离菌株在病原分离培养过程中,需在含有NAD的培养基中才能生长;该分离菌通过革兰氏染色,显微镜观察细菌呈红色,可判定新分离的菌株为革兰氏阴性菌;根据生化试验和PCR结果可判定该分离菌株为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌;PCR血清型分型结果显示,分离菌株为猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株;小鼠毒力试验结果显示,当分离株菌液浓度达到3×10^8 CFU/mL时便可引起BALB/c小鼠死亡,浓度为2×10^9 CFU/mL时对BALB/c小鼠的致死率达到100%,表明该分离菌株对BALB/c小鼠有较强的致病力及致死性;药敏试验结果表明,该分离菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、氨曲南、头孢吡肟、头孢曲松、氧氟沙星等14种抗菌药物高度敏感,对氨苄西林中度敏感,对链霉素耐药。综合以上试验结果表明该猪场存在猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株感染情况。

沙眼衣原体小鼠肺炎菌株呼吸道感染诱导肺泡巨噬细胞和肺间质巨噬细胞浸润并极化

目的探讨沙眼衣原体呼吸道感染对肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)和肺间质巨噬细胞(interstitial macrophages,IMs)浸润并向M1型或M2型极化的影响。方法C57BL/6小鼠以鼻腔吸入沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm)建立小鼠沙眼衣原体呼吸道感染模型。采用流式细胞术检测Cm呼吸道感染后0 d、3 d、7 d、14 d肺组织中AMs(CD45^(+)F4/80^(+)CD11c^(+))和IMs(CD45^(+)F4/80^(+)CD11c-)比例并分析细胞数目,同时检测AMs和IMs中M1型巨噬细胞(CD80^(+)、CD86^(+)、MHCⅡ^(+)、iNOS^(+)细胞)比例和M2型巨噬细胞(CD206^(+)、Arg1^(+)细胞)比例。结果(1)Cm呼吸道感染诱导AMs和IMs浸润,与未感染组(0 d)比较,感染后3 d AMs和IMs比例和数目显著增加(P<0.05和P<0.01),感染后7 d AMs和IMs数目均达峰值(P<0.001)。(2)与未感染组比较,感染后3 d AMs中CD80^(+)和CD86^(+)细胞比例明显升高(P<0.05和P<0.01);AMs中MHCⅡ^(+)细胞比例在感染后持续升高,于14 d达峰值(P<0.05),CD206^(+)细胞比例在感染后持续降低(P<0.05)。(3)与未感染组比较,感染后3 d IMs中CD80^(+)和CD86^(+)细胞比例显著升高(P<0.05和P<0.001),感染后14 d MHCⅡ^(+)细胞比例明显升高(P<0.01),CD206^(+)细胞比例变化差异无统计学意义。(4)AMs中iNOS^(+)细胞比例在感染后持续升高(P<0.01);AMs中Arg1^(+)细胞比例在感染后持续降低,与未感染组比较,感染后7 d和14 d显著降低(P<0.05)。IMs中iNOS^(+)细胞比例于感染后7 d达峰值(P<0.001),IMs中Arg1^(+)细胞比例变化差异无统计学意义。结论Cm呼吸道感染诱导AMs和IMs浸润并刺激AMs和IMs向M1型巨噬细胞极化,减弱AMs中M2型巨噬细胞极化水平,而对IMs中M2型巨噬细胞极化无显著影响。

肺炎克雷伯氏菌环境菌株血清型及对玉米的致病性测定

【目的】检测肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae,KP)环境菌株对玉米的致病性及其与医院常见血清型的关联性。【方法】从环境中取地表水和土壤样品,利用克雷伯氏菌分离培养基(麦康凯肌醇阿东醇羧苄青霉素培养基,MIAC)获得克雷伯氏菌属菌株;通过革兰氏染色、形态学观察、生理生化鉴定和16S rRNA基因序列分析进一步鉴定样品中的KP菌株;以PCR扩增医院常见KP血清型基因条带;用常规接种法检测分离到的KP环境菌株对玉米的致病性。【结果】从栽培草莓的土壤表面分离到1株KP环境菌株E23。该菌株不属于医院常见血清型,但在人工接种条件下能引起玉米顶腐症状。【结论】不同来源的肺炎克雷伯氏菌具有导致易感寄主发病的能力,这一结果可为其跨界侵染机制的研究提供基础。

TLR2、TLR4及MyD88高表达与Cm呼吸道感染肺组织炎症相关

目的:探讨沙眼衣原体呼吸道感染过程中C3H/HeN(C3H)小鼠过度炎症反应的机制。方法:C3H与C57BL/6(C57)小鼠鼻腔吸入1×10~3IFU沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型,使用RT-PCR检测感染后不同时间点小鼠肺组织Toll样受体TLR2、TLR4及转导蛋白MyD88 mRNA的表达。结果:使用1×10~3IFU的Cm呼吸道感染C3H与C57BL/6(C57)诱导小鼠衣原体肺炎,Cm感染在高易感性的C3H小鼠及低易感的C57小鼠均诱导Toll样受体的表达,但在感染后第7天及第14天,高易感的C3H小鼠肺组织中TLR2和TLR4 mRNA的表达均显著高于C57小鼠,尤其TLR2(P<0.001或P<0.05),进一步研究发现Cm呼吸道感染C3H小鼠肺组织My D88mRNA的表达也显著高于C57小鼠,并在感染后第14天仍维持高表达。结论:Cm呼吸道感染诱导TLR2、TLR4及MyD88在高易感的C3H小鼠肺组织高表达,可能与C3H小鼠肺组织过度炎症反应相关。

小鼠沙眼衣原体肺感染过程中Treg细胞与Th17反应关系

【目的】对沙眼衣原体在BALB/c小鼠肺部感染过程中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)与Th17反应关系进行初步探讨。【方法】取6-8周龄的BALB/c小鼠,鼻腔吸入25μL含5×103IFU的沙眼衣原体鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺感染模型。监测感染后不同时期小鼠体重变化;检测肺组织衣原体包涵体形成单位(IFU)及肺组织病理改变;利用流式细胞术检测Cm感染后小鼠体内Treg细胞百分率;ELISA检测肺组织上清液IL-6、TGF-β、IL-17、IL-2细胞因子的的表达;qRT-PCR检测KC(keratinocyte derived chemokine)mRNA和MIP-2(macrophage inflammatory protein-2)mRNA的表达差异。【结果】用5xl03IFU Cm经鼻腔吸入感染后小鼠发生沙眼衣原体肺炎,表现为体重下降、肺组织大量炎症细胞浸润并可检测到衣原体繁殖。Cm感染后第3天,小鼠体内Treg细胞占CD4+T细胞的百分比明显降,随后开始恢复,第7天恢复原来水平,一直持续到衣原体清除。TGF-β、IL-2的表达与Treg细胞动态变化一致。与Th17相关细胞因子IL-6、IL-17和Th17相关趋化因子KC、MIP-2的表达于第3天开始升高,至第7天达到最高水平,随后逐渐减少。【结论】在衣原体感染BALB/c小鼠过程中,Treg可能通过提供TGF-β并在IL-6帮助下促进Th17应答产生。

产生IL-17的γδT细胞在沙眼衣原体呼吸道感染早期促进中性粒细胞的募集

目的探讨沙眼衣原体呼吸道感染早期产生IL-17的γδT细胞对中性粒细胞募集的影响及其机制。方法WT（C57BL/6）与TCRδ－/－小鼠鼻腔吸入3×103 IFU（inclusion-forming units）沙眼衣原体小鼠肺炎菌株（Chlamydia muridarum, Cm），建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型。分离感染不同时间点小鼠肺组织单个核细胞，流式细胞术检测肺组织CD11b＋Gr1＋中性粒细胞（PMN）百分率；细胞内因子染色检测γδT细胞IL-17的合成；RT-PCR检测小鼠肺组织IL-17及KC（中性粒细胞趋化因子）、IL-6 mRNA表达。结果一定剂量的Cm呼吸道感染诱导小鼠肺组织γδT细胞分泌大量IL-17，与未感染组比较，感染后第3天小鼠肺组织CD3＋ γδT＋细胞分泌的IL-17显著增加（P〈0.001），并且持续到感染的第7天（P〈0.05）；TCRδ－/－小鼠Cm呼吸道感染后第3天肺组织IL-17 mRNA的表达以及PMN百分率显著低于WT鼠；进一步研究显示TCRδ－/－小鼠在感染后第3天及第7天中性粒细胞趋化因子KC和IL-6在小鼠肺组织的表达显著降低。结论产生大量IL-17的γδT细胞可能通过上调KC和IL-6的表达在沙眼衣原体呼吸道感染中发挥PMN募集作用。