肺炎衣原体主要外膜蛋白重组抗原制备与应用的研究

目的:为了研究肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae,Cpn)抗原作为特异性诊断试剂,本文应用重组技术研制Cpn主要外膜蛋白(major outer membrane protein,MOMP)重组抗原,用于血清IgG抗体的检测。方法:通过构建和表达CpnMOMP重组抗原,应用包涵体纯化法纯化重组抗原后建立ELISA试验,并检测了82份正常人血清及临床标本207份,其中心血管疾病血清118份,呼吸系统疾病血清59份,其他疾病30份。结果:应用克隆技术,获得纯化的Cpn MOMP重组抗原。用重组抗原检测血清IgG,正常人血清阳性检出率仅为3.7%;而207份病人血清,116份为阳性,总阳性率56.0%。其中心血管疾病血清118份,阳性69份,阳性率58.5%;呼吸系统疾病血清59份,阳性38份,阳性率64.4%;其他疾病患者30份,阳性9份,阳性率仅30.0%。结论:与进口ELISA试剂盒相比阳性率基本相符,统计分析无显著意义,但重组MOMP蛋白的抗原特异性较高,且具有抗原制备较为方便和价廉等特点。由于临床标本数量有限,尚需进一步探索MOMP重组抗原作为Cpn感染疾病的辅助诊断。

肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白的克隆表达与抗原性研究

肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白是其特征抗原之一。实验中通过PCR方法从肺炎嗜衣原体基因组中扩增主要外膜蛋白基因,插入pET32a(+)表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,得到表达56kD融合蛋白的工程菌株。该菌株的表达量可达53%,提纯后的主要外膜蛋白纯度可达90%以上,在Western Blotting试验和胶体金免疫层析试验中显示了良好的抗原性。

肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白基因片段在大肠杆菌中的表达与鉴定

表达肺炎嗜衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)主要外膜蛋白(MOMP)的可变区VD2-VD3区,纯化产物并进行免疫活性分析,为探索重组蛋白在肺炎嗜衣原体血清学诊断中的应用提供资料.应用聚合酶联反应(PCR)技术,从肺炎嗜衣原体标准株AR-39的MOMP上扩增出抗原优势表位VD2-VD3区,将目的片段定向插入pET-30a载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并以Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物并行western-blot鉴定.成功构建了pET-30a-MOMPVD2-VD3的原核表达系统,表达并纯化出相对分子质量(Mr)为24×103Da的重组蛋白.Western-blot证实重组蛋白能与Cpn MOMP多克隆抗体发生特异性反应.肺炎嗜衣原体的MOMPVD2-VD3基因可以在大肠杆菌中得到表达,其表达产物能与相应的抗体结合,为肺炎嗜衣原体诊断候选抗原的研究奠定了基础.图4,参9.

冠心病经皮冠状动脉介入术治疗前后患者血清肺炎衣原体抗体IgA、超敏C-反应蛋白、血管生成素-2变化及预后预测价值研究

目的:探讨冠心病(CHD)经皮冠状动脉介入术治疗前后患者血清肺炎衣原体抗体IgA(CP-IgA)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)及血管生成素-2(Ang-2)变化及预后预测价值。方法:选取CHD患者135例为观察组,根据患者预后情况分为预后良好组(119例)及预后不良组(16例)。另选取同期体检健康者135例为对照组。比较观察组和对照组、观察组PCI前后以及两个亚组血清CP-IgA、hs-CRP及Ang-2水平。分析血清CP-IgA、hs-CRP及Ang-2与PCI术后CHD患者预后的相关性。分析血清CP-IgA、 hs-CRP及Ang-2对PCI术后CHD患者预后的预测价值。结果:观察组血清CP-IgA、hs-CRP及Ang-2水平高于对照组(均P<0.05)。观察组患者PCI术后血清CP-IgA及Ang-2水平较PCI术前降低,血清hs-CRP水平较PCI术前升高(均P<0.05)。预后良好组患者血清CP-IgA、hs-CRP及Ang-2水平低于预后不良组(均P<0.05)。血清CP-IgA、hs-CRP及Ang-2与PCI术后CHD患者预后呈正相关(均P<0.05)。血清CP-IgA、hs-CRP及Ang-2单独预测PCI术后CHD患者预后的曲线下面积(AUC)小于三项联合(均P<0.05)。结论:CHD患者血清CP-IgA、hs-CRP及Ang-2水平升高,PCI术后血清CP-IgA和Ang-2水平降低,hs-CRP水平升高。预后不良患者血清CP-IgA、hs-CRP及Ang-2水平升高,且三者联合对PCI术后CHD患者预后的预测价值较高。

鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白免疫肉鸡效果观察

利用鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白 (MOMP)在大肠杆菌中的表达产物 ,纯化后与白油佐剂乳化成疫苗。对 3批疫苗物理性状、无菌试验、安全试验、最小保护剂量、效力检验、免疫期、保存期和田间试验等各项技术指标进行了测定。重组MOMP疫苗为乳白色油包水型疫苗 ,黏度为 8s·0 4mL-1;细菌培养阴性 ;10d肉鸡分别以5 0和 10 0 μg注射免疫后 ,观察 14d ,免疫鸡群除一过性发蔫外 ,临床采食、饮水 ,注射部位剖检无异常变化 ;以 2 5 ,5 0 ,10 0和 2 0 0 μg分别免疫肉鸡后 ,30d龄攻毒 ,发现 5 0 μg免疫组可以抵抗病原的攻击 ;选择每只 5 0 μg免疫肉鸡 ,分别在 4 0 ,5 0和 6 0d攻毒 ,其保护率分别为 94 % ,95 %和 84 %。疫苗 2～ 8℃可储存 2 4 0d ,室温 ( 2 1～ 2 5℃ )、37℃不要超过 30d ;利用本疫苗免疫肉鸡 4 0 0 0 0只 ,保护率达 93% ,对照组为 85 %。本疫苗安全性高、保护率高、无副作用 ,能有效控制鹦鹉热衣原体的侵害。

重组鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白的抗原性研究

构建了鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白的原核表达载体 ,并对其进行了诱导表达 ,经过纯化 ,复性 ,获得了重组蛋白 .用Westen blotting和胶体金方法检测 ,此蛋白具有衣原体的免疫原性 .经兔免疫接种实验 ,获得了多抗血清 ,用ELISA方法检测 ,其抗体滴度为 1 :2 0 0

E血清型沙眼衣原体主要外膜蛋白B细胞表位的预测

基于E血清型沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，CT）主要外膜蛋白（Major outer membrane protein，MOMP）氨基酸序列，采用Hopp-Woods的亲水性方案、Emini表面可及性方案、Jameson-Wolf抗原指数方案和Janin可及性方案等，辅以对MOMP蛋白的二级结构中的柔性区域及跨膜区域的分析，预测CTMOMP蛋白的B细胞表位。推测最有可能的B细胞表位位于MOMP蛋白N端第73～81区段、217～225区段、第377～386区段、第261～270区段和第161～175区段内或它们的附近。用多参数预测CTMOMP蛋白的B细胞表位，为进一步研究蛋白特性及表位疫苗研制奠定了基础。

10株鹦鹉热衣原体菌株主要外膜蛋白基因的比较性研究

目的 进行比较性研究了 10株鹦鹉热衣原体菌株 ,分析其主要外膜蛋白 (MOMP)基因的限制性内切酶图谱和基因同源性。方法 接种鸡胚卵黄囊对菌株进行培养 ,收集培养物 ,通过聚合酶链式反应 ,扩增了 10株Cps的主要外膜蛋白基因 ,获得 10 5 8bp的片段 ,根据限制性片段长度多态性 (RFLPs)技术 ,利用AluⅠ酶切此片段 ,获得其限制性图谱。将此片段连入 pGEMT载体 ,进行基因测序。 结果 有 5株菌的MOMP基因完全相同 ,将它们与其它 5株比较 ,仅有个别碱基不同。

沙眼衣原体主要外膜蛋白生物信息学分析

目的:分析和预测E血清型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)的结构和功能。方法:采用计算机辅助生物软件和网络数据库,从SwissProt蛋白质数据库中检索MOMP氨基酸序列,用Expasy服务器分析预测MOMP蛋白理化性质、二级结构,同时用Pcons服务器分析模拟蛋白质空间结构。结果:分析显示,Ct MOMP蛋白为一跨膜16次的酸性蛋白质,其空间结构为β-桶状膜蛋白,推测其功能为孔蛋白。结论:通过对MOMP生物信息学分析获得该蛋白的特性,为进一步研究Ct的感染与发病机制、研制Ct亚单位疫苗以及研究MOMP新的功能域等提供理论依据。

鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白基因序列的扩增、克隆和原核表达

主要外膜蛋白在鹦鹉热衣原体感染过程中起主要作用。扩增了主要外膜蛋白基因 ,克隆入 pGEM T和pET32a(+) ,经PCR筛选和酶切鉴定 ,进行诱导表达和重组蛋白的纯化与复性研究 。

鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白诱导肉鸡免疫应答观察

用鹦鹉热衣原体 (Chlamydiapsittaci,Cps)重组主要外膜蛋白 (RecombinentMajorOuter Membraneprotein ,r MOMP)制作成油佐剂疫苗 ,经颈部皮下免疫 5d肉鸡。在免疫前 1d、免疫后 14d、2 1d和 30d分别翅静脉采血 ,以常规血凝抑制试验检测抗体效价 ;用MTT法检测全血淋巴细胞对r MOMP的特异性增殖反应 ;免疫 30d使用鹦鹉热衣原体强毒株(BJF5株 )攻毒 ,观察临床症状 ,计算病变程度和保护率。结果表明免疫 14d后产生抗体 ,效价达 4 .2 (log2 ) ,免疫后 30d效价达到 5 .0 (log2 ) ;免疫组血液T淋巴细胞对r MOMP的增殖指数明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。试验表明r MOMP在肉鸡体内可诱导对Cps特异性的体液免疫和细胞免疫应答 ,并能抵抗Cps强毒的攻击 ,显示r MOMP免疫肉鸡具有良好的免疫原性和保护性。

鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白诱导小鼠免疫应答的观察

用鹦鹉热衣原体 (Chlamydiapsittaci,Cps)重组主要外膜蛋白 (RecombinantMajorOuter Membraneprotein ,r MOMP)免疫小鼠 ,观察小鼠免疫后对r MOMP和Cps菌体蛋白的免疫应答。r MOMP皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,对照组仅注射佐剂。免疫前和第 3次免疫后 10d收集血清 ,以常规ELISA法检测抗体效价 ;MTT方法检测脾淋巴细胞对r MOMP和Cps菌体蛋白的特异性增殖反应。免疫组小鼠在免疫 38d后免疫血清中抗r MOMP的抗体效价可达 1∶2× 10 4,抗Cps菌体蛋白的抗体效价为 1∶4× 10 3 ;脾淋巴细胞对r MOMP和Cps菌体蛋白的增殖指数明显高于佐剂对照组 (p <0 .0 1,具有显著性意义。r MOMP在小鼠体内可诱导Cps特异性的体液免疫和细胞免疫应答 。

沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位免疫血清中和活性分析

目的:制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性。方法:纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后2周取血,采用ELISA法检测血清融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体水平及变化趋势,通过体外中和反应检测多表位特异性血清的免疫学特性。结果:小鼠用Ct MOMP168多表位融合蛋白全程免疫后产生了抗融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体,ELISA法检测最高滴度达1:500。ELISA和体外中和实验检测结果显示,该抗体能特异性识别MOMP多表位蛋白和E型Ct全菌体,并能有效抑制E型Ct感染Hela229细胞。结论:沙眼衣原体MOMP多表位融合蛋白免疫血清可特异性结合并中和E型Ct。

沙眼衣原体主要外膜蛋白_(21-387)的原核表达及其免疫原性

目的:探讨沙眼衣原体(Ct)E血清型主要外膜蛋白(MOMP21-387)的原核表达及其免疫原性。方法:利用PCR方法扩增Ct E血清型MOMP第21至第387氨基酸的基因序列,克隆至p ET21a(+)原核表达载体构建重组质粒p ET21a(+)/MOMP21-387,并进行原核表达和纯化,经SDS-PAGE和Western blot法分析鉴定后,通过BALB/c小鼠免疫检测MOMP21-387蛋白的免疫原性,即通过ELISA法检测小鼠血清Ig G和生殖道分泌物Ig A抗体反应,乳酸脱氢酶(LDH)法检测其脾细胞的特异性杀伤作用。结果:在原核表达系统成功表达了MOMP21-387融合蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法鉴定在相对分子质量(Mr)约44 000处出现特异性条带;并经NiNTA亲和层析的方法获得了纯化的MOMP21-387融合蛋白,免疫BALB/c小鼠可诱导产生特异性血清Ig G抗体和生殖道分泌物Ig A抗体,至第6周达到高峰,MOMP21-387组的Ig G和Ig A抗体较PBS组差异均有统计学意义(P<0.05);LDH检测结果显示,MOMP21-387组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率,在10:1、20:1和40:1和80:1时均明显高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ct E型MOMP21-387融合蛋白具有良好的免疫原性,为基于MOMP21-387的Ct的ELISA法检测方法的开发和疫苗研究奠定了基础。

衣原体主要外膜蛋白的研究进展

衣原体感染与多种慢性疾病密切相关,其主要外膜蛋白(MOMP)是一种多功能蛋白,分别与外膜结构的稳定性、生长代谢调节、抗原性和毒力密切相关。随着沙眼衣原体和肺炎衣原体基因组测序的完成,人们得以揭示其重要的生物合成、代谢途径,确定调控机制及其与致病的相关性。利用分子生物学技术在分子水平分析衣原体主要外膜蛋白的结构、抗原表位,对于免疫防御、免疫病理和免疫诊断均有重要意义。本文综述了衣原体主要外膜蛋白的分子结构、基因特性、抗原表位与应用前景。

衣原体主要外膜蛋白的研究现状

衣原体主要外膜蛋白作为外膜复合物中的主要成分,与衣原体致病密切相关.该蛋白是一种跨膜蛋白,为衣原体引起机体免疫应答的重要免疫原,并为衣原体菌株进化及分类提供相关依据.因此,探讨衣原体主要外膜蛋白的结构与功能将有助于对衣原体致病机制及其诊断和预防等方面的研究.

沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原表位的研究进展

沙眼衣原体是人类生殖道感染的常见病原菌,其主要外膜蛋白具有较强的抗原性,是目前沙眼衣原体疫苗靶抗原的最佳选择。本文就沙眼衣原体主要外膜蛋白的CTL表位、Th细胞表位和B细胞表位的研究进展作一简要综述。

抗沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)单克隆抗体的制备及初步应用

制备抗沙眼衣原体(CT)单克隆抗体,建立沙眼衣原体的胶体金免疫层析快速检测方法。采用纯化沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)免疫Balb/c小鼠,选取高效价的免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,ELISA检测筛选分泌抗MOMP单克隆抗体(McAb)的细胞株并进行相关鉴定。共获得分泌IgG1,IgG2b和IgM的3株单克隆抗体杂交瘤细胞株。纯化的单克隆抗体与鹦鹉热衣原体、肺炎衣原体、肺炎支原体均无交叉反应。通过位点分析选择配对良好的两株McAb,制备检测CT的双抗体夹心法免疫层析试纸条。制备的胶体金试纸条对MOMP的最低检出值可达50 ng·mL-1。

鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白基因在原核细胞中高效表达的研究

鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci，Cps）是人兽共患病病原菌，传染性较强，耐受多种抗菌药物。研究表明，MOMP是Cps的主要结构蛋白，相对保守，具有很强的免疫原性和反应原性，并且不同来源的Cps MOMP基因具有较高的同源性。因此，MOMP基因具有极高的研究价值。试验构建了高效表达MOMP蛋白的原核表达载体系统，旨在为疫病诊断、试剂盒的包装和疫苗的研制提供科学依据和理论应用。

沙眼衣原体L2型主要外膜蛋白的原核表达及其抗原性分析

克隆表达沙眼衣原体(Ct)L2血清型的主要外膜蛋白(MOMP)基因,并鉴定重组MOMP(rMOMP)的抗原性,为进一步研究Ct感染的诊断和预防技术奠定基础。应用PCR技术对CtL2型标准株的MOMP基因进行特异性扩增,将扩增产物克隆入表达载体pET-32a(+),成功构建了rMOMP-pET-32a(+)表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后摇菌进行rMOMP的诱导表达、鉴定和纯化,免疫印迹和ELISA法分析显示rMOMP可与兔源抗CtL2多克隆抗体发生特异性反应,表明rMOMP具有良好的抗原性。