制备肺炎衣原体抗原片检测血清抗体

目的:探索肺炎衣原体抗原片检测血清抗体法在诊断Cpn感染中的实际应用前景。方法:应用进口肺炎衣原体(Cpn)毒株感染Hep-2细胞,分别以瑞氏-姬母萨染色、吖啶橙染色和直接免疫荧光染色等3种方法鉴定Cpn感染细胞。纯化获取大量Cpn抗原,用于制备斑点抗原片。建立微量免疫荧光染色法(MIF)检测血清抗体,诊断Cpn感染。结果:Cpn感染Hep-2细胞的最适条件是用含1μg/mL放线菌酮的维持液,在35℃、5%CO2孵箱中培养7d,并在培养的第0、3、4、5天以2600r/min离心1h,感染成功率极高。染色反应显示,瑞氏-姬母萨染色可将Cpn包涵体染成蓝紫色或红紫色;吖啶橙染色则使Cpn感染的Hep-2细胞呈现鲜明的橘红色;免疫荧光抗体染色后,在Cpn感染细胞内可见亮苹果绿色包涵体。通过斑点抗原荧光抗体染色的方法抽样检测了100份病人血清中的Cpn抗体,其中抗Cpn-IgG抗体的阳性血清共61份,阳性率为61%。与Cpn-外周血单核细胞(Cpn-PBMC)抗原片比较,阳性检出率无明显差别。结论:用Cpn感染细胞制作的Cpn斑点抗原片可用于临床检测血清Cpn-IgG抗体,且具有特异性、敏感性高的特点,但要求检测人员有一定的经验。

冠状动脉瘤组织中肺炎衣原体特异性抗原的表达

目的探讨肺炎衣原体特异性抗原(Cpn-Ag)表达与冠状动脉瘤之间的关系。方法采用自制肺炎衣原体单克隆抗体的直接微量免疫荧光法检测50例冠状动脉瘤标本和20例正常冠状动脉标本中Cpn-Ag的表达。结果冠状动脉瘤和正常冠状动脉标本中Cpn-Ag的阳性率分别是58.0%(29/50)和15.0%(3/20)。冠状动脉瘤标本中有大量Cpn-Ag沉积,分别位于外膜下及粥样硬化斑块内,而正常血管壁中仅有少量Cpn-Ag沉积,两者具有统计学差异(P<0.01)。结论Cpn-Ag在冠状动脉瘤外膜下有高表达率,Cpn可能是参与冠状动脉粥样硬化形成损害的原因之一。

外周血单核细胞中肺炎衣原体特异性抗原的检测

目的 :肺炎衣原体 (Cpn)特异性抗原检测方法的建立及其应用。方法 :分离人外周血单核细胞 (PBMC) ,用直接免疫荧光 (DIF)检测PBMC中的Cpn特异性抗原 ,同时用间接微量免疫荧光 (MIF)检测Cpn抗体。结果 :颈动脉粥样硬化病人和正常人PBMC中Cpn特异性抗原检出阳性率分别为 6 2 %和 30 % (P <0 .0 1) ;血浆中CpnIgG的检出阳性率分别为 72 %和2 8% ,P值 <0 .0 0 1;血浆中CpnIgM的检出阳性率分别为 16 %和 12 % (P值 >0 .0 5 )。结论 :PBMC中的Cpn特异性抗原和血浆中Cpn -IgG的高检出率均见于颈动脉粥样硬化病人 ,但抗原的检测具有更大的临床意义。

检测人动脉瘤组织中肺炎衣原体特异性抗原的临床意义

目的 :探讨肺炎衣原体 (Cpn)特异性抗原与动脉瘤的关系。方法 :利用直接免疫荧光 (IF)方法检测新鲜 -冰冻或福尔马林 -固定标本中Cpn特异性抗原的存在。结果 :新鲜 -冰冻标本中Cpn特异性抗原的阳性率是 :腹主动脉瘤组为 83.0 % (15 /18) ,正常血管组 12 .5 % (1/ 8) ,P <0 .0 1。此外 ,用IF方法检测了 40例档案保存的石蜡包埋冠状动脉瘤标本和正常血管组织切片 ,Cpn特异性抗原检出率分别是 :87.5 % (35 / 40 )和 0 (P <0 .0 0 1)。结论 :Cpn特异性抗原的高检出率见于人动脉瘤体组织中 ,推测Cpn引起的动脉粥样硬化可能是形成人动脉瘤的病因之一。

自制肺炎衣原体单克隆抗体检测其特异性抗原对动脉粥样硬化诊断的临床意义

目的探讨采用自制肺炎衣原体单克隆抗体(Cpn-McAb)检测人外周血单核细胞(PBMC)和冠状动脉瘤标本中肺炎衣原体特异性抗原(Cpn-Ag)的临床意义。方法采用自制Cpn-McAb的直接免疫荧光(DI)法检测颈动脉粥样硬化和健康体检者PBMC中Cpn-Ag及冠状动脉瘤和正常冠状动脉标本中Cpn-Ag的表达。结果颈动脉粥样硬化患者和健康体检者PBMC中Cpn-Ag检测结果间差异有显著性意义(P<0.01);粥样硬化冠状动脉瘤标本和正常冠状动脉标本外膜下和/或斑块内Cpn-Ag检测结果间差异有显著性意义(P<0.01)。冠状动脉瘤标本中有大量Cpn-Ag沉积,分别位于外膜下及粥样硬化斑块内,而正常血管壁中仅有少量沉积(P<0.05)。结论PBMC中的Cpn-Ag的检测可为诊治与该病原体相关的疾病提供依据;Cpn可能是动脉粥样硬化形成的原因之一。

人动脉粥样硬化斑块中肺炎衣原体特异性抗原的检测

目的 :探讨肺炎衣原体 (Cpn)特异性抗原与动脉瘤之间的关系。方法 :利用直接免疫荧光 (IF)方法检测新鲜 冰冻或福尔马林 固定标本中Cpn特异性抗原的存在。结果 :新鲜 冰冻标本中Cpn特异性抗原的检出率是 :腹主动脉瘤组为 83 0 % (1 5 1 8) ,正常血管组阴性 (P <0 0 1 )。此外 ,用IF方法检测了 40例档案保存的石蜡包埋冠状动脉瘤标本和正常血管组织切片 ,Cpn特异性抗原检出率分别是 :87 5 % (35 40 )和 0 (P <0 0 1 )。与此同时 ,检测了 1 5例高龄自然死亡者动脉粥样硬化标本 ,Cpn特异性抗原检出率只有 33 3 % (5 1 5)。结论 :Cpn特异性抗原的高检出率见于人动脉瘤体组织中 。

肺炎嗜衣原体诊断候选抗原的研究进展

肺炎嗜衣原体(Cpn)是二十世纪八十年代新发现的一种重要的呼吸系统感染的病原体,它不仅可以引起非典型肺炎,而且还有可能通过直接或间接的机制参与动脉粥样硬化的发生与发展,因而受到了人们越来越多的关注。近年来,Cpn感染的血清学诊断也成为人们关注的焦点之一,目前常用于诊断Cpn感染的抗原有全菌抗原、脂多糖和主要外膜蛋白等属特异性抗原。因此本文就Cpn感染诊断候选抗原的研究进展作一综述。

自制肺炎衣原体抗原的临床应用

目的:评估自制肺炎衣原体抗原(Chlamydia pneumoniae-antigen,Cpn-Ag)用于肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)感染的诊断价值。方法:采用Dot-ELISA法观察自制Cpn-Ag与进口Cpn-单克隆抗体(McAb)的结合反应。采用微量免疫荧光法,用自制Cpn-Ag和进口Cpn-Ag同时检测268例血浆标本的Cpn-IgA、IgG和IgM。结果:Dot-ELISA结果显示,自制Cpn-Ag可与McAb发生特异性结合反应。自制Cpn-Ag与进口Cpn-Ag检测血浆中Cpn-IgA、IgG、IgM抗体滴度的一致率均达90%以上;以进口Cpn-Ag检测为标准,自制Cpn-Ag检测灵敏度、特异度均在90%以上;阳性似然比均>10,阴性似然比均<0.1。配对卡方检验显示,自制Cpn-Ag与进口Cpn-Ag检测血浆Cpn-IgA、IgG、IgM的结果比较,差异无统计学意义(P>0.05);一致性检验显示,Kappa值>0.75,两者具有高度一致性。结论:采用自制Cpn-Ag检测血浆Cpn-IgA、IgG、IgM,具有较高的灵敏度和特异度,与采用进口Cpn-Ag的检测结果具有高度一致性。

肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白的克隆表达与抗原性研究

肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白是其特征抗原之一。实验中通过PCR方法从肺炎嗜衣原体基因组中扩增主要外膜蛋白基因,插入pET32a(+)表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,得到表达56kD融合蛋白的工程菌株。该菌株的表达量可达53%,提纯后的主要外膜蛋白纯度可达90%以上,在Western Blotting试验和胶体金免疫层析试验中显示了良好的抗原性。

肺炎衣原体ELISA抗原检测方法的建立和应用

目的采用ELISA技术,建立肺炎衣原体抗原检测方法。方法建立酶联免疫吸附法,检测标本中的肺炎衣原体。采用常见的呼吸道病原体进行特异检测。对来自本院的560份临床咽拭子样本和肺泡冲洗液样本进行检测。采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价。结果本方法对流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒无特异性反应。对本院的临床样本检出13份,其中咽拭子4份,肺泡冲洗液9份。结论本肺炎支原体抗原检测方法可用于肺炎衣原体感染的辅助诊断。

肺炎衣原体抗原研究进展

本文综述了肺炎衣原体抗原研究进展.肺炎衣原体抗原可分为3类:属特异性抗原,包括脂多糖(LPS)、热休克蛋白(hsp)和主要外膜蛋白(MOMP);种特异性抗原,包括98×103、76×103、53×103、46×103蛋白和43×103蛋白以及型特异性抗原.

沙眼衣原体鼠肺炎株外膜蛋白抗原特性的研究

用提纯的鼠肺炎株免疫Balb/C小鼠,建立了一株能分泌种特异单克隆抗体和一株能分泌型特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用电泳技术和兔疫印迹试验证实,所建立的种特异单克隆抗体可与各种沙眼衣原体血清型的外膜主蛋白(MOMP)抗原相反应,说明沙眼衣原体的种特异抗原决定簇位于各型MOMP上;而与型特异单克隆抗体有反应关系的型特异抗原决定簇只分布于鼠肺炎株的MOMP上。并用放射免疫法探讨了种特异单克隆抗体与鹦鹉热衣原体脑膜肺炎株外膜主蛋白抗原间的相互关系。

肺炎嗜衣原体三种不同抗原的临床诊断价值分析

目的探讨分析肺炎嗜衣原体三种不同抗原在肺炎嗜衣原体感染血清学中的临床诊断价值。方法选取2008年1月～2011年1月笔者所在医院188例经检测确诊为呼吸道感染的患者的血清标本,分别采取间接免疫印迹法(Western-blot)和ELISA法对其免疫反应和免疫原性进行分析,对比不同方法检出阳性率和准确率。结果 ELISA法对三种不同抗原的准确性分别为92.6%(174/188)、94.7%(178/188)、96.8%(182/188)。Cpn0146组的阳性率为38.8%(73/188),对比肺炎嗜衣原体的IgG试剂盒检出的阳性率,二者比较差异有统计学意义(P<0.05);Cpn0147的阳性率41.0%(77/188),对比肺炎嗜衣原体的IgG试剂盒检出的阳性率,二者比较差异有统计学意义(P<0.05);Cpn0308的阳性率41.5%(78/188),对比肺炎嗜衣原体的IgG试剂盒检出的阳性率,二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论三种不同抗原中,以Cpn0308在肺炎嗜衣原体感染血清学的诊断实验中的检出准确率与阳性率最高,对临床诊断肺炎嗜衣原体有良好的应用价值,值得研究利用。

肺炎嗜衣原体蛋白酶样活性因子免疫优势区基因重组蛋白在早期诊断中的应用

【目的】克隆和表达肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)蛋白酶样活性因子(CPAF)免疫优势区基因,评价重组蛋白在早期感染诊断中的应用价值。【方法】挑选并克隆出Cpn CPAF免疫优势区基因,构建原核表达载体,诱导表达并纯化重组蛋白,分析其抗原特异性;间接ELISA法检测Cpn参考血清、临床血清标本中的特异性IgM抗体,以及呼吸道感染患者痰咽拭子中的Cpn抗原;检测沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)临床阳性血清和泌尿生殖道分泌物。【结果】高效表达和纯化出一相对分子量约51.3kDa的重组蛋白;Westernblot证明其只与人抗Cpn抗血清发生特异性反应;间接ELISA法检测40份CpnIgM参考血清,阴性和阳性结果的一致率均为100%(40/40);与"金标准"方法MIF对照,检测300例临床血清标本中的IgM抗体,符合率为98.3%;与PCR试剂对照,检测120份呼吸道感染患者痰咽拭子中的Cpn抗原,符合率为88.3%;检测Ct阳性血清和泌尿生殖道分泌物,与Ct没有交叉反应。【结论】制备的CPAF免疫优势区基因重组蛋白具有良好的抗原性,在Cpn感染早期诊断中具有较高的利用价值。

肺癌与肺炎衣原体感染关系的研究

目的:研究肺炎衣原体(Cpn)和肺癌之间的关系。方法:采用间接微量免疫荧光法检测肺癌标本43例和非肺癌呼吸科病人19例肺组织中Cpn特异性抗原。结果:肺癌组Cpn抗原表达水平明显高于对照组:肺癌组中Cpn-Ag阳性率88.4%(38/ 43),对照组阳性率26.3%(5/19),p<0.0001。结论:肺癌患者易患Cpn感染,Cpn感染与肺癌有一定的关系,值得临床重视。

西安地区小儿肺炎衣原体下呼吸道感染病原检测及临床分析

【目的】 了解西安地区小儿肺炎衣原体下呼吸道感染的发病情况及特点。 【方法】 应用金标免疫斑点法检测了 14 1例住院的下呼吸道感染患儿肺炎衣原体IgM抗体 ,分析肺炎衣原体感染患儿的临床特点和治疗情况。 【结果】 在检测的 14 1例下呼吸道感染患儿中肺炎衣原体IgM阳性 2 7例 ( 19.2 8% ) ,其中以年龄 <3岁者 2 4例 ( 2 2 .2 2 % ) ,应用大环内酯类抗生素治疗有良好的效果 ,平均住院日为 ( 9.3 6± 2 .0 1)d。 【结论】 肺炎衣原体是小儿下呼吸道感染的常见病原之一 。

抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子单克隆抗体在冠状动脉硬化患者肺炎衣原体感染诊断中的初步应用

目的制备抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的单克隆抗体,检测冠状动脉硬化患者的外周血单核细胞和冠状动脉瘤斑块中肺炎衣原体特异性抗原。方法以肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白免疫小鼠,与SP2/0细胞融合后,采用间接ELISA和Western blot筛选阳性杂交瘤细胞,经亚克隆建株;小鼠体内诱生腹水法制备单克隆抗体,用硫酸铵沉淀法对腹水中的单克隆抗体进行纯化,测定其亚类和效价;检测肺炎衣原体标准株以鉴定其特异性。建立间接ELISA方法检测冠状动脉硬化患者外周血单核细胞和冠状动脉瘤斑块标本中的肺炎衣原体抗原。结果获得4株稳定分泌抗蛋白酶样活性因子重组蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为3F8、7B9、8C4和11B5,其效价分别为1∶28000、1∶16000、1∶38000和1∶12000;经亚类鉴定,3F8和7B9杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体为IgG2b,其它2株均为IgG1。以制备的单克隆抗体建立间接ELISA检测肺炎衣原体抗原,与经典PCR方法的检测结果比较,检出率具有较高的一致性。结论成功获得了抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的特异性单克隆抗体,能特异地识别天然肺炎衣原体蛋白酶样活性因子抗原,有望应用于冠状动脉硬化患者肺炎衣原体感染的抗原诊断。

用DNA探针检测肺炎衣原体

目的建立一种敏感而特异的肺炎衣原体分子生物学检测方法。方法用ＰＣＲ扩增约４６０ｂｐ的肺炎衣原体种特异性基因片段并标记成探针，建立ＤＮＡ探针杂交检测肺炎衣原体的方法。结果：探针只与肺炎衣原体ＡＲ－３９、ＶＲ１３１０株ＤＮＡ呈阳性杂交斑点，与肺炎衣原体ＡＲ－３９株全ＤＮＡＰｓｔＩ酶切片段在２．５ｋｂ处有一阳性杂交带，与其它两种衣原体、Ｑ热立克次体、嗜肺军团菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌ＤＮＡ斑点膜无阳性杂交信号。从１５２例有呼吸道疾患的住院病人鼻咽拭子和肺泡灌洗液中检出阳性１８例，阳性率１２％。结论本文建立的ＤＮＡ探针检测肺炎衣原体方法具有较高的敏感性和特异性，可用于批量临床标本的检测。