IFN-α2a-GFE-1融合基因的构建及表达

目的 构建IFN -α 2a -GFE - 1融合基因载体 ,检测其在转染细胞的表达 ,为肺癌基因导向药物治疗积累实验资料。方法 应用聚合酶链式反应技术 (PCR)对干扰素 (IFN) -α 2a羧基端的酶切位点进行改造 ,并人工合成肺特异性结合多肽CGFECVRQCPERC(GFE - 1)的寡核苷酸片段 ,二者连接后克隆入pGEM - 3zf质粒 ,连接产物转化感受态DH5α细胞 ,挑选阳性克隆经EcoRⅠ +PstⅠ酶切鉴定后测序 ,将测序正确的目的基因从测序载体相应酶切位点消化回收并纯化后 ,与上述酶处理过的PBV2 2 0质粒连接 ,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,经筛选后随机挑选阳性菌落 ,提取质粒酶切鉴定。结果 序列分析表明合成片段成功的插入IFN -α 2a羧基端 ,大小、位置、方向均正确无误 ;融合基因克隆入PBV 2 2 0表达载体在大肠杆菌中获得有效表达。结论 IFN -α 2a -GFE - 1融合基因载体的构建及表达 。