树突状细胞诱导的淋巴因子激活的杀伤细胞对肺癌细胞系A549的体外杀伤作用

目的:探讨负载肺癌抗原的树突状细胞(dendritic cells,DC)诱导淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞对肺癌细胞A549的杀伤作用。方法:采用肺癌患者外周血单个核细胞(PBMC)经rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-a诱导和肿瘤冻融抗原刺激诱导获得的DC与LAK细胞按1:20比例共培养2d,获得Ag-DC-LAK细胞作效应细胞,分别用Ag-Dc-LAK、DC-LAK、Ag-LAK和LAK对肺癌细胞系A549细胞进行杀伤实验。结果:以30μg/mL蛋白的肿瘤抗原负载的DC其表型CD1a、CD80、CD86、HLA-DR均显著升高(P<0.05),高于单纯细胞因子诱导成熟的DCs表型,由其刺激增殖的LAK细胞对肺癌细胞A549杀伤率为(71±5)%,明显高于对照组(P<0.05)。结论:经肿瘤抗原刺激诱导成熟的DC可有效传递抗原,增加T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。

克隆化人淋巴因子激活的杀伤细胞治疗晚期肺癌的临床疗效初探

自体LAK细胞和rhIL-2联台应用于化疗失败或不能耐受的晚期实体瘤病人，已取得了确切的疗效，但由于取血量大及大剂量应用IL-2的严重副反应，致使其应用受限，治疗中的死亡率高，而克隆化LAK细胞具有增殖力强，体外存活期长和长时间保存有效杀瘤活性的特点。我们自1991年开始应用军医科院采用半固体-液体两步法培养的克隆化自体LAK细胞治疗15例晚期肺癌病人，

粘附性淋巴因子激活杀伤细胞对肺癌治疗的实验研究

为探索高效的淋巴因子激活杀伤细胞(LAK细胞)的过继免疫疗法，作者参考国外经验．分离培养出一种粘附性淋巴因子激活杀伤细胞(A-LAK细胞)，观察其体外，体内的抗瘤作用，并与普通LAK细胞进行了比较。

负载抗原的DC及DC-CIK对小细胞肺癌杀伤作用的比较研究

目的探讨负载抗原的树突状细胞(Dendritic cells,DC)以及DC联合CIK细胞(cytokine induced killer cells)对小细胞肺癌细胞株NCIH-446的杀伤作用,为DC、CIK应用于小细胞肺癌的治疗提供实验数据。方法体外培养DC、CIK细胞,并将NCIH-446提取的抗原负载到DC,同时将DC与CIK联合培养,将负载抗原的DC(DC-Ag)及DC-CIK与NCI446按50∶1的比例进行杀伤活性实验,检测培养不同时间的两种细胞对NCIH-446的杀伤作用。结果 DC-Ag及DC-CIK在与NCIH-446CIK共同培养2个小时就监测到了两种细胞对NCIH-446的杀伤作用,而且随着时间的推移,杀伤作用逐渐增强,DC-Ag从2小时的57.63%提高到48小时的90.78%,而DC-CIK从62.95%提高到了91.57%,显示了两种细胞强大的杀伤作用,而且这种作用随着时间的延长效果越明显。结论负载抗原的DC及DC-CIK对小细胞肺癌细胞株NCIH-446有极强的杀伤活性,为临床小细胞肺癌的治疗提供了一种新的方法。

参一胶囊联合化疗对中晚期非小细胞肺癌患者近期疗效及血清NKG2D、IFN-γ、IL-2水平和T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨参一胶囊联合化疗对中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者近期疗效及对血清自然杀伤细胞活化受体(NKG)2D、干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2水平和T淋巴细胞亚群变化的影响。方法选择中晚期NSCLC患者82例,依据随机表法分为观察组41例与对照组41例。对照组采用化疗治疗,观察组在化疗基础上结合参一胶囊治疗。两组均以21 d为1个周期,化疗4个周期。比较两组近期疗效和生存质量改善情况,化疗前后血清NKG2D、IFN-γ、IL-2和T淋巴细胞亚群水平及毒副反应。结果观察组总有效率(73.17%)明显高于对照组(51.22%,P<0.05)。观察组生存质量改善率(82.93%)明显高于对照组(60.97%,P<0.05)。血清NKG2D、IFN-γ和IL-2水平比较,化疗后两组较化疗前明显升高,且观察组明显高于对照组(P<0.05)。CD3^+T淋巴细胞、CD4^+T淋巴细胞和CD4^+/CD8^+水平比较,化疗后观察组较化疗前明显升高,而对照组较化疗前明显下降(P<0.05);且化疗后观察组明显高于对照组(P<0.05)。各项毒副反应发生率比较,观察组均明显低于对照组(P<0.05)。结论参一胶囊联合化疗对中晚期NSCLC患者近期疗效明显,患者生存质量得以改善,血清NKG2D、IFN-γ、IL-2水平得以提高,免疫功能得以改善,且毒副反应较轻。

非小细胞肺癌患者外周血自然杀伤细胞受体表达及与肿瘤标志物的关系研究

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血自然杀伤(NK)细胞受体的表达及与肿瘤标志物的关系。方法收集122例NSCLC患者作为NSCLC组,选取同期46例健康体检者作为对照组,采集两组研究对象空腹外周静脉血,采用流式细胞仪检测外周血NK细胞受体[自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)、自然杀伤细胞活化性受体p30(NKp30)、自然杀伤细胞活化性受体p44(NKp44)、自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A)、CD158a、CD158b]表达,采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)]水平,并采用Pearson相关分析法分析NSCLC患者外周血NK细胞受体表达与肿瘤标志物的关系。结果NSCLC组患者NK细胞活化性受体NKG2D、NKp30、NKp44表达水平均明显低于对照组,抑制性受体NKG2A、CD158a、CD158b表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者NK细胞活化性受体NKG2D、NKp30、NKp44表达水平均明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者,抑制性受体NKG2A、CD158a、CD158b表达水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。NSCLC组患者血清肿瘤标志物CEA、CYFRA21-1、NSE水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Pearson相关性分析显示,NSCLC患者抑制性受体NKG2A表达与CEA水平呈正相关(P﹤0.05)。结论NSCLC患者外周血NK细胞活化性受体表达降低,抑制性受体表达升高,其中活化性受体表达与肿瘤标志物无相关性,抑制性受体NKG2A表达与肿瘤标志物CEA呈正相关。

LAK细胞/rIL-2疗法对晚期肺癌的治疗作用

用LAK细胞/rIL-2疗法治疗23例晚期肺癌患者。其中3例（13.0%）PR，7例（30.4％）MR，有效率达43,4%。腔内注入LAK细胞/rIL-2治疗肺癌癌性胸水10例，5例CR，5例PR癌性腹水4例，3例CR，1例PR；癌性心包积液2例，CR、PR各1例。23例除出现一过性发热、恶心等外未发现严重不良反应。结果表明，LAK细胞/rIL-2疗法对晚期肺癌有一定的治疗作用，腔内用药对癌性胸水、腹水和心包积液均有较好的疗效，无明显副作用。

自体细胞免疫治疗联合化疗对晚期非小细胞肺癌的近期疗效

目的探讨自体树突状细胞(DC)、细胞因子活化杀伤细胞(CIK)免疫治疗联合化疗对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的近期临床疗效。方法选取晚期NSCLC患者185例,根据接受治疗方式的不同分为化疗组62例、DC/CIK组60例、联合组63例。化疗组采用培美曲塞或吉西他滨化疗6~8周期;DC/CIK组采集患者外周血单个核细胞,体外分离培养DC和CIK回输,2周内重复回输3~5次为1个免疫治疗周期,每3个月进行1次,共治疗2次。联合组先行培美曲塞或吉西他滨化疗,化疗结束后第2天进行DC、CIK免疫治疗,化疗及DC、CIK治疗方式、时间分别与化疗组、DC/CIK组相同。计算三组客观反应率(ORR)、疾病控制率(DCR),并观察治疗前后生活质量改善情况。结果治疗结束后第8周,联合组ORR高于DC/CIK组(P<0.05)、DCR高于化疗组、DC/CIK组(P均<0.05)。治疗结束后第12周,联合组生活质量评分高于化疗组、DC/CIK组,疲乏、恶心呕吐、气促、咳嗽及胸痛症状量表评分均低于化疗组,气促、咳嗽及胸痛症状量表评分均低于DC/CIK组(P均<0.05)。结论自体DC、CIK免疫治疗联合化疗对晚期NSCLC有良好的近期疗效,能显著提高患者生活质量。

抗原致敏DC联合LAK细胞对肺腺癌细胞杀伤作用的研究

目的:观察抗原致敏树突状细胞(DC)联合淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞对肺腺癌细胞的杀伤作用。方法:采用密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞(PBMC),常规诱导出DC、LAK细胞。倒置显微镜观察细胞的形态和增殖情况;应用流式细胞仪(FCM)测定细胞表型上变化鉴定这两种细胞。流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化;利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测法把DC-LAK细胞和DC-LAK-A549细胞作为效应细胞,肺腺癌A549细胞作为靶细胞,进行杀伤试验。结果:①体外诱导单个核细胞培养出DC和LAK细胞。②共培养后DC-LAK细胞的免疫表型表达增加。抗原致敏DC联合LAK细胞(DC-A549-LAK)组的免疫表型表达与对照组相比更有显著性意义。③共培养细胞在增殖倍率上有显著意义。④MTT显示共培养后的LAK细胞杀伤肿瘤细胞活性增强,抗原致敏后DC-A549-LAK抗肿瘤效应增强更显著。结论:从外周血单个核细胞中诱导出具有典型形态和免疫表型的DC和LAK细胞。DC和LAK细胞共培养细胞,增殖活性、免疫表型、杀伤活性方面高于单纯培养的LAK细胞。抗原致敏后DC-A549-LAK抗肿瘤效应增强更显著。

LAK细胞及活化胚胎胸腺细胞对脑胶质瘤细胞的体外作用

目的 探讨体外培养后人胚胎胸腺细胞 (ETC)表面抗原的转变及进行移植的时机 ,比较不同源LAK细胞、活化ETC联合与TJ90 5细胞的体外作用效果。方法 对不同处理的人胚胎胸腺悬液培养前后观察 ,测定细胞表面抗原 ;进行LAK细胞、活化ETC体外杀瘤活性比较。结果 应用特殊培养液培养 ,可以使人胚胎胸腺上皮细胞生存2 8天 ,分离后悬液比混悬液细胞表面抗原早期达稳定 (CD4/CD8=2 .2 6 ) ;胸腺LAK细胞对TJ90 5细胞的杀伤作用与脾LAK细胞无显著性差异。结论 活化ETC在体外对肿瘤细胞无抑制作用 ,不同源LAK细胞和活化ETC联合对TJ90

自体淋巴因子活化的杀伤细胞回输治疗慢性乙型肝炎10年追踪观察

目的 观察自体淋巴因子活化的杀伤细胞 (LAK细胞 )回输治疗慢性乙型肝炎的远期疗效。方法 治疗组 (n =15 0例 )采用自体LAK细胞回输 ,对照组 (n =12 0例 )采用常规治疗。两组患者分别在治疗结束后及 1、2、3、5、7、10年内检查肝功能、HBVM、PCR HBV DNA、肝脏B超、X线食管钡餐透视 ,统计肝癌发生例数和病死例数。结果 治疗组各项实验室检查指标与对照组比较差异有显著意义 ;治疗组死亡 1例 ,对照组死亡 4 6例 ;治疗组无肝癌发生 ,对照组有 12例发生肝癌。

DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗中晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的:研究DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗中晚期非小细胞肺癌的疗效。方法:选择90例中晚期非小细胞肺癌患者,根据随机数字表法分为两组,观察组及对照组均45例。对照组给予顺铂加紫杉醇化疗,观察组在对照组基础上联合DC-CIK免疫治疗。分析两组患者的临床疗效并对比不良反应发生率。结果:观察组治疗总有效率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DC-CIK免疫治疗联合化疗治疗中晚期非小细胞肺癌能够达到更加显著的疗效,利于患者预后改善。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)通过靶向TOPK抑制结直肠癌细胞的增殖

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对结直肠癌增殖的影响及机制。方法采用体外结合及体外激酶实验检测C3G与T细胞淋巴因子活化杀伤细胞来源的蛋白激酶(TOPK)的结合能力及对其活性的影响;采用软琼脂试验检测C3G对结肠癌细胞克隆形成能力的影响;采用MTS法测定C3G的细胞毒性;采用大肠杆菌BL21表达GST-组蛋白H3融合蛋白;采用慢病毒感染的方法,检测C3G对沉默TOPK的结肠癌细胞克隆形成能力的影响;Western blot法检测HCT116细胞中C3G对TOPK下游分子组蛋白H3的磷酸化的水平;建立结肠癌患者癌组织异种移植小鼠模型,免疫组织化学染色法检测组蛋白H3的磷酸化水平。结果C3G在体外直接与TOPK结合并抑制TOPK活性;C3G以浓度依赖的方式抑制结肠癌细胞的增殖及克隆形成;沉默TOPK降低结肠癌细胞对C3G的敏感性;C3G以时间和浓度依赖的方式抑制TOPK下游分子组蛋白H3的磷酸化水平;另外,C3G抑制患者来源的结肠癌组织异种移植瘤小鼠体内肿瘤的生长。结论C3G通过靶向TOPK抑制结直肠癌的生长。

共培养DC-LAK细胞生物学特性及在荷瘤鼠体内分布的特点

目的:观察共培养DC-LAK细胞生物学特性及经不同途径输注体内后的组织器官分布特点。方法:以荧光染料CFSE标记共培养DC-LAK细胞,后经瘤旁皮下注射或腹腔注射途径输注于荷LLC肿瘤C57BL/6小鼠体内,使用激光共聚焦荧光显微镜检测共培养DC-LAK细胞在各器官内的动态分布。结果:共培养DC-LAK细胞输入荷瘤小鼠体内后,腹腔注射途径中腹腔内器官率先达到分布高峰。瘤旁皮下注射途径中肿瘤率先达到分布高峰;两种途径中肿瘤内的分布DC-LAK组均高于LAK组。结论:DC与LAK细胞共培养可增加LAK细胞对肿瘤的靶向性,瘤旁注射途径可提高肿瘤内的分布,体腔输入途径更适合于体腔内恶性渗液或局限病灶的治疗。

晚期肺癌患者血中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2和自然杀伤细胞活化受体2D的表达及意义

目的 探讨晚期肺癌患者血中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2 (RhoGDI2)、自然杀伤细胞活化受体2D(NKG2D)的表达水平及临床意义.方法 选择2012年1月至2014年12月50例中晚期肺癌患者为研究对象.肺鳞癌20例,肺腺癌18例,小细胞肺癌12例;Ⅲ期30例,Ⅳ期20例;淋巴结转移22例,无淋巴结转移28例.另选择2012年1月至2014年12月体检健康者50名为对照组.采用ELISA法检测RhoGDI2;采用流式细胞仪检测NKG2D.结果 肺癌Ⅳ、Ⅲ期患者RhoGDI2水平高于对照组[(70.19±8.54)、(49.76±7.25)、(5.62±1.26) μg/L];NKG2D表达水平低于对照组[(71.49±5.57)％、(78.97±6.62)％与(84.59±6.96)％],差异有统计学意义(P均＜0.05);肺癌Ⅳ期患者RhoGDI2水平高于Ⅲ期患者[(70.19±8.54)与(49.76±7.25) μg/L],肺癌Ⅳ期患者NKG2D水平低于Ⅲ期患者[(71.49±5.57)％与(78.97±6.62)％],差异有统计学意义(P均＜0.05);发生淋巴结转移的患者RhoGDI2水平高于无淋巴结转移[(71.32±6.79)与(48.29±2.36) μg/L],差异有统计学意义(P＜0.01),NKG2D水平低于无淋巴结转移患者[(72.36±6.62)％与(81.27±6.86)％],差异有统计学意义(P＜0.01).血清RhoGDI2、NKG2D表达之间呈负相关(r=-4.176,P=0.011).结论 RhoGDI2、NKG2D等指标的异常表达与肺癌的临床分期、肿瘤的淋巴结转移有关,而与肺癌的类型无关;RhoGDI2、NKG2D的表达之间呈负相关关系.

白细胞介素2治疗前后甲襞微循环观察

白细胞介素2(Inter Leu kin2 IL-2)又称T细胞生长因子(TCGF)。是T淋巴细胞受抗原刺激后所分泌的具有免疫调节作用的淋巴因子。IL-2诱导自然杀伤细胞(NK)、细胞毒性T细胞(CTL)、淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK)的活化和增殖．从而杀伤肿瘤细胞的作用近年来日益受到人们的重视。

自体LAK细胞治疗晚期恶性肿瘤40例疗效观察

淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK细胞)是近年来发现的一类重要的免疫活性细胞,经白细胞介素Ⅱ(IL—2)激活后具有较强的抗肿瘤作用。IL—2/LAK治疗属过继免疫治疗,以其独特的疗效成为肿瘤治疗的新方法。我院自1995年2月至1996年5月应用此方法治疗晚期恶性肿瘤40例。

DC-CIK免疫治疗联合化疗对肺癌患者近远期疗效的影响

目的探讨自体树突状细胞(DC)-细胞因子活化杀伤细胞(CIK)免疫治疗联合化学治疗(简称化疗)对肺癌患者近远期疗效的影响。方法选取医院2018年9月至2020年8月收治的肺癌患者60例,按治疗方式的不同分为对照组和观察组,各30例。两组患者均采取常规化疗方案治疗,观察组患者加用DC-CIK免疫治疗。结果观察组患者的客观缓解率为73.33%,显著高于对照组的46.67%(P<0.05);治疗后,观察组患者的生活质量评分显著更高,临床症状评分显著更低(P<0.05);观察组患者的中位生存期显著长于对照组(P<0.05);观察组患者1年生存率为80.00%,显著高于对照组的50.00(P<0.05)。结论DC-CIK免疫治疗联合化疗可提高肺癌患者的近远期疗效,有助于改善患者的疾病症状和机体免疫功能,提升整体生活质量。

抗CD_3抗体活化杀伤细胞免疫表型变化对抗胶质瘤活性影响

研究用抗ＣＤ３抗体刺激体外培养了８例胶质瘤病人的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）和外周血淋巴细胞（ＰＢＬ细胞），从中发现了一种新型高效的广谱抗肿瘤效应细胞──ＣＤ３ＡＫ细胞，通过与ＣＤ３＋ＴＩＬ、ＣＤ３－ＴＩＬ和ＬＡＫ细胞比较分析的方法分析了这些效应细胞培养前后细胞表面表型的变化以及对自体胶质瘤细胞，异体胶质瘤细胞，Ｕ２５１ＭＧ及Ｕ９３７等的杀伤活性的影响，同时也讨论了抗ＣＤ２抗体在Ｔ细胞活化中的作用及活化机制。由于αＣＤ３ＡＫ细胞来源广泛，制备简单和抗肿瘤细胞毒活性强，所以将有可能代替ＴＩＬ细胞成为过继免疫治疗的主要抗肿瘤效应细胞。