《人源肺癌类器官培养技术规范》(T/SHSYCXH 12-2022)解析

本文阐述了我国人源肺癌类器官培养技术和相关标准现状,主要针对团体标准《人源肺癌类器官培养技术规范》(T/SHSYCXH 12-2022)中肺癌组织样本的获取和运输、肺癌类器官的原代培养和传代培养、冻存和复苏后培养、检测指标等要求展开解析,并对该标准的应用进行了展望.

肺腺癌细胞在基质胶-Ⅰ型胶原共混水凝胶支架类器官体系中的生物学研究

目的探讨在类器官培养体系下使用不同三维支架培养肺癌细胞A549所出现的生物学行为,观察并表征在模拟肺癌早期基质的基质胶和模拟肺癌进展期基质的基质胶-Ⅰ型胶原共混水凝胶中分别培养A549类器官出现的增殖、侵袭和药物敏感性方面的差异。方法通过扫描电镜(SEM)观察基质胶与Ⅰ型胶原共混后水凝胶的三维支架结构变化。A549细胞在基质胶中和基质胶-Ⅰ型胶原共混水凝胶中进行体外类器官培养,在光镜下观测类器官平均直径变化和第9天成球率评估类器官的生长趋势;使用HE染色和免疫组织化学染色评估类器官微组织特征和肿瘤增殖标志物Ki-67表达量;使用鬼笔环肽染色检测类器官中F-actin表达位置与空间排列;通过免疫印迹法检测类器官中EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)变化;通过3D glo法检测类器官在吉非替尼处理后的活力以分析类器官药物敏感性的变化。结果A549类器官在基质胶中形成表面光滑的实心球体,在共混水凝胶中出现丝状伪足、片状伪足和单细胞散布到基质的现象;在两种支架中培养的A549类器官生长趋势无明显差异,但共混水凝胶组Ki-67阳性表达率明显高于基质胶组;A549类器官细胞骨架在基质胶中呈疏松立体球状结构,在共混水凝胶中出现分支结构且单细胞分支尖端细胞发生细胞骨架重塑;共混水凝胶组类器官相较于基质胶组其上皮标志物表达降低、间充质标志物表达升高;共混水凝胶组肺癌类器官相较于基质胶组对吉非替尼更耐药。结论在基质胶-I型胶原共混水凝胶中培养的肺癌类器官形态结构改变、增殖能力增强、侵袭能力增强以及对吉非替尼的药物敏感性降低。