肺抑瘤合剂对小鼠Lewis肺癌细胞周期蛋白D1表达影响的实验研究

[目的]探讨肺抑瘤合剂的抗肿瘤作用机制。[方法]制备小鼠Lewis肺癌模型,研究肺抑瘤合剂与化疗药物单独或联合应用对小鼠Lewis肺癌的抑制作用及其对肺癌组织细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达的影响。[结果]肺抑瘤合剂对Lewis肺癌小鼠局部肿瘤生长有显著抑制作用,对环磷酰氨抗肿瘤有协同增效作用(P<0.001);肺抑瘤合剂配合化疗能有效抑制肿瘤细胞cyclinD1的表达(P<0.05)。[结论]肺抑瘤合剂可能是通过降低肿瘤细胞cyclinD1的表达,使肿瘤细胞停止于G1期,从而通过调控基因表达,起到抗肿瘤的作用。

基于细胞周期蛋白D1信号通路探讨四君子汤加味对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:基于细胞周期蛋白D1(CCND1)信号通路探讨四君子汤加味(SJZJ)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:将40只无特定病原体Wistar大鼠随机分为SJZJ低、中、高剂量组及生理盐水对照组,分别给予6、12、24 g/(kg·d)的SJZJ和生理盐水灌胃,连续7 d后,取血制备含药血清。取对数生长期的NSCLC A549细胞,用胰酶消化后,分为空白组、生理盐水组及SJZJ低、中、高剂量组,SJZJ各组加入相应的含药血清,进行细胞培养。通过平板克隆形成实验、酶联免疫吸附试验、Western blot法和实时荧光定量技术,检测SJZJ对A549细胞增殖、凋亡及相关蛋白和基因表达的影响。结果:SJZJ高剂量组细胞克隆形成率低于生理盐水组(P<0.05)。SJZJ中剂量和高剂量组caspase-3活性高于生理盐水组,SJZJ高剂量组Bcl-2和cleaved caspase-3蛋白表达水平高于生理盐水组(P<0.05)。与生理盐水组相比,SJZJ中剂量和高剂量组cyclin D1蛋白表达水平更低(P<0.05);SJZJ高剂量组cyclin D2和CDK4蛋白表达水平更低(P<0.05);各组p57蛋白、miR-326的表达水平比较,无统计学差异(P>0.05);与生理盐水组相比,SJZJ高剂量组CCND1 mRNA表达水平更低(P<0.05)。结论:SJZJ可能通过抑制CCND1信号通路抑制A549细胞的增殖和促进凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。本研究为SJZJ作为潜在的NSCLC治疗药物提供了实验依据,并揭示了其可能的作用机制。

细胞周期蛋白D1在肺癌的表达及其临床病理意义

为探讨细胞周期蛋白D1 (CyclinD1 )在肺癌发生中的作用及其与生物学行为的关系 ,采用免疫组化SP法观察CyclinD1在肺癌及癌前病变和正常肺组织的表达。结果显示 ,正常肺组织和鳞状化生的支气管上皮未见CyclinD1表达 ,在轻、中、重度不典型增生、原位癌、浸润癌 ,CyclinD1表达的阳性率逐渐升高 ,阳性细胞数也增多 ,肺癌组织中CyclinD1表达的总阳性率为 5 6 .4%。低分化癌的阳性率高于中高分化癌 (P <0 .0 5 ) ;无论鳞癌还是腺癌 ,CyclinD1阳性组的增殖活性高于阴性组 (P <0 .0 5 ) ,肺鳞癌有淋巴结转移组CyclinD1的阳性率高于无转移组 (P <0 .0 5 )。结果提示 :CyclinD1表达与肺癌的发生和增殖有关 ,而且CyclinD1表达是支气管粘膜上皮癌变的早期事件 ,说明CyclinD1可作为判断肿瘤发生可能性的标记物 ,在肺癌的早期诊断中将具有重要意义。CyclinD1表达与肺鳞癌分化不良及淋巴结转移有关 ,可能是预后不良的标志。

非小细胞肺癌中细胞周期蛋白D1与E的作用及相互关系

目的 :研究细胞周期蛋白D1与E在非小细胞肺癌 (NSCLC)发生、发展中的作用及相互关系。方法 :免疫组化方法检测 87例NSCLC肿瘤组织中细胞周期蛋白D1、E的表达及PCNA估计增殖指数 (PI) ,并将上述结果与临床病理及预后资料进行对比分析。结果 :87例NSCLC中细胞周期蛋白D1、E阳性率分别为 4 4 .8% (39/87)、4 8.3% (42 /87) ,细胞周期蛋白D1阳性组的PI值显著高于阴性组 (P〈0 .0 5 ) ,细胞周期蛋白E阳性组PI值与阴性组无显著差异 (P〉0 .0 5 ) ;细胞周期蛋白D1阳性组肿瘤直径、淋巴结转移率和生存率均与阴性组有显著差异(P〈0 .0 1、〈0 .0 5、〈0 .0 1) ,细胞周期蛋白E阳性组淋巴结转移率、临床分期和生存率均与阴性组有显著差异 (P〈0 .0 5、〈0 .0 5、〈0 .0 1) ;细胞周期蛋白D1阳性组中细胞周期蛋白E的阳性率显著高于其阴性组 (P〈0 .0 5 ) ;细胞周期蛋白D1与细胞周期蛋白E双阳性组的PI值、肿瘤直径、淋巴结转移率显著高于非双阳性组 (P值均〈0 .0 5 ) ,生存率显著低于非双阳性组 (P〈0 .0 1)。结论 :细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E均参与NSCLC的发生、发展 ,并影响其预后 ,但两者在其中所起作用不同 :细胞周期蛋白D1是调节NSCLC增殖的主要因素 ,细胞周期蛋白E主要与NSCLC进展有关 ;细胞周期蛋白D1可促?

叉头框蛋白Q1和细胞周期蛋白D1在非小细胞肺癌组织中的表达与临床病理特征及预后的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中叉头框蛋白Q1(FOXQ1)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法选取2014年12月~2017年10月我院诊治的NSCLC病人癌组织标本196例及癌旁组织标本30例,采用免疫组化EnVisio法检测NSCLC组织及癌旁组织中FOXQ1和CyclinD1蛋白表达;分析FOXQ1、CyclinD1的表达与NSCLC病人临床病理参数的关系。采用Spearman相关分析FOXQ1与CyclinD1的相关性;采用Cox比例风险回归模型分析NSCLC病人预后的影响因素;采用Kaplan-Meier生存曲线分析FOXQ1、CyclinD表达与病人预后的关系。结果NSCLC组织中FOXQ1、CyclinD1蛋白高表达率高于癌旁组织(P<0.05);NSCLC组织中FOXQ1、CyclinDl高表达与病理分化程度、临床分期、淋巴结转移相关(P<0.05);Spearman相关分析显示,NSCLC组织中FOXQ1表达与CyclinD1表达呈正相关(P<0.05);Cox回归分析显示,FOXQ1高表达、CyclinD1高表达、FOXQ1+CyclinD1高表达均是影响NSCLC病人无进展生存期(PFS)和总生存时间(OS)的独立危险因素(P<0.05);Kaplan-Meier分析显示,FOXQ1、CyclinDl两者高表达病人PFS和OS短于其他病人(P<0.05)。结论FOXQ1、CyclinD1蛋白在NSCLC组织中高表达,两者与疾病的发生、发展及预后密切相关,两者联合检测能更好地判断NSCLC病人的预后。

细胞周期蛋白D1,P63蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨细胞周期蛋白D1(CyclinD1),P63蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化EnVision二步法检测71例NSCLC和15例肺良性病变组织中两种基因蛋白的表达。结果:在肺鳞癌、肺腺癌、肺良性病变中CyclinD1的阳性表达率分别为64.3%(18/28),67.5%(27/ 40)和13.3%(2/15);P63蛋白阳性表达率分别为78.6%(22/28),27.5%(11/40)和26.7%(4/15)。有淋巴结转移组CyclinD1和P63阳性率明显高于无淋巴结转移组,P<0.01;Ⅲ-Ⅳ期CyclinD1表达的阳性率高于Ⅰ-Ⅱ期,P<0.01。结论:CyclinD1和P63的过表达与肺癌的发生、发展有关。

细胞周期素D1及P16蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系

目的 研究细胞周期素D1(CyclinD1)及P16蛋白在肺癌中的表达及其与肺癌临床病理特征的关系。方法 应用免疫组化SP法对 5 9例肺癌组织及 47例癌旁肺组织中CyclinD1及P16蛋白进行检测。结果 CyclinD1在肺癌组织中阳性表达率为 61.0 % (3 6/ 5 9) ,显著高于癌旁肺组织 (17.0 % ,8/ 47) ,P <0 .0 1;而P16蛋白在肺癌中阳性表达率 (4 0 .7% ,2 4/ 5 9)低于癌旁肺组织 (76.6% ,3 6/ 47) ,P <0 .0 1。肺癌组织CyclinD1及P16蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤组织学类型、分期及淋巴结转移等均无明显相关 (P >0 .0 5 ) ,与肿瘤分化程度有显著相关性 ,肺癌中CyclinD1与P16蛋白表达呈显著负相关 (r =-0 .763 ,P <0 .0 1)。结论 CyclinD1过表达及P16表达缺失与肺癌的发生密切相关。CyclinD1和P16蛋白异常表达可能是肺癌发生过程中的早期事件 ,可作为判断肺癌分化程度的参考指标 。

肺癌组织中细胞周期蛋白D1的表达

目的 观察细胞周期蛋白Ｄ１（Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１）在肺癌发生中的作用及其与生物学行为的关系。方法 收集肺癌及癌前病变和正常肺组织，采用免疫组化ＳＰ法检测Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达。结果 正常肺组织和鳞状化生的支气管上皮未见Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达；在轻→中→重度不典型增生、原位癌、浸润癌，Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达的阳性率逐渐升高，阳性细胞数也增多，低分化癌的阳性率高于中高分化癌（Ｐ＜ ０．０５）。Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１阳性组的增殖活性高于阴性组（Ｐ＜ ０．０５） ；肺鳞癌有淋巴结转移组Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的阳性率高于无转移组（Ｐ＜ ０．０５） 。结论 Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达与肺癌的发生和增殖有关，而且Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达是支气管粘膜上皮癌变的早期表现。Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达与肺鳞癌分化不良及淋巴结转移有关，可能是预后不良的标志。

细胞周期蛋白D_1在非小细胞肺癌中表达的临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达及其临床意义。方法 用鼠抗人CyclinD1单克隆抗体(DCS/6 )对 89例石蜡包埋的原发性NSCLC组织进行免疫组化染色 ,并与 2 0例肺炎性病变比较。结果 CyclinD1在肺鳞癌、腺癌、大细胞癌中都有较高的表达 ,其阳性率分别为 6 0 .5 %、6 1.0 %、40 .0 % ;而在肺炎性病变中 ,则全部阴性。在肺鳞癌、腺癌中 ,肿块直径≥ 3cm、有淋巴结转移或远处转移者 ,其CyclinD1阳性率较高 (P <0 .0 5 ) ,且与临床分期有关 ,Ⅲ～Ⅳ期癌中的阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期癌 (P <0 .0 5 )。结论 CyclinD1的过表达与NSCLC的发生、发展和预后等密切相关 ,对NSCLC的诊断、治疗有一定的指导意义 ,可作为一个诊断及预后指标。

细胞周期蛋白D1在老年肺癌组织中表达的实验研究

目的 探讨细胞周期蛋白 D1 (cyclin D1 )与肺癌的关系。方法 利用免疫组化 (SP)法检测 1 0 8例老年肺癌石蜡包埋组织中 cyclin D1的表达。结果 cyclin D1只在肺癌组织中表达 ,阳性率为 48.1 5% (52 / 1 0 8) ;在非小细胞肺癌中表达阳性率为 53.2 6% (49/ 92 ) ,在小细胞肺癌中的表达率为 1 8.75% (3/ 1 6) ;cyclin D1的表达与肺癌组织的分化程度呈正相关 (P<0 .0 5) ;与鳞癌的淋巴结转移呈负相关 ;与吸烟无相关性 (P>0 .0 5)。结论 cyclin D1主要在非小细胞肺癌中呈过表达状态、促进肿瘤细胞分化。

NIK和IKKβ连接蛋白、C-myc和细胞周期蛋白D1在结肠癌组织中的表达及意义

目的检测结肠癌组织中NIK和IKKβ连接蛋白(NIBP)、磷酸化p65(p-p65)和C-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达,并探讨其意义。方法收集广西医科大学第一附属医院结直肠外科2013年2月—2014年2月经外科手术切除及消化内科肠镜活检的部分标本151例,其中正常结肠黏膜16例、结肠腺瘤21例、结肠癌114例。采用SP免疫组化法分别检测正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织及结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率;分析结肠癌组织中NIBP、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率的相关性。结果正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织、结肠癌组织的NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率高于正常结肠黏膜组织和结肠腺瘤组织(P<0.017);正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织中NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异无统计学意义(P>0.017)。不同组织学类型、浸润深度及有无淋巴结转移、远处转移患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度越低、TNM分期越高、Duke's分期越高患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率越高(P<0.05)。NIBP、C-myc、cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率均呈正相关(P<0.05)。结论 NIBP可能通过激活核因子κB(NF-κB)信号转导通路上调C-myc和cyclin D1等的表达而影响结肠癌的治疗发生、发展、侵袭和转移,为临床发现结肠癌的治疗新靶点提供了参考依据。

细胞周期蛋白D1、CDK4在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 :研究乳腺癌组织周期蛋白D1、CDK4的蛋白表达定位、表达水平 ,及与P2 1蛋白表达、与临床病理指标的关系及其预后意义。方法 :①应用免疫组织化学染色方法 ,检测 10 6例乳腺癌组织石蜡切片上的周期蛋白D1、CDK4的蛋白定位和蛋白表达 ,比较其与P2 1的蛋白表达 ,与临床病理学指标 ,如病理类型、组织学分型、组织学分级、淋巴结状态、雌激素受体状态、TNM分期等之间的关系 ;②对周期蛋白D1、CDK4、P2 1及临床病理指标如肿瘤的组织学分级、淋巴结状态、TNM分期、ER状态等 ,应用Kaplan Meier法Log rank检验进行单因素生存分析 ,应用Cox比例风险模型进行多因素生存分析。结果 :①周期蛋白D1表达定位于细胞核、CDK4的表达位于细胞质和细胞核 ,周期蛋白D1的阳性率为 30 2 % ,CDK4的阳性率为 5 3 8%。②周期蛋白D1及CDK4的表达与乳腺癌的病理诊断组织学分型、组织学分级、ER状态、临床TNM分期、淋巴结状态、P2 1蛋白表达表达水平无关 (P >0 0 5 )。周期蛋白D1的蛋白表达与CDK4的蛋白表达相关 (P <0 0 5 )。③单因素分析提示影响 140个月无瘤生存率及总生存率的因素有 :临床TNM分期、组织学分级、腋淋巴结状态、周期蛋白D1的蛋白表达 (P <0 0 5 )。在无腋淋巴结转移亚组周期蛋白D1蛋白表达单因素生存分析?

胃癌组织中端粒酶活性与细胞周期蛋白D_1表达关系的研究

目的 探索胃癌组织中端粒酶活性与细胞周期蛋白D1表达之间可能的关系。方法 利用TelomerasePCR ELISAKit测量端粒酶活性 ;利用RT PCRELISA检测细胞周期蛋白D1mRNA表达水平。共检测了 84例胃癌及其相关性的组织标本。结果 周期蛋白D1异常高表达在胃良性疾病、胃癌前期病变和胃癌组织中均可检出 ,而端粒酶活性仅在胃癌前期病变和胃癌组织中检出。胃癌前期病变和胃癌组织端粒酶活性与周期蛋白D1表达程度明显正相关 (r =0 .713,P <0 .0 5 )。结论 至少在胃癌组织中 ,细胞周期蛋白D1异常高表达可能是端粒酶激活的前提之一。

人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定

【目的】构建表达人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体上。测序鉴定后切下相应的片段,连接到表达载体pET-22b(+)上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3),使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定表达蛋白。【结果】用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌,Westernblot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体,后两者在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。

丹参对大鼠局灶性脑缺血后神经元内细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 观察大鼠局灶性脑缺血后神经元内细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达与神经细胞凋亡的关系以及丹参的影响。方法 采用线栓法大鼠大脑中动脉持续阻塞模型 ,应用免疫组织化学和TUNEL染色方法观察假手术组和缺血后不同时间阳性染色神经细胞的数量和分布情况及丹参的影响。结果 cyclinD1蛋白表达自缺血后 6h开始出现 ,缺血后 48h达高峰 ;丹参组各相应时间点cyclinD1蛋白表达明显减少 (P <0 .0 1)。凋亡细胞自缺血后 12h开始出现 ,缺血后 72h达高峰 ;丹参组各相应时间点凋亡细胞表达明显减少 (P <0 .0 1)。相邻切片可见cyclinD1蛋白表达和凋亡细胞染色区域基本相同。结论 脑缺血后cyclinD1的异常表达可能诱发了缺血神经细胞的凋亡 。

Rho A蛋白通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制

目的:探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制。方法:构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果:野生型人结肠癌HT29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系。与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞RhoA蛋白活性下降;Cyclin D1表达下调,p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降。结论:转染DLC-1基因引起人结肠癌HT29细胞Rho A蛋白活性下调,进而可能通过对Cyclin D1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑。

细胞周期蛋白D1的高表达与雌激素受体表达及乳腺癌患者良好预后相关

目的探讨细胞周期蛋白D1(cyclin D1)与雌激素受体(ER)在乳腺癌中的表达和临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测102例乳腺癌组织和60例正常乳腺组织标本中cyclin D1及ER蛋白表达,结合临床病理及术后5年随访资料,分析cyclin D1与ER相关性及与预后之间的关系。结果与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中cyclin D1和ER表达显著性增加,且cyclin D1表达与肿瘤组织学分级、TNM分期、ER蛋白表达相关。Spearman相关性分析显示,cyclin D1与ER表达水平呈正相关。Kaplan-Meier生存分析发现,cyclin D1高表达组乳腺癌患者生存期明显高于低表达组。Cox多因素分析表明cyclin D1、ER及TNM分期是影响患者预后的独立因素。结论 Cyclin D1在乳腺癌组织高表达,与ER表达正相关,且指示良好的预后。

上皮钙粘素、β-连环蛋白、细胞周期素D1在进行期寻常型银屑病皮损的表达

目的通过检测银屑病患者皮损处上皮钙粘素、β-连环蛋白和细胞周期素D1的表达,探讨其在银屑病角质形成细胞高度增殖中的意义。方法用免疫组化方法检测正常组织及进行期银屑病皮损处上皮钙粘素、β-连环蛋白和细胞周期素D1蛋白的表达。结果银屑病患者皮损增生的表皮细胞上皮钙粘素和β-连环蛋白在颗粒层和基底细胞层表达明显降低,与正常人相比有显著性差异(P<0.01)。而细胞周期素D1在银屑病患者皮损基底细胞层表达显著升高,并与β-连环蛋白的异常表达相关。结论上皮钙粘素和β-连环蛋白表达的下调可能与银屑病角质形成细胞高度增殖有关,Wnt信号转导系统异常可能参与银屑病的发病机制。

p16、细胞周期蛋白D1和pRb在头颈部鳞癌的表达及其意义

目的：探讨 p16、细胞周期蛋白 D1（ cyclinD1）和 pRb在头颈部鳞癌（ head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC）的表达及他们的相互关系和其意义。方法：应用免疫组织化学方法检测 32例原发 HNSCC患者癌组织中 p16、 cyclinD1和 pRb的蛋白表达。结果： p16、 cyclinD1、 pRb的总异常率为 90.6％（ 29/32），其中 p16和 pRb蛋白表达缺失分别为 62.5％（ 20/32）和 34.4％（ 11/32）， cyclinD1过表达为 34.4％（ 11/32）。 p16与 pRb呈负相关性（