澳洲茄碱诱导肺癌细胞株H446凋亡及其机制探讨

背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合适浓度和时间,以药物浓度为0μmol/L、3.4μmol/L、6.8μmol/L、13.6μmol/L分4组,作用于H446细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态的变化,DAPI核染观察细胞核变化,流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL2、BAX、CASP3表达的变化。结果澳洲茄碱可降低H446细胞的存活率,抑制其增殖,具有剂量相关性,存活率可降低至16.77%(P<0.001),最高凋亡率为44.62%(P<0.001);H446有明显的细胞凋亡形态学变化;Western blot显示凋亡相关蛋白BAX、CASP3表达上调(P<0.05),凋亡抑制基因蛋白BCL2表达下调(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制H446细胞的增殖,上调促凋亡相关蛋白表达,下调抑凋亡蛋白表达,从而促进细胞的凋亡。

刺五加多糖诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡

研究刺五加多糖(Acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS)诱导H446细胞凋亡及其可能的作用机制。采用MTT法检测ASPS对小细胞肺癌H446细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258染色和流式细胞技术检测经ASPS处理后H446细胞凋亡的形态特征及凋亡率的变化;Western印迹方法检测凋亡相关基因bax、bcl-2、p53表达的变化。MTT分析表明,ASPS作用48h后可明显抑制H446细胞的增殖,半数抑制浓度(IC50值)为476.36μg/ml;Hoechst染色结果:H446细胞在ASPS诱导下出现典型的凋亡形态;流式细胞术检测结果显示:对照组及浓度为240、480、960μg/ml药物处理组凋亡率分别是(5.02±0.4)%、(11.12±1.8)%、(19.89±2.5)%、(22.54±1.8)%;Western印迹显示:在ASPS的诱导下bax、p53的表达量提高,而bcl-2的表达量下降。研究表明,ASPS对H446细胞增殖有抑制作用,并能促进其凋亡;ASPS通过上调bax、p53表达,下调bcl-2表达促进H446细胞凋亡。

刺五加多糖通过ERK信号转导途径诱导H446细胞G_2/M期阻滞

目的研究刺五加多糖(ASPS)对人小细胞肺癌H446细胞G2/M期阻滞的诱导作用及对ERK信号传导途径的影响。方法流式细胞技术(FCM)检测H446细胞周期;Western blot分析检测ASPS对ERK、p-ERK蛋白的影响。结果与对照组相比,各ASPS处理组G2/M期细胞所占的比例明显增高(P<0.01),G0/G1期细胞所占的比例没有差异;加入ERK抑制剂PD98059后,G2/M期和G0/G1期细胞所占的比例与对照组没有差异;p-ERK的量显著高于对照组(P<0.01),而对ERK蛋白表达没有明显影响。结论ASPS可能通过激活ERK信号转导途径诱导H446细胞发生G2/M期阻滞。

ATM蛋白在不同肺癌细胞株中表达差异与放射敏感性关系的研究

目的 通过对ATM蛋白在不同肺癌细胞株中表达差异与放射敏感性关系的研究，为下一步研究打下基础。方法利用细胞集落形成实验研究肺癌细胞株A549、NCI—H446的放射敏感性差异，并结合免疫荧光实验和激光共聚焦扫描（LSCM）技术来探讨两细胞株中ATM蛋白的表达差异与放射敏感性之间的关系。结果集落形成实验中，在接受2、4、6、8Gy剂量照射时，A549和NCI—H446两肺癌细胞株的存活分数分别为81．0％、32．4％、12．0％、3．5％和52．4％、17．0％、3．2％、0．7％。ATM蛋白定位于细胞浆和胞核；利用LSCM分析两细胞株中ATM蛋白的表达差异，A549细胞ATM蛋白荧光强度（71．188＋13．379）较NCI-H446细胞（47．478±19．032）明显增强（P〈0．0001），有统计学意义。结论两肺癌细胞株A549和NCI-H446具有放射敏感性差异，ATM蛋白在两细胞株中的表达亦有差异显著性，表明其表达量可能与放射敏感性呈负相关。

RNA干扰下调拓扑异构酶Ⅰ在小细胞肺癌细胞株的表达及其与拓扑替康敏感性的关系

目的检测拓扑异构酶Ⅰ（TopⅠ）在小细胞肺癌（SCLC）细胞株中的表达，并探讨其表达水平对拓扑替康（TPT）敏感性的影响。方法采用Western blot检测TopⅠ在SCLC细胞株H446蛋自水平的表达；应用人工合成并荧光标记的小干扰RNA（siRNA），通过脂质体瞬时转染H446细胞，流式细胞仪检测转染效率；应用定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot检测各干扰序列对TopⅠ在mRNA及蛋白水平的干扰效果，筛选最佳干扰序列；对转染后的细胞株进行药物敏感性实验，观察TopⅠ的表达对TPT敏感性的影响。结果TopⅠ基因在H446中有较高表达；siRNA干扰效果满意，转染效率可达86．7％左右；siRNA oligo TopⅠ-892、siRNA oligo TopⅠ-1152、siRNA oligo TopⅠ-2084和siRNA oligo TopⅠ-2397等4个于扰序列均抑制H446细胞TopⅠ mRNA的表达，抑制率分别为（95．7±1．6）％、（90．8±1．6）％、（96．1±2．7）％和（96．3±1．8）％。序列siRNA oligo TopⅠ-2084和siRNA oligo TopⅠ-2397干扰后，H446细胞TopⅠ蛋白表达明显降低。药物敏感性实验结果显示，相同浓度的TPT对实验组H446细胞的抑制率明显低于转染前及阴性对照的H446细胞（P〈0．01）。结论脂质体介导的人工合成siRNA瞬时转染可有效抑制H446细胞的TopⅠ表达，明显降低细胞对TPT的敏感性。

肉色香蘑子实体提取物的体外抗氧化与抗肿瘤活性研究

以肉色香蘑子实体为材料,采用不同有机溶剂萃取子实体干粉,除多糖外,各有机相提取物的得率为:乙醇相>石油醚相>乙酸乙酯相。以叔丁基羟基茴香醚(BHA)为阳性对照,通过抑制1,1-二苯代苦味肼基(DPPH)自由基实验和清除超氧阴离子自由基实验,对各提取物的体外抗氧化活性进行测定,结果显示:各有机相提取物和多糖均具有不同程度的抗氧化活性,以乙酸乙酯相、乙醇相提取物的抗氧化活性最强。以抗肿瘤药物顺铂为阳性对照,采用MTT法对各提取物的体外抗肿瘤活性进行检测,结果表明:各相提取物均具不同程度的抗肿瘤活性,其中乙酸乙酯相的抗肿瘤活性最强,达到82.7%,显著(P<0.05)高于阳性对照;其次为多糖,同浓度下与顺铂较接近。综上所述,肉色香蘑子实体含丰富的抗氧化、抗肿瘤活性成分。