血管性血友病因子、整合素β_3在人肺癌细胞H460中的表达及其与肿瘤转移的相关性

背景与目的:血管性血友病因子(von Willebr and factor,vWF)、整合素β3(integrinβ3)与肿瘤转移的机制目前研究不清楚。本研究目的是观察vWF与integrinβ3在人肺癌细胞H460中的表达,人肺癌细胞H460与vWF黏附的关系,两因子与肿瘤轻移的相关性及vWF与integrinβ3的相互关系。方法:①应用免疫组化技术观察vWF及integrinβ3在人肺癌细胞株H460的表达;②联合应用vWF黏附实验、抗体抑制实验及MTT法,观察vWF及integrinβ3与人肺癌细胞H460的黏附,及vWF与integrinβ3的相互关系。结果:①免疫组化结果显示H460细胞均表达vWF及integrinβ3。②vWF可以与H460细胞黏附,Anti-integrinβ3抑制后这种黏附降低,A值由1.59±0.06降到0.55±0.03,(P=0.01619),Anti-vWF抑制后这种黏附也降低,A值由1.60±0.06降到0.54±0.03,(P=0.01598),两者抑制黏附效果相同。结论:H460细胞表达vWF及integrinβ3,vWF可以与H460细胞黏附,vWF可能通过与integrinβ3结合发挥黏附作用,从而促进肿瘤细胞转移。

肺癌细胞株A549的常见肿瘤干细胞抗原分析和细胞分选比较

背景:多项研究表明癌症有可能是起源于肿瘤组织内一个细胞亚群即肿瘤干细胞,近期的研究发现肺癌内也存在肿瘤干细胞,但肺癌内存在的肿瘤干细胞的表型目前仍未取得一致。目的:对人类非小细胞肺癌细胞株A549通过目前最常见的肿瘤干细胞表面抗原进行全面系统分析。方法:A549肺癌细胞株在常规高糖培养环境下,培养1周后进行表面抗原的检测。使用流式细胞术分析A549细胞CD133,CD44,CD24以及ABC运转蛋白家族G2的表达情况,并且通过流式分选的方法分离出CD44^+/CD24+和CD44^+/CD24^-两类亚群细胞,在低黏附、无血清并添加生长因子的环境下观察肿瘤干细胞肿瘤球形成的能力。结果与结论:(1)细胞表型变化:A549细胞中度表达肿瘤干细胞常见的抗原CD44(64.23%)和CD24(58.62%),而CD133和ABC运转蛋白家族G2的表达率很低,均约为0.9%,其中CD133/CD44双阳性的细胞数比例极低。表型为CD44^+/CD24+和CD44^+/CD24^-的细胞群比例分别为54.64%和23.38%。两类亚群细胞在碱性成纤维细胞生长因子及表皮生长因子存在的条件下,无血清培养均可形成肿瘤干细胞肿瘤球;(2)肿瘤球形成效率:CD44^+/CD24+和CD44^+/CD24^-的细胞群其肿瘤干细胞肿瘤球形成效率与A549细胞相比差异无显著性意义;(3)结果说明:CD44和CD24也许并非肺癌肿瘤干细胞的特异性标志,对于肺癌内肿瘤干细胞的表型鉴别还需要更多的研究。

四嗪二甲酰胺对肺癌细胞株A549的体内外作用

为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肺癌细胞株A549增殖、诱导细胞凋亡和体内抗肿瘤活性的作用及其机制,将不同浓度的ZGDHu-1与A549细胞在体外培养,用台盼蓝染色、SRB法、5′-溴-2′脱氧尿苷-ELISA法,观察ZGDHu-1对A549细胞增殖的作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、AnnexinV/PI双标记、Hoechst33258荧光染色等技术检测细胞凋亡。腹腔注射ZGDHu-1后观察其对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。用RT-PCR和流式细胞术观察A549细胞bcl-2,bax,p53基因和蛋白质的表达改变。结果表明,ZGDHu-1能抑制A549细胞的增殖和活力,呈现作用时间和剂量的依赖关系。A549细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期;出现DNA片段化,亚G1峰显著增加,AnnexinV+/PI-表达升高,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等。ZGDHu-1以10,20及40mg.kg-1剂量给裸鼠体内用药14d后,移植瘤生长抑制率分别为43.7%,56.9%和60.0%。A549细胞经ZGDHu-1作用后,bcl-2基因和蛋白有所下调,但主要是上调bax基因和蛋白,导致bax/bcl-2比值明显增高,p53基因和蛋白表达也上调,均呈现剂量依赖性。ZGDHu-1在体内能明显抑制移植瘤的生长,体外通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞增殖,其机制可能与上调bax和p53基因的表达有关。

六神丸对肝癌BEL7402、肺癌A549和白血病HL60的体外抗肿瘤作用

目的研究六神丸对肿瘤细胞生长的影响。方法采用MTT法,对六神丸进行体外抗肿瘤活性的研究。结果显示六神丸对人癌细胞系,白血病细胞株HL60、肝癌BEL7402H和肺癌A549均有不同程度抑制作用(P<0.01),其中高浓度组对白血病细胞株HL60、肝癌BEL7402H、肺癌A549的抑制率分别达到87.4%、91.3%、80.0%。结论六神丸在实验给药浓度下对上述3种人癌细胞的生长具有一定的抑制作用。

华蟾素对非小细胞肺癌细胞株A549细胞增殖及PTEN/AKT/mTOR信号通路表达的影响

目的:观察华蟾素对肺癌细胞A549及PTEN/AKT/mTOR信号通路蛋白表达的影响。方法:在培养肺癌细胞株NCI-A549中分别加入不同浓度的华蟾素,应用细胞计数试剂盒-8检测24、48、72 h后细胞增殖活力,Ki67及EdU检测72 h细胞增殖活力,免疫印迹法检测磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白以及磷酸化第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因(phosphorylated-phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,p-PTEN)蛋白表达。结果:0.2μg/mL华蟾素作用于A549细胞株48 h后显示明显抑制增殖作用(P<0.01),0.8μg/mL华蟾素处理12 h后均具有不同程度抑制增殖作用(P<0.05~P<0.01)。不同浓度华蟾素作用于细胞72 h后,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-S6、p-PTEN表达量均较对照组下降(P<0.05~P<0.01),而PI3K、AKT、mTOR、S6及PTEN表达量与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:华蟾素可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白磷酸化,抑制肺癌细胞A549的增殖。

高良姜素对肺癌肿瘤细胞DNA拓扑异构酶的抑制及细胞杀伤作用

目的:探讨高良姜素对肺癌肿瘤细胞DNA拓扑异构酶(Topo I)的活性的影响及对肺癌肿瘤细胞株A549和H46生长的抑制作用。方法:采用MTT法研究高良姜素对肺癌肿瘤细胞株A549和H46生长的抑制作用,利用琼脂糖凝胶电泳法测定高良姜素对Topo I活性的影响,在此基础上通过荧光光谱和分子对接研究高良姜素与Topo I的相互作用机制,最后进一步探讨高良姜素对Topo I结构的影响。结果:高良姜素对肺癌肿瘤细胞株A549和H46的生长起抑制作用(半抑制率IC50分别为0.221 mmol/L和0.173 mmol/L);琼脂糖凝胶电泳显示高良姜素对Topo I的活性有较好的抑制作用;荧光光谱分析显示高良姜素能显著猝灭Topo I的荧光,且疏水作用力是二者相互作用的主要驱动力;圆二色谱分析表明高良姜素诱导Topo I构象的解折叠,使α-螺旋含量增加,而不利于其形成活性中心,进而导致Topo I活性的降低;分子模拟结果表明:高良姜素能够优先结合到Topo I的活性中心附近,并与催化基团Arg364和Asn352形成氢键。结论:高良姜素能够抑制Topo I的活性,而使肿瘤细胞DNA单链解旋的速率降低,从而在诱导肺癌肿瘤细胞株A549和H46凋亡的过程中起重要作用。

白英甾体总生物碱对人肺癌细胞A549裸鼠异种移植瘤的药效研究

目的探讨白英抗肿瘤有效部位对人肺癌细胞A549裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用及作用强度。方法在裸鼠腹腔内接种人肺癌细胞A549细胞株复制肿瘤模型,给予阳性对照药紫杉醇和白英甾体总生物碱干预后,测量肿瘤体积和肿瘤质量,计算肿瘤生长抑制率,比较组间抗肿瘤药效强度。结果白英低、中、高剂量组(12,24,48 mg·kg-1)的相对肿瘤增殖率(T/C)分别为85.52%、60.64%、45.24%,抑瘤率分别为2.35%、49.79%、48.93%,而相同条件下,紫杉醇组(8 mg·kg-1)的T/C和抑瘤率分别为14.68%、82.59%。紫杉醇有明显的抗肿瘤作用,白英甾体总生物碱均有一定的抗肿瘤作用,其中中、高剂量组抗肿瘤作用更明显。结论白英甾体总生物碱对人肺癌细胞A549裸鼠异种移植肿瘤的生长具有抑制作用。

槲皮素抑制肺癌肿瘤细胞的生长和转移的机制

目的:探讨基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases 9,MMP-9)抑制剂槲皮素对肺癌肿瘤细胞的生长和转移抑制的机制。方法:采用酶联免疫吸附测定法和酶抑制动力学方法研究槲皮素对MMP-9的抑制作用和抑制动力学,MTT分析槲皮素及槲皮素联合组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 1,TIMP-1)对肺癌肿瘤细胞株A549的生长和转移的抑制作用,RT-PCR法和Western印迹研究槲皮素对肺癌肿瘤细胞中MMP-9 m RNA,MMP-9蛋白和TGF-β1蛋白表达水平的影响。结果:槲皮素能够诱导肺癌肿瘤细胞A549的凋亡,槲皮素是一种可逆的竞争型MMP-9抑制剂(IC50为5.25μmol/L,抑制常数Ki为2.18μmol/L);随着槲皮素摩尔浓度的增加,MMP-9 m RNA、MMP-9蛋白和TGF-β1蛋白表达均呈现降低趋势;经过槲皮素干预后,肿瘤细胞穿过人工基底膜的能力减弱;低摩尔浓度的槲皮素与TIMP-1联合使用对肺癌肿瘤细胞A549的生长的抑制作用具有协同作用。结论:槲皮素是一个竞争性的MMP-9抑制剂,能够诱导MMP-9的活性降低,并导致MMP-9 m RNA,MMP-9蛋白和TGF-β1蛋白表达的降低,最终对肺癌肿瘤细胞株A549的凋亡起重要作用。

脐血来源树突状细胞增强CIK细胞对肺癌细胞株的杀伤作用

目的探讨肺癌细胞株A549肿瘤冻融抗原负荷脐血来源树突状细胞(DCs)与CIK细胞混合培养后对A549细胞杀伤活性的影响作用。方法取对数生长期的A549细胞制备肿瘤抗原(Ag),用脐血单个核细胞(CBMC)分别制备DCs和CIK细胞;用负荷Ag的DCs和CIK细胞共培养,诱导Ag-DC-CIK细胞。用流式细胞术检测DC免疫表型,MTT法检测CBMC、CIK、Ag-CIK和Ag-DC-CIK对A549肿瘤细胞株的杀伤活性。结果脐血DCs高表达CD86、CD40,中度表达CD83和CD80,低表达CD11c。实验组细胞(Ag-DC-CIK)对A549细胞的杀伤能力(62%)明显高于对照组(P<0.01),结论肿瘤抗原负荷的DCs能增强CIK细胞对靶细胞的杀伤活性,为DCs的免疫治疗提供了新的思路。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞的杀伤作用研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR)在肺癌细胞株A549中的表达及TRAIL对肺癌细胞的杀伤作用,探讨TRAIL治疗肺癌的可行性。方法采用RTPCR检测非小细胞肺癌细胞株A549TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL处理A549,MTT法检测药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。采用不同浓度TRAIL与不同浓度的化疗药物、中药联合作用于A549,观察其疗效。结果肺癌细胞株A549中有DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。经TRAIL(100μg/L)处理48h,肺癌细胞凋亡发生率约5%。TRAIL联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。结论A549中存在TRAILR类型的表达差异。TRAIL可诱导A549凋亡,联合化疗药物、中药可显著增强A549的凋亡率。

ATM蛋白在不同肺癌细胞株中表达差异与放射敏感性关系的研究

目的 通过对ATM蛋白在不同肺癌细胞株中表达差异与放射敏感性关系的研究，为下一步研究打下基础。方法利用细胞集落形成实验研究肺癌细胞株A549、NCI—H446的放射敏感性差异，并结合免疫荧光实验和激光共聚焦扫描（LSCM）技术来探讨两细胞株中ATM蛋白的表达差异与放射敏感性之间的关系。结果集落形成实验中，在接受2、4、6、8Gy剂量照射时，A549和NCI—H446两肺癌细胞株的存活分数分别为81．0％、32．4％、12．0％、3．5％和52．4％、17．0％、3．2％、0．7％。ATM蛋白定位于细胞浆和胞核；利用LSCM分析两细胞株中ATM蛋白的表达差异，A549细胞ATM蛋白荧光强度（71．188＋13．379）较NCI-H446细胞（47．478±19．032）明显增强（P〈0．0001），有统计学意义。结论两肺癌细胞株A549和NCI-H446具有放射敏感性差异，ATM蛋白在两细胞株中的表达亦有差异显著性，表明其表达量可能与放射敏感性呈负相关。

CIK细胞对人肺腺癌A549/DDP耐药细胞株的抗增殖及诱导凋亡形态学研究

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对A549/DDP肺癌耐药细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用。方法应用细胞计数法设计细胞浓度,通过相差显微镜下观察CIK细胞对A549/DDP肺癌耐药细胞株形态学影响。结果随着CIK细胞与肺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强,CIK细胞作用于肺癌细胞24h后,形态学观察肺癌细胞发生凋亡或坏死。结论体外制备的CIK细胞对肺癌耐药细胞株A549/DDP具有抑制增殖和促进凋亡作用。

金花茶种子对体外培养不同肿瘤细胞增殖作用的影响

目的观察金花茶种子95%乙醇提取物及95%乙醇提取物的乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水溶部分3个极性部位对体外培养不同肿瘤细胞增殖作用的影响。方法用RPMI1640培养基,常规传代培养人肺癌A549细胞、乳腺癌MCF-7细胞。采用噻唑蓝比色法(MTT)检测A549细胞和MCF-7细胞活性。结果金花茶种子醇提取物部分、正丁醇部分和水溶部分对A549细胞和MCF-7细胞增殖均有抑制作用,其IC50分别为95.2,99.06,107.72μg/ml;215.7,200.35,203.24μg/ml,且均具有剂量依赖性的抑制作用。结论金花茶种子95%乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分为其抗癌活性的有效部位,并且对A549细胞增值的活性更强。

油茶籽提取物对体外培养不同肿瘤细胞增殖的抑制作用

目的:观察油茶籽不同溶剂提取物(95%乙醇提取物、水提取物、60%丙酮-水提取物)对体外培养肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法:常规传代培养人肺癌细胞株(A549)、人胃癌细胞株(SGC-7901)和人黑色素细胞瘤(A375),采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活性。结果:油茶籽丙酮-水提取物、醇提取物和水提取物对体外培养的A549、SGC-7901和A375细胞在7.8125~500μg/mL范围内均具有剂量依赖性的抑制作用。阳性对照药甲氨蝶呤和硫酸长春新碱在0.1~10μg/mL时亦呈剂量依赖性地抑制3种细胞的增殖。结论:3种肿瘤细胞体外增殖抑制作用强弱为油茶籽丙酮-水提取物>油茶籽醇提取物>油茶籽水提取物。

人参皂甙对肺癌细胞和血管内皮细胞增生、凋亡及其周期的影响

目的:探讨中药20(R) 人参皂甙Rg3(Rg3)对肺癌细胞和血管内皮细胞增生、凋亡以及细胞周期的影响。方法:进行人肺腺癌细胞株A549、人脐静脉血管内皮HUVEC304细胞培养,不同浓度Rg3干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,了解不同浓度Rg3对上述细胞增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果: 3×10 6mol/L的Rg3可导致A549细胞明显凋亡,凋亡率为29. 8%,与对照组( 15. 0% )相比差异有统计学意义(P<0. 05)。Rg3对A549细胞周期的影响无显著差异。1×10 4 mol/L的Rg3对内皮细胞的生长抑制率为12. 53%,显著高于其它组(P<0. 05),不同浓度Rg3对条件培养液(CM)诱导的血管内皮细胞的增生均有明显的抑制作用(P<0. 05),电镜下可见10 6 mol/L浓度的Rg3可使CM诱导的内皮细胞出现凋亡小体。结论:适当浓度的Rg3有抗肿瘤作用和抑制肿瘤新生血管生成的作用。

TNFα联合VP16对肺腺癌细胞株抑制、粘附分子表达及细胞周期的影响

目的 研究肿瘤坏死因子 (TNFα)和足叶乙甙 (VP16 )联合对肺癌细胞包株的作用及其机制。方法 用MTT法检测不同浓度的TNFα、VP16及TNFα联合VP16对人肺癌细胞系A5 4 9的细胞毒作用以及用间接荧光标记法、流式细胞仪观察TNFα、VP16及TNFα联合VP16对A5 4 9的细胞周期、粘附分子表达的影响。结果 TNFα、VP16对A5 4 9细胞的生长抑制作用有剂量依赖关系 ,而TNFα联合VP16对A5 4 9抑制作用较TNFα、VP16作用显著 (P <0 .0 1)。TNFα、TNFα联合VP16能上调CD5 4表达 ,与VP16均能上调CD95表达 ,而粘附分子CD11α、CD18、CD4 0、CD80、CD137等用药后仍不表达。对细胞周期用药后G2 期明显下降 (13.2 %下降至 3.0 % ) ,S期上升 (2 7.3%上升至 4 2 .5 % )。结论 TNFα联合VP16增加A5 4 9的抑制率 ,增强CD5 4、CD95表达。推测TNFα联合VP16对A5 4 9细胞的作用是通过抑制DNA合成及有丝分裂 ,使G0 +G1+S期不能及时转至G2 。

肺癌肿瘤抑制因子-1在肿瘤中的研究进展

肺癌肿瘤抑制因子-1（tumor suppressor in lung cancer 1,TSLC1）是2001年Pletcher等[1]通过物理和测序绘图方法,在大量的DNA序列中从人工酵母染色体上分离出1.6 Mb片段,转染到非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞株A549中,导入裸鼠体内后能完全抑制肿瘤生长及转移作用,推测其抑癌作用是通过细胞-细胞或细胞-亚细胞间的相互作用。Murakami等[2]于2002年通过功能性互补方法,

荷肿瘤抗原的DC细胞增强CD3AK细胞特异杀伤作用的研究

目的 探讨肺癌细胞株A549的肿瘤冻融抗原（Ag）负荷脐血来源树突状细胞（DC）（Ag＋DC）与CD3AK细胞混合培养制备的Ag＋DC＋CD3AK对肺癌细胞株A549特异杀伤活性的影响。方法 用脐带血单个核细胞（UBMC）分别制备DC细胞、CD3AK细胞，用肺癌细胞株A549的制备肿瘤抗原（Ag），用Ag负荷DC制备Ag＋DC，再把Ag＋DC和CD3AK共培养制备Ag＋DC＋cD3AK细胞；用MTT法检测不同效应细胞：UBMC、CD3AK细胞，Ag＋CD3AK和Ag＋DC＋CD3AK细胞对A549肺癌细胞株的杀伤活性。结果 各种效应细胞对A549细胞的杀伤活性分别是：Ag＋DC＋CD3AK（62．11％）〉Ag＋CD3AK（50．34％）〉CD3AK（45．91％）〉UBMC（34．35％），而且Ag＋CD3AK组的杀伤活性高于CD3AK组（P〈0．05）；Ag＋DC＋CD3AK组的杀伤活性更明显的高于CD3AK组（P〈0．01）。结论 Ag能增强CD3AK细胞对亲本靶细胞的特异杀伤活性，肿瘤抗原负荷的DC（Ag＋DC）能进一步增强CD3AK细胞对亲本靶细胞的特异杀伤活性，为CD3AK细胞的特异免疫治疗的临床应用提供了基础资料。

松节藻抗肿瘤活性

目的对松节藻中得到的10种化合物进行体外细胞毒活性筛选,并对其醇提取物进行体内抑瘤活性研究。方法采用碘酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法和MTT法对10种化合物进行细胞毒活性筛选;用S180荷瘤小鼠模型进行松节藻醇提取物的体内抗肿瘤活性评价,分别测定半数致死量(LD50)、抑瘤率、胸腺指数、脾指数、脾淋巴细胞增殖活性(MTT法)、免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和脾淋巴细胞凋亡率等指标,应用软件SPSS进行数据处理。结果体外活性筛选实验表明4,4′-亚甲基-二(5,6-二溴-1,2-二苯酚)()、3-溴-4-[2,3-二溴-4,5-二羟基苯基]甲基-5-(甲氧基甲基)-1,2-二苯酚()、3-溴-4,5-二(2,3-二溴-4,5-二羟基苯甲基)-1,2-二苯酚()、二(2,3-二溴-4,5-二羟基苯甲基)醚()和3-溴-4-[2,3-二溴-4,5-二羟基苯基]甲基-5-(乙氧基)-1,2-二苯酚()5种单体化合物对人肺癌细胞株A-549具有一定的细胞毒活性。松节藻醇提取物中剂量(1g/kg)组表现出较高的抑瘤率,但中剂量组胸腺指数及脾指数均有所升高;松节藻醇提取物各组均可较好抑制脾淋巴细胞增殖;各组免疫球蛋白IgA和IgG无明显变化,而松节藻醇提取物中剂量组IgM含量有明显升高;中、高剂量组脾淋巴细胞凋亡率显著升高。结论从松节藻中提取的部分化合物表现出一定的细胞毒活性;其醇提取物对肿瘤细胞有一定的抑制作用,并可增强机体免疫功能。