小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用

[目的]探讨小白菊内酯(Par)对人肺癌A-549细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用及其机制.[方法]应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染色荧光显微镜观察Par作用前后人肺癌A-549细胞的形态学变化;应用流式细胞术(FCM)检测Par作用之后肿瘤细胞周期分布及诱导凋亡的情况;应用免疫细胞化学技术检测Par作用前后蛋白阳性表达变化情况,并观察Par对人肺癌A-549细胞株抑制增殖及诱导凋亡的作用机制.[结果]倒置显微镜观察结果显示,实验组细胞体积缩小、变圆,核染色质聚集成团,细胞之间的连接疏松,贴壁不牢,易脱落.HE染色光学显微镜观察结果显示,实验组细胞体积变小,数目减少,可见部分细胞核固缩碎裂,部分细胞凋亡.AO/EB双染色荧光显微镜观察结果显示,对照组细胞呈绿色荧光,而实验组中早期凋亡细胞呈黄绿色荧光,随着Par作用时间延长,可见呈橘红色荧光的晚期凋亡细胞及坏死细胞.流式细胞术检测结果显示,G0/G1期细胞数量减少,而S期和G2/M期细胞数量明显增多(P<0.05).免疫细胞化学技术检测结果显示,实验组细胞Bcl-2,Ki-67,Livin,Survivin及核转录因子kappa B(NF-κB)表达明显降低(P<0.05).[结论]Par对人肺癌A-549细胞有明显的抑制增殖作用,其机制可能与细胞周期发生S期和G2/M期阻滞有关.Par作用于人肺癌A-549细胞株后,可诱导细胞凋亡,其机制是通过死亡受体通路及线粒体通路来完成的,NF-κB可能参与Par诱导人肺癌A-549细胞凋亡的作用.

沙漠绢蒿黄酮抑制肺癌A-549细胞增殖

目的:研究从沙漠绢蒿中得到的黄酮类化合物体外对肺癌A-549细胞增殖的影响。方法:利用硅胶柱色谱等方法分离纯化6种黄酮类化合物,分别为5,7,4'-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7-二羟基-6,3',4',5'-四甲氧基黄酮、5,7,4'-三羟基-6,3',5'-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-6,3',4'-三甲氧基黄酮、槲皮万寿菊素-3,6-二甲醚-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷-(3'-O-7″)-槲皮素-3″-甲醚;采用MTT法测定6种黄酮类化合物对肺癌A-549细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果:受试的6种黄酮类化合物中的5种化合物对肺癌A-549细胞增殖具有明显抑制作用,其抑制率与化合物浓度呈一定的相关性;流式细胞仪检测发现其中2种化合物(5,7,4'-三羟基-6-甲氧基黄酮和5,7,4'-三羟基-6,3',5'-三甲氧基黄酮)使细胞周期分别阻滞于G1和G2期,另1种化合物(5,7-二羟基-6,3',4'-三甲氧基黄酮)可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞抑制A-549细胞增殖。结论:沙漠绢蒿黄酮对人肺癌细胞株A-549增殖具有明显抑制作用,使细胞发生周期阻滞或凋亡。

小白菊内酯对人肺癌A-549细胞周期变化和凋亡通路的影响

目的:研究小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用及其机制,为研发新型抗肿瘤中药奠定坚实的基础。方法:应用MTT法测定小白菊内酯对肺癌细胞的毒性作用和抑制增殖作用;应用倒置显微镜、Annexin V-FITC/碘化丙锭(PI)染色荧光显微镜观察药物作用前后人肺癌A-549细胞的形态学变化;应用活性氧(ROS)检测药物作用后细胞内活性氧的水平,以及活性氧含量与细胞凋亡之间的关系;应用免疫细胞化学技术检测药物作用前后蛋白阳性表达变化的情况并进一步探讨小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株抑制增殖和诱导凋亡的作用机制。结果:(1)MTT法检测结果显示:小白菊内酯在不同浓度(5mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、55 mg/L、60 mg/L、65 mg/L)对人肺癌A-549细胞有不同程度的生长抑制作用,并呈现出浓度和时间梯度依赖性,当药物终浓度为55 mg/L作用时间为48h时,对A-549细胞的抑制率为51.02%。(2)Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜观察发现实验组细胞可见大量绿色荧光细胞和红色凋亡细胞。(3)活性氧检测发现:实验组细胞内活性氧的水平出现明显升高。(4)免疫细胞化学检测法结果显示对照组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax分别为10.07%、11.42%、14.09%、9.75%和11.87%,加入小白菊内酯后(实验组)细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax蛋白的表达为89.24%、85.75%、84.46%、85.14%和84.09%,与对照组相比明显增加,有显著差异。结论:小白菊内酯作用于人肺癌A-549细胞株后,诱导其出现细胞凋亡的改变,它通过死亡受体通路和线粒体通路来完成诱导凋亡的机制,小白菊内酯作用后活性氧水平的增加可能参与诱导细胞凋亡的机制。

人树突状细胞与肺癌细胞A-549融合疫苗生物学特性研究

目的探讨人树突状细胞(DC)与人肺癌细胞A-549融合所得疫苗在制备过程中的生物学特性,总结高效制备融合疫苗的方法。方法应用GM-CSF和IL-4优化的方法制备肺癌患者人外周血单核细胞以获得DC,寻找DC制备率最高时间段;同时应用PKH672GL(绿色荧光)和PKH262GL(红荧光)分别标记DC和肺癌细胞A-549细胞,筛查最佳的融合比例。结果应用GM-CSF和IL4优化法进行DC制备第7天所得百分率为(66.26±5.13)%,高于其他时间(P<0.05);通过对比不同融合比例DC与人肺癌细胞A-549,显示1:1时所取得的融合百分率为(35.15±2.16)%,高于其他比例(P<0.05)。结论在DC制备过程中制备第7天所得DC百分率最高,应选取此时作为提取DC的最佳时间;同时DC与人肺癌细胞A-549以1:1比例相融合所得疫苗百分率最高。

复方益气消征方对肺癌A549细胞影响实验研究

观察复方益气消征方(YQXZF)对A549肺癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和作用机制及干预体外A549细胞的侵袭力的影响。方法:(1)选择4种不同浓度的益气消征方联合5-氟尿嘧啶作用于体外培养的人肺癌细胞A-549细胞,应用Matrigel Boyden小室体外侵袭试验法观察两组药物对A-549细胞侵蚀性的影响;(2)选择5-氟尿嘧啶和益气消征方联合5-氟尿嘧啶灌胃,观察对负瘤小鼠的肿瘤瘤体体积差的影响。结果:(1)4组不同浓度的中药复方联合化疗药组穿膜细胞数均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其中0.5 mg/mL浓度的中药复方联合化疗药组穿膜细胞数最多;(2)对照组小鼠瘤体体积差为:(588.7±70.9)mm^3,益气消征方联合化疗组小鼠瘤体体积差为:(431.5±60.4)mm3(P<0.05),两组数据比较具有统计学差异(P<0.05)。结论:益气消征方联合5-氟尿嘧啶可以减弱人肺癌细胞A-549的侵蚀性,减少负瘤小鼠的瘤体体积差。

微秒脉冲电场联合EPA对A-549细胞活性的影响

针对当前电化学疗法中使用的传统化疗药物对人体正常组织毒副作用较大,中药成分对人体毒副作用小但作用效果弱等问题,选用中药单体成分二十碳五烯酸(EPA)作为抗癌药物,探究微秒脉冲电场对EPA细胞毒性效果的促进作用,以及两者联合作用对肺癌A-549细胞的毒性效果。首先,研究不同场强的脉冲电场作用下细胞膜通透性变化情况,以及不同的药物浓度(50~1 000μmol/L)、电场强度(750~2 000 V/cm)对A-549细胞活性的影响,采用PI染色法检测细胞膜通透性、CCK-8法检测细胞活性;其次,根据检测结果筛选用于后续实验的电场强度区间为1 000~1 500 V/cm, EPA浓度为100~400μmol/L;最后,设置电场联合药物组为实验组,空白对照组、纯药物组、纯电组为对照组,进行了脉冲电场联合EPA对A-549细胞毒性效果的实验研究,并且对脉冲电场联合EPA共同作用后培养24 h(48 h)时A-549细胞活性的变化情况进行了对比分析。研究表明:微秒脉冲电场能够显著增强EPA对A-549细胞的毒性效果,并且EPA浓度为300μmol/L时,脉冲电场和EPA的联合作用效果最佳。微秒脉冲电场对EPA细胞毒性的增强效果可达40%以上,为后续中药成分干预癌症的治疗提供了重要的促进手段。

As_2O_3纳米粒的制备和体外治疗肺癌及其抗转移机制实验

采用改良的溶胶-凝胶法制备系列的As2O3纳米粒,用透射电镜、扫描电镜、能谱仪、图像分析系统等进行表征及特性检测.应用MTT法研究As2O3纳米粒体外对细胞的增殖抑制作用;用流式细胞仪测定As2O3纳米粒及亚砷酸诱导细胞的凋亡率;用免疫组织化学半定量法检测As2O3纳米粒及亚砷酸处理细胞后Bcl-2、Bax、CD44v6和P53基因的表达改变.研究结果表明,制备的As2O3纳米粒在电镜下呈圆形或椭圆形,分散性较好,平均直径约为80 nm、110 nm、130 nm、150 nm和450 nm;体外细胞实验证实As2O3纳米粒抗肺癌A-549细胞的效应强于亚砷酸溶液;免疫组织化学半定量法显示As2O3纳米粒有较强的诱导肺癌细胞凋亡的作用,可能与其改变Bcl-2和Bax基因表达(Bcl-2/Bax比值降低)及促进P53基因的表达、抑制CD44v6基因表达有关.

鼠尾藻多酚的抗肿瘤活性研究

目的研究鼠尾藻Sargassum thunbergii多酚对肺癌A-549细胞和肝癌BEL-7402细胞体外增殖的抑制作用。方法采用有机溶剂提取、透析法获得鼠尾藻多酚STK1(相对分子质量>1×104)和STK2(相对分子质量<1×104),采用磺酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法检测体外细胞增殖抑制率。结果STK1在质量浓度为87.5μg/mL时,对A-549和BEL-7402细胞增殖的抑制率分别为90.7%和89.3%;STK2在质量浓度为340μg/mL时,对A-549和BEL-7402细胞增殖的抑制率分别为89.9%和90.1%。在相同质量浓度下STK1比STK2活性强。结论鼠尾藻多酚化合物(STK1和STK2)对人肺腺癌A549细胞、人肝癌BEL-7402细胞均有较强的抑制作用,相对分子质量高的STK1具有更强的抑制活性。

松节藻抗肿瘤活性

目的对松节藻中得到的10种化合物进行体外细胞毒活性筛选,并对其醇提取物进行体内抑瘤活性研究。方法采用碘酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法和MTT法对10种化合物进行细胞毒活性筛选;用S180荷瘤小鼠模型进行松节藻醇提取物的体内抗肿瘤活性评价,分别测定半数致死量(LD50)、抑瘤率、胸腺指数、脾指数、脾淋巴细胞增殖活性(MTT法)、免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和脾淋巴细胞凋亡率等指标,应用软件SPSS进行数据处理。结果体外活性筛选实验表明4,4′-亚甲基-二(5,6-二溴-1,2-二苯酚)()、3-溴-4-[2,3-二溴-4,5-二羟基苯基]甲基-5-(甲氧基甲基)-1,2-二苯酚()、3-溴-4,5-二(2,3-二溴-4,5-二羟基苯甲基)-1,2-二苯酚()、二(2,3-二溴-4,5-二羟基苯甲基)醚()和3-溴-4-[2,3-二溴-4,5-二羟基苯基]甲基-5-(乙氧基)-1,2-二苯酚()5种单体化合物对人肺癌细胞株A-549具有一定的细胞毒活性。松节藻醇提取物中剂量(1g/kg)组表现出较高的抑瘤率,但中剂量组胸腺指数及脾指数均有所升高;松节藻醇提取物各组均可较好抑制脾淋巴细胞增殖;各组免疫球蛋白IgA和IgG无明显变化,而松节藻醇提取物中剂量组IgM含量有明显升高;中、高剂量组脾淋巴细胞凋亡率显著升高。结论从松节藻中提取的部分化合物表现出一定的细胞毒活性;其醇提取物对肿瘤细胞有一定的抑制作用,并可增强机体免疫功能。