肺癌p14ARF和p16INK4a基因协同表达缺失及其意义

目的 :研究抑癌基因位点INK4a ARF在肺肿瘤细胞中的表达状况 ,揭示p14ARF和p16INK4a协同表达缺失与肺癌发生发展的相关性。方法 :用RT PCR和Westernblot对 6株肺癌细胞 (SPC A 1,Calu 1,H44 6 ,SH77,A5 49,H46 0 )的INK4a ARF基因位点在mRNA、蛋白质水平上进行检测 ,对PCR产物进行纯化和测序分析。结果 :6株肺癌细胞中 ,有 3株细胞 (H46 0 ,Calu 1,A5 49)的p16INK4a基因表达缺失 ,其中 ,Calu 1表达正常p14ARF的mRNA ,而在H46 0和H5 49这两株非小细胞肺癌中 ,p14ARF和p16INK4a发生协同表达缺失。结论 :p14ARF基因与p16INK4a一样 ,是肺肿瘤细胞中的失活靶点之一。揭示了p14ARF缺失导致p5

p14^(ARF)基因在肺癌中的表达及意义

目的:探讨p14ARF基因在肺癌中的表达及意义。方法:采用免疫组化S-P法,检测60例肺癌及20例正常肺组织中p14ARF蛋白的表达情况。结果:p14ARF在肺癌组织中的阳性率为43.3%,显著低于正常肺组织的95%,两组间差异有显著性(P<0.05);p14ARF与肺癌患者的性别、年龄、组织学类型、分化程度及淋巴结转移等无相关性(P>0.05)。结论:p14ARF的表达缺失在肺癌的发生发展中起重要作用,可作为肺癌基因诊断和治疗的靶点。

野生型p14ARF基因转染对人肺癌细胞生长抑制的实验研究

目的 探讨外源性p14ARF基因能否对体内外生长的肺癌细胞起抑制增殖的作用。方法 选择 4株具有不同基因背景的肺癌细胞系 ,转染人的野生型p14ARF基因。通过RT PCR、免疫组化及Westernblot杂交检测 ,筛选出同时表达p14ARFmRNA及蛋白的阳性克隆。以母细胞及转染空载体细胞为对照 ,比较它们的增殖、细胞周期分布、裸鼠体内成瘤性以及形态学上的差异。结果 三株具有野生型p5 3基因的肺癌细胞在转染p14ARF基因后 ,细胞周期被显著阻滞于G1或G1/G2期 ,增殖受到抑制。结论 外源性野生型p14ARF基因转染能抑制人肺癌细胞的增殖 ,p14ARF基因是人肺癌基因治疗的理想候选基因。

p14^(ARF)基因抑制肿瘤细胞增殖的研究

目的 :从正常人肝细胞系L0 2细胞中扩增人的肿瘤抑制基因 p14 ARF,以研究其对人的多种肿瘤细胞生长的影响。方法 :应用RT -PCR技术 ,从培养的正常人肝细胞系L0 2细胞中扩增出 0 .4Kb的p14 ARFcDNA片段 ,测序正确后插入真核表达载体 pcDNA3上的BamHI和EcoRI位点 ,命名为 pcDNA3ARF。此质粒由脂质体Lipofec tamineTM介导转染肿瘤细胞Hep2、KB、KB -v2 0 0、HepG2、HLE、Huh7以及MCF7和MCF7/ADR ,经G4 18筛选 2周后统计形成的集落数。结果 :经抗生素G4 18筛选 2周后 ,发现p5 3阳性的肿瘤细胞HepG2、Hep2、MCF7形成的集落数较少 ,分别为 5 9± 2 .1,60± 2 .1和 66± 7.0 ,占各自对照组的 4 7% ,5 7% ,5 8% ;而 p5 3异常的肿瘤细胞KB ,HLE ,Huh - 7,则形成相对较多的集落 ,分别为 91± 2 .5 ,4 8± 2 .0 ,4 1± 2 .0 ,占各自对照组的 74 % ,65 % ,80 % ,但是二种p5 3异常的耐药肿瘤细胞株KB -v2 0 0和MCF7/ADR ,形成的集落数最少 ,分别为 13± 2 .0和 2 1± 1.5 ,占各自转染空载体 pcDNA3的对照组的 15 %和 17%。 结论 :p14 ARF能明显抑制 p5 3阳性肿瘤细胞的生长 ,具有 p5 3相关性 ;然而 p14 ARF对 p5 3阴性的耐药肿瘤细胞却具有强烈的抑制作用 ,由此提示 :p14 ARF抑制耐药肿瘤细胞的生长是 p5

非小细胞肺癌中p14^(ARF)与p16^(INK4a)和p53蛋白表达及其相互关系的研究

目的:检测p14ARF、p16INK4a和p53蛋白在非小细胞肺癌中表达情况,对它们在非小细胞肺癌发生过程中的作用及其相互关系进行初步探讨。方法:应用免疫组化方法检测了40例非小细胞肺癌组织标本的p14ARF、p16INK4a和p53基因的表达水平。结果:非小细胞肺癌组织中p14ARF、p16INK4a和p53蛋白总阳性率分别是72.5%,50.0%和52.5%,与癌旁正常组织(分别是95.0%,92.5%,2.5%)有显著性差异(P<0.01);非小细胞肺癌中p14ARF和p53蛋白表达异常与肿瘤分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移情况无显著相关性;p16INK4a蛋白表达水平与组织分化程度相关(P<0.05),但与肿瘤分期、组织类型、淋巴结转移情况无关;p14ARF和p53蛋白在组织中表达呈负相关,r2=-0.475(P<0.01),而p14ARF和p16INK4a蛋白表达无关;p14ARF蛋白在Ⅰ期病例中强阳性(+++)占阳性比例为41.7%,在Ⅲ期中强阳性(+++)比例为10.0%。结论:p14ARF、p16INK4a和p53三个基因在NSCLC发生过程中起重要作用,特别在肿瘤早期可能起到更为重要的作用;p14ARF和p53基因在同一调节通路上;p14ARF、p16INK4a和p53蛋白可以作为非小细胞肺癌早期生物学检测指标。

非小细胞肺癌中p14ARF和mtp53蛋白表达与临床病理参数的关系

目的探讨p14ARF和mtp53蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达与临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测15例正常肺组织、18例癌旁组织和98例NSCLC组织标本中p14ARF和mtp53的表达。结果(1)在正常肺组织、癌旁组织和NSCLC中p14ARF蛋白的阳性表达率分别为93.3%、83.3%、55.1%,mtp53蛋白的阳性表达率分别为6.7%、44.4%、79.6%;p14ARF蛋白和mtp53蛋白在NSCLC中的表达与正常肺组织和癌旁组织比较均有显著性差异(P<0.01);p14ARF蛋白表达与临床病理分期、有无淋巴结转移、有无脉管浸润无关(P>0.05),而与病理分化程度有关(P<0.01);mtp53蛋白表达与临床病理分期、病理分化程度(P<0.01)及有无脉管浸润(P<0.05)有关,而与有无淋巴结转移无关(P>0.05);(2)在NSCLC中,pl4ARF与mtp53蛋白共表达为36.7%,一致性为38.8%,二者表达呈负相关(r=-0.3553,P<0.001)。结论p14ARF表达下调及mtp53表达上调在NSCLC的发生、发展中发挥着一定的作用;联合检测p14ARF和mtp53有助于判断NSCLC的分级和转移情况。

小细胞肺癌p14^(ARF)、p16^(INK4a)蛋白表达及其临床意义

目的 研究p14 ARF、p16INK4a蛋白在小细胞肺癌 (smallcelllungcancer ,SCLC)中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学S P方法检测 2 4例SCLC癌组织标本中两种蛋白表达。结果 2 4例标本中 ,15例p14 ARF蛋白表达阴性( 62 .5 0 %) ,4例p16INK4a蛋白表达阴性 ( 16.67%) ,3例p14 ARF、p16INK4a蛋白表达均阴性 ( 12 .5 0 %)。p14 ARF、p16INK4a蛋白阴性率均与患者性别、年龄、临床分期及淋巴结转移无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 SCLC中p14 ARF、p16INK4a蛋白表达阴性是各自独立的事件 ,可能与SCLC的发生有关 ,其中p14 ARF表达阴性占主要地位。

P14(INK4a/ARF)蛋白在非小细胞肺癌组织中表达的意义

目的 检测非小细胞肺癌组织中P14蛋白的表达 ,研究其预后价值。方法 以P14抗体FL 13 2蛋白对 3 9例患者肺癌组织进行免疫组化染色。结果 3 9例患者中 2 5例 ( 64 .1% )P14蛋白表达阳性 ;临床Ⅰ～Ⅱ期患者的P14蛋白表达率显著高于Ⅲ～Ⅳ期患者 ( 78.0 %比 43 .8% ,P =0 .0 43 ) ;有、无远处转移患者的P14蛋白表达率分别为 78.3 %和 43 .8% ,P =0 .0 43 ;无P14蛋白表达者的 3年生存率明显低于有P14蛋白表达者 ,中位生存期分别为 17月和 45月 ,P =0 .0 2 3 5。结论 肺癌组织中P14蛋白表达阳性的患者有较好的预后 ,检测肺癌组织中P14蛋白表达有助于预测肺癌预后。

抑癌基因p14^(ARF)对慢性粒细胞白血病细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响机制研究

目的探讨抑癌基因p14ARF对慢性粒细胞白血病细胞的增殖、细胞周期及凋亡的的影响机制研究。方法应用慢病毒载体系统,将抑癌基因p14ARF导入慢性粒细胞白血病细胞系及患者来源的慢性粒细胞白血病细胞中,应用WST-8法检测细胞生长存活率,应用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果应用表达p14ARF的VSV-G假构型慢病毒载体可明显抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖,诱导细胞凋亡,但对细胞周期没有明显的影响。结论利用p14ARF基因治疗可明显抑制慢性粒细胞白血病细胞的增殖。

p14ARF基因联合氟尿嘧啶对人结肠癌LOVO细胞的作用

目的观察p14ARF基因转染联合氟尿嘧啶对人结肠癌LOVO细胞的作用。方法采用RT-PCR和Western blot方法检测转染前后LOVO细胞中p14ARF基因的表达。四唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比在不同浓度的氟尿嘧啶作用下转染前后LOVO细胞的增殖情况。结果LOVO细胞呈现p14ARF基因缺失变异。RT-PCR和Western blot法证实转染后LOVO细胞中有p14ARF基因的表达。p14ARF基因转染后细胞增殖受抑,流式细胞仪显示p14ARF基因诱发凋亡。在氟尿嘧啶0.1g/mL的作用下,未转染的LOVO细胞的增殖速度未受影响,而转染后LOVO细胞较未用药时的抑制率增加;氟尿嘧啶1、10、100μg/mL时,对转染前后LOVO细胞均有增殖抑制作用,且呈剂量相关性。氟尿嘧啶对转染后LOVO细胞的抑制率明显高于未转染的LOVO细胞。结论p14ARF基因转染可抑制LOVO细胞增殖。p14ARF基因和氟尿嘧啶联合用于LOVO细胞能够加强氟尿嘧啶的增殖抑制作用,明显提高LOVO细胞对氟尿嘧啶的敏感性。

鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因异常甲基化的研究

目的 通过检测P14肝和P15INK4B基因启动子区甲基化情况,分析其与鼻咽癌发生、发展及临床病理特征的关系,探讨其可能在鼻咽癌临床早期分子生物学诊断和治疗中的作用.方法 运用甲基化特异性聚合酶链式扩增对54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化状态进行检测,比较两者的差异,并分析鼻咽癌组织中两种基因甲基化与患者临床病理特征的关系,以及两种基因甲基化的相关性.结果 鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率分别为20.4%(11/54)和22.2%(12/54),两者总检出率为27.8%(15/54);而正常鼻咽上皮组织中未检测到P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化;两组间P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P<0.01).15例甲基化的癌组织同时两种基因同时甲基化为8例,非甲基化39例.P14ARF和P15INK4B基因甲基化与鼻咽癌的临床病理特征均无明显相关性(均P>0.05).结论 P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化在鼻咽癌的发生、发展中可能存在协同作用,作为鼻咽癌发生的早期事件,有望成为分子生物学早期诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.

非小细胞肺癌组织中Pokemon、P14ARF及E2F1的表达及其临床意义

目的:检测Pokemon、P14ARF及E2F1蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况,探讨其在NSCLC发病中的作用和机制。方法:应用免疫组化方法检测NSCLC组和双正常对照组(即支气管对照组和肺泡对照组)中Pokemon、P14ARF及E2F1蛋白的表达情况,分析其与临床病理资料的关系及各指标间的相关性。结果:Pokemon蛋白在NSCLC组、肺鳞癌组、肺腺癌组中的表达均显著高于双对照组(P<0.05),Pokemon蛋白表达与NSCLC的TNM分期相关(P<0.05);E2F1蛋白在NSCLC组、肺鳞癌组、肺腺癌组中的表达均显著高于双对照组(P<0.05),E2F1蛋白表达与NSCLC的TNM分期和淋巴结转移均有关(P<0.05);P14ARF蛋白在NSCLC组、肺鳞癌组、肺腺癌组中的表达均显著低于双对照组(P<0.05),P14ARF蛋白的表达水平与临床病理资料均无关(P>0.05);Pokemon与P14ARF表达水平呈负相关(r=-0.57,P<0.01),与E2F1表达水平呈正相关(r=0.37,P<0.05),P14ARF与E2F1表达水平呈负相关(r=-0.48,P<0.01)。结论:非小细胞肺癌发病过程中,Pokemon通过拮抗P14ARF调节E2F1表达水平来发挥促癌作用。

联合PTEN、p14^(ARF)、Survivin在肺癌中的检测及治疗意义

目的联合检测PTEN、p14ARF、Survivin在肺癌中的表达及相互关系,为肺癌诊断、监测发展及基因治疗提供理论依据。方法用免疫组织化学法检测2009年1月~2015年12月本院87例支气管肺癌组织和13例正常肺组织中PTEN、p14ARF、Survivin基因的表达及其相关性。结果 PTEN、p14ARF表达在正常肺组织高于肺癌,而Survivin则相反;PTEN、p14ARF表达随肺癌细胞恶性程度增加而减少,而Survivin则相反,且在高、中、低分化各组间表达差异有统计学意义(P<0.01);在临床分期组随临床分期的增大,PTEN、p14ARF表达减少,而Survivin表达增强,且三者在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期表达比较,差异有统计学意义(P<0.01)。PTEN、p14ARF有协同作用(r=0.6489,P<0.01),Survivin与PTEN,与p14ARF互为反作用(r=-0.5743,P<0.01;r=-0.6860,P<0.01)。结论 PTEN、p14ARF和Survivin共同调控肺癌细胞的凋亡和增殖,为三者在肺癌中的联合治疗提供理论依据。

p14ARF基因在大肠癌中的表达及意义

目的:探讨p14ARF基因在大肠癌中的表达及其生物学意义方法:应用免疫组织化学(S-P)法和TdT介导的dUTP缺口末端标记技术原位观察60例大肠癌患者的癌组织、癌旁组织和正常组织中p14ARF基因蛋白的表达和细胞凋亡. 结果:癌组织p14ARF基因的阳性表达相对含量(PU)(9.57±1.03)明显低于癌旁(28.17±5.26,t=2.51,P=0.02<0.05)和正常组织(43.76±7.14,t=3.61,P=0.006<0.01);癌旁凋亡指数(AI)(8.51±2.63%)高于癌组织凋亡指数(AI)(5.65±1.76%, t=2.18.P=0.04<0.05);p14ARF基因蛋白的阳性表达按患者的性别、年龄、肿瘤大小分组比较各组间无明显区别; 按癌组织的分化程度、淋巴结转移和Dukes分期比较,低分化组、有淋巴结转移组和Dukes C+D期组的p14ARF基因蛋白表达分别低于高分化组(7.93±1.89 vs 12.76±2.28, t=2.36,P=0.03<0.05)、无淋巴结转移组(7.21±1.95 vs 13.12±2.33.t=2.34,P=0.03<0.05)和Dukes A+B期组(7.87±1.18 vs 12.03±2.15,t=2.36,P=0.03<0.05). 结论:p14ARF基因在大肠癌组织中表达下调,从而抑制大肠癌的细胞凋亡,这可能是大肠癌发生、发展的机制之一; p14ARF基因的表达下调与大肠癌的恶性生物学行为有关.

p14ARF、E2F-1与肺癌

p14ARF基因和核转录因子E2F-1在细胞周期调控，细胞凋亡和肿瘤发生中具有重要作用。近年来，有研究表明p14ARF在肺癌中的表达率低于正常组织，E2F-1的表达率高于正常组织。本文将就p14ARF、E2F-1与肺癌的关系进行综述。

P14^(ARF)及Survivin在肺结核合并肺癌中的表达

目的研究P14^(ARF)及Survivin在肺结核合并肺癌中的表达,从而为肺结核合并肺癌的早期诊断及治疗提供依据。方法用免疫组织化学SP法检测64例肺结核合并肺癌组织和43例肺结核组织中P14^(ARF)、Survivin的表达。结果 P14^(ARF)表达在肺结核组高于肺结核合并肺癌组,survivin表达在肺结核合并肺癌组高于肺结核组,差异有统计学意义。结论应用P14^(ARF)和Survivin组织学检测结合临床特征有助于肺结核合并肺癌早期诊断并提供新理论依据,以便为患者治疗争取时机。

PTEN P14^(ARF)在肺癌中的表达及意义

目的:研究PTEN、P14ARF在肺癌中的表达及相互关系,从而为肺癌的早期诊断及治疗提供理论依据。方法:用免疫组织化学SP法检测86例支气管肺癌组织和13例正常肺组织中PTEN、P14ARF的表达。结果:PTEN、P14ARF表达在肺癌低于正常肺组织;PTEN、P15ARF随肺癌分化程度增高组织表达强;PTEN、P14ARF呈正相关。结论:PTEN、P14ARF在肺癌细胞的凋亡和增殖中相互作用,二者共同参与肺癌的发生发展,可作为肺癌生物学检测指标且在肺癌治疗中具有使用价值。

肝细胞癌组织STAT3和p14^(ARF)蛋白的表达和相关性研究

目的探讨STAT3和p14ARF蛋白在人肝细胞癌组织中的表达及相关性,分析其与肝细胞癌转移复发的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测60例肝细胞癌组织和癌旁组织中STAT3和p14ARF蛋白的表达情况。结果 STAT3及p14ARF蛋白在60例肝细胞癌及癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。STAT3的表达与脉管癌栓、术后复发、肿瘤直径、肿瘤细胞分化密切相关(P<0.05);p14ARF蛋白的表达与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。STAT3和p14ARF蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.325,P=0.011)。结论 STAT3和p14ARF蛋白在肝细胞癌的发生及发展中起着重要作用。

幽门螺旋杆菌和p14^(ARF)在蒙古族、汉族胃癌患者癌组织中的表达变化及意义

目的探讨幽门螺旋杆菌(Hp)和抑癌基因p14^(ARF)在蒙古族、汉族胃癌患者癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达变化及意义。方法采用免疫组化SP法、改良的Warthin-Starry(W-S)银染色法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测Hp和p14^(ARF)在27例蒙古族胃癌患者和30例汉族胃癌患者癌组织、癌旁组织和正常组织中蛋白和mRNA表达。Spearman相关性分析汉族、蒙古族胃癌患者癌组织中Hp与p14^(ARF)表达的关系。结果p14^(ARF)在蒙古族、汉族胃癌患者癌组织中的表达低于癌旁组织和正常组织,差异有统计学意义(P均<0.05),癌旁组织低于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),p14^(ARF)在蒙古族、汉族人群各组织中的表达差异无统计学意义(P均>0.05)。蒙古族、汉族胃癌患者癌组织中Hp阳性率较高,两民族感染率比较差异无统计学意义(P>0.05)。汉族胃癌患者p14^(ARF)mRNA相对表达量在癌、癌旁、正常组织中两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。蒙古族胃癌患者p14^(ARF)mRNA相对表达量在癌、癌旁、正常组织中两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。蒙古族、汉族胃癌患者p14^(ARF)mRNA相对表达量在癌、癌旁和正常组织中差异无统计学意义(P均>0.05)。Spearman相关性分析显示,汉族、蒙古族胃癌患者癌组织中Hp与p14^(ARF)阳性表达呈负相关(r分别为-0.406、-0.433,P均<0.05)。结论蒙古族、汉族胃癌患者癌组织中p14^(ARF)均呈低表达,Hp阳性率均较高,Hp阳性与p14^(ARF)表达呈负相关关系;Hp与p14^(ARF)在蒙古族、汉族胃癌中的发病机制可能相同,二者可能共同促进胃癌的发生。