肺纤方通过调控HMGB1/TLR2信号通路抑制特发性肺纤维化的实验研究

目的探讨肺纤方通过调控高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)/Toll蛋白受体2(toll protein receptor 2,TLR2)信号通路对特发性肺纤维化的抑制作用。方法选取健康雄性SD大鼠80只,分为对照组16只和造模组64只。造模组采用博来霉素气管注射法建立特发性肺纤维化模型,对照组给予等量生理盐水气管注射。造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、肺纤方低、高浓度组及泼尼松组,各16只。模型组和对照组分别给予生理盐水10 mL/kg,1次/d,灌胃给药;肺纤方低、高浓度组分别给予0.72、2.9 g/mL肺纤方药液10 mL/kg,1次/d,灌胃给药;泼尼松组给予1.0 mg/mL醋酸泼尼松溶液10 mL/kg,1次/d,灌胃给药。所有大鼠均连续给药4周。对大鼠肺纤维化程度、血清血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及肺泡灌洗液炎症因子水平、肺组织HMGB1、TLR2蛋白表达水平进行检测。结果治疗后,与模型组比较,各组大鼠肺纤维化程度评分较低,肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平较低,血清PDGF、TGF-β1水平较低,肺组织HMGB1、TLR2蛋白表达水平较低,且肺纤方低浓度组>泼尼松组>肺纤方高浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺纤方能明显减轻特发性肺纤维化模型大鼠肺纤维化程度,降低血清细胞因子PDGF、TGF-β1水平,抑制肺部炎症反应,且药物浓度越高效果越明显,其作用可能与下调HMGB1/TLR2信号通路活性有关。

肺纤方抗大鼠肺纤维化的实验研究

目的:研究肺纤方与泼尼松对照抗大鼠肺纤维化肺组织病理的影响。方法:采用气管内注入博莱霉素的方法制造大鼠肺纤维化模型,观察造模后14、28、45d模型组、假手术组、肺纤方组、泼尼松组肺组织病理,光镜苏木精-伊红染色观察肺泡炎,光镜三色染色观察肺胶原。结果:肺纤方抗大鼠纤维化在45d尤为突出。结论:肺纤方有显著抗大鼠肺间质纤维化作用。

肺纤方对肺纤维化大鼠肺组织自由基损伤的影响

目的观察肺纤方对博来霉素所致肺纤维化大鼠肺组织自由基损伤的影响,探讨其抗肺纤维化的作用机制。方法 144只健康Wistar大鼠随机分成空白对照组、模型组、阳性对照组及肺纤方高、中、低剂量组,每组24只。除空白对照组外,按Szapiel法建立模型,次日灌胃给药,肺纤方高、中、低剂量组(3.2、1.6、0.8 g/kg)均为10 mL/kg,阳性对照组予醋酸泼尼松混悬液(6 mg/kg),空白对照组与模型组予等量生理盐水,1次/d,给药周期21 d。分别在造模7、21 d后分2次取材,前后期各随机杀检10只。测定肺组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量。结果与模型组比较,肺纤方高、中剂量组均可显著升高肺纤维化大鼠肺组织中GSH-Px和SOD的含量(P<0.05);其中第21日时,肺纤方高剂量组升高SOD的作用最为显著(P<0.01)。与模型组相比,肺纤方高、中剂量组均可显著降低肺纤维化大鼠肺组织中MDA和NO的含量(P<0.05);其中第21日时,肺纤方高剂量组降低NO含量的作用最为显著(P<0.01)。结论肺纤方能不同程度调节大鼠肺纤维化模型体内的自由基代谢,从而缓解肺泡炎程度,减轻大鼠肺纤维化病变,且呈现一定的量效关系。

肺纤方对肺纤维化大鼠血清细胞因子表达的影响

目的观察肺纤方对博来霉素所致肺纤维化大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、血小板衍生生长因子(PDGF)和转化生长因子(TGF-β1)的影响,并探讨其作用机理。方法 144只健康Wistar大鼠随机分成空白组、模型组、阳性组及肺纤方高、中、低剂量组,每组24只。按Szapiel法建立模型,次日灌胃给药。空白组与模型组给予等量生理盐水,阳性组用醋酸泼尼松混悬液(6 mg/kg)灌胃,肺纤方高、中、低剂量组(3.2、1.6、0.8 g/kg)均为10 mL/kg药液灌胃,1次/d,给药21 d。分别在造模后第7、21日后分2次取材,每次随机杀检10只。腹主动脉取血,采用ELISA法检测TNF-α、PDGF和TGF-β1。结果与模型组比较,阳性组和肺纤方各组TGF-β1、PDGF和TNF-α明显降低(P<0.05,P<0.01);其中肺纤方中、高剂量组TGF-β1、PDGF和TNF-α含量的水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论肺纤方能有效降低血清中TGF-β1、PDGF和TNF-α的水平,对博来霉素所致的大鼠肺纤维化具有干预作用,且呈现一定的量效关系。

肺纤方对博莱霉素大鼠肺纤维化模型基质金属蛋白酶1、2及组织金属蛋白酶抑制剂1、2的影响

目的:观察肺纤方抗大鼠肺纤维化肺基质重建的作用。方法:气管内注入博莱霉素制造大鼠肺纤维化模型,观察造模后14、28、45d模型组、假手术组、肺纤方组、泼尼松组血清基质金属蛋白酶1、2及其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1、2的变化。结果:肺纤方可以显著降低血清基质金属蛋白酶1、2及组织金属蛋白酶抑制剂1、2。结论:肺纤方具有抗大鼠肺纤维化基质重建作用。

肺纤方颗粒对盐酸平阳霉素致肺间质纤维化大鼠血清转化生长因子β1和血小板衍生生长因子的影响

目的:观察肺纤方颗粒抗大鼠肺间质纤维化的作用,及其对大鼠血清转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)的影响。方法:72只雄性Wistar大鼠经气管插管灌注盐酸平阳霉素1mg/kg复制大鼠肺间质纤维化模型,随机分入模型组、泼尼松组和肺纤方组,每组24只;15只雄性Wistar大鼠经气管插管灌注等体积生理盐水作为假手术组。造模后24h开始常规灌胃给药,泼尼松组给予醋酸泼尼松5mg/kg,肺纤方组给予肺纤方颗粒1.25g/kg,模型组和假手术组给予等体积生理盐水,1次/d。分别于第14、28、45天取材,假手术组每批5只,其余各组每批8只。检测其肺组织病理改变及血清中TGF-β1和PDGF的水平。结果:与模型组和泼尼松组比较,在第45天时病理检测显示肺纤方组肺间质纤维化的程度较轻;血清TGF-β1和PDGF检测结果显示,模型组大鼠两种因子水平升高,第45天时升高最明显,并高于假手术组(P<0.05)。肺纤方组与泼尼松组的TGF-β1变化与模型组相似(P>0.05),两组间TGF-β1变化比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺纤方组PDGF水平在第14天时与其余各组比较显著升高(P<0.01),然后持续下降,至第45天与假手术组接近(P=0.792);而模型组和泼尼松组PDGF水平皆随时间延长逐渐上升,第45天时均显著高于假手术组(P<0.01)。结论:肺纤方有一定的减轻盐酸平阳霉素致大鼠肺间质纤维化的作用,其作用机制可能与对血清PDGF水平的调节作用有关。

肺纤方对小鼠肺纤维化模型及NIH3T3成纤维细胞作用机制的研究

目的在前期二次造模实验基础上,建立小鼠肺纤维化模型,观察肺纤方对肺纤维化小鼠模型的干预作用,并探讨不同浓度的肺纤方煎剂对体外培养NIH3T3成纤维细胞细胞增殖的影响及可能的作用机制。方法将60只雄性昆明小鼠,随机取出其中50只,气管内雾化吸入博莱霉素(8 mg/kg)造模,造模第10天后再次给予吸入博来霉素(8 mg/kg)二次造模,第25天将其随机分为5组:模型组、甲泼尼龙组、肺纤方高、中、低剂量组,每组10只。其余10只小鼠气管内滴入及灌胃等容生理盐水作为空白对照组。处死后取肺脏标本进行肺组织肺泡炎、纤维化评价方法和肺组织羟脯氨酸(Hyp)测定。培养小鼠NIH3T3成纤维细胞,分为对照组、肺纤方低、中、高剂量组,分别给予生理盐水、低、中、高浓度剂量肺纤方煎剂处理,一段时间后进行平板克隆形成实验和Western blot法测定细胞增殖和CyclinD1、MMP2、TIMP1蛋白的表达水平。结果采用肺纤方各组及甲泼尼龙组小鼠肺泡炎、纤维化评分和Hyp含量均明显低于模型组(P<0.05),且肺纤方各组上述指标值随着肺纤方剂量的增加而降低,但高剂量组与甲泼尼龙组比较,无显著性差异(P>0.05);肺纤方各组具有抑制NIH3T3细胞的增殖能力,且呈时间依赖,但无浓度依赖性;肺纤方各组对CyclinD1和MMP2蛋白的表达均有下调,且一定范围内随药物浓度增加,CyclinD1蛋白表达下调越明显;同时肺纤方各组TIMP1蛋白的表达有所增加,但是差异不显著;而肺纤方各组GAPDH条带灰度比值无明显差异。结论肺纤方能够有效抑制博来霉素致小鼠肺纤维化,同时能抑制NIH3T3细胞的增殖,可能机制为其抑制CyclinD1蛋白表达和改善MMPs/TIMPs系统平衡,但上述效应与药剂浓度无正相关性。

肺纤方提取工艺的优化

目的优化肺纤方提取工艺。方法建立HPLC指纹图谱,对共有峰峰面积进行主成分分析。以主成分综合评分为评价指标,料液比、提取时间、提取次数为影响因素,正交试验优化提取工艺。结果 9批样品指纹图谱中有33个共有峰,6个主成分累积方差贡献率达97.725%。最优条件为12倍量水提取2次,每次1 h,主成分综合评分3.33。结论该方法稳定可行,可用于提取肺纤方。

中药肺纤方防治放射性肺损伤的临床研究

目的:观察肺纤方治疗放射性肺损伤的临床疗效。方法:选择符合放射性肺损伤诊断患者63例,随机分为两组。接受直线加速器治疗后,对照组采取西医对症治疗;治疗组采取口服以中药肺纤方为主方治疗。30 d为1个疗程,2个疗程后观察放射性肺损伤的评定及分级、毒副反应、生活质量等情况。结果:治疗组客观疗效和放射性肺损伤的评定疗效分级优于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组病例治疗后中医症状总积分比较,治疗组中医症候总积分的改善明显优于对照组(P<0.05)。治疗组放疗后毒副反应和生活质量状况评分均优于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肺纤方具有一定的防治放射性肺损伤的作用,可改善肿瘤客观疗效,提高患者生活质量,减轻放疗毒副作用。

肺纤方对博莱霉素致肺间质纤维化大鼠整体状态的影响

目的:观察肺纤方(Feixian Formula)对博来霉素致肺间质纤维化大鼠生存状态的影响。方法:85只雄性Wistar大鼠经气管插管灌注博莱霉素(1mg/kg体质量)复制大鼠肺间质纤维化模型,随机分入模型组29只、泼尼松组28只、肺纤方组28只;15只雄性Wistar大鼠经气管插管灌注等体积生理盐水作为假手术组。造模后24时开始常规每日一次灌胃给药,泼尼松组给予醋酸泼尼松5mg/kg体质量,肺纤方组给予肺纤方颗粒1.25g/kg体质量(相当于生药4.475g/kg体质量),模型组和假手术组给予等体积生理盐水。实验全程观察大鼠生活状态如活泼程度、毛发、饮水量、进食量的变化,有无出血、腹泻、死亡,有无其它异常情况;同时监测大鼠体质量变化。结果:实验全过程中,肺纤方组和假手术组没有死亡大鼠,模型组死亡4只大鼠,泼尼松组死亡2只,P=0.1304;大鼠体质量变化显示模型组体质量增长更快,从第21天开始,模型组大鼠体质量与假手术组比较没有统计学意义,P>0.05;综合评价认为肺纤方组大鼠的整体状态好于模型组和泼尼松组。结论:肺纤方能够改善大鼠的整体状态。

中药肺纤方防治放射性肺损伤的临床研究

目的：研究肺纤方治疗放射性肺损伤的临床疗效。方法：选择2008年1月～2009年1月肿瘤科门诊及病房符合放射性损伤诊断患者63例，采用随机数字法随机分为两组。接受直线加速器治疗后，对照组采取西医对症治疗；治疗组采取口服以中药肺纤方为主方治疗。结果：1．治疗组客观疗效和放射性肺损伤的评定疗效分级优于对照组，两组比较有显著统计学意义（p〈0．05）2．两组病例治疗后两组患者中医症状总积分比治疗前均有显著性差异（P〈0．01），治疗组中医症候总积分的改善明显优于对照组（P（0．05）。3．治疗组放疗后毒副反应和生活质量状况评分均优于对照组，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：肺纤方具有一定的防治放射性肺损伤的作用，可改善肿瘤客观疗效，提高患者生活质量，减轻放疗毒副作用。

肺纤方治疗特发性肺纤维化临床观察

目的:观察肺纤方对特发性肺纤维化(IPF)患者的临床疗效。方法:对54例IPF患者除常规抗感染及吸氧等基本治疗外,分组采用糖皮质激素和肺纤方治疗。2个月为1个疗程,比较两组患者治疗前及治疗后症状、化验结果、胸部影像学等指标的变化。结果:治疗组显效17例,有效10例,无效4例,总有效率为87.1%(95%CI=75.3%～98.9%);对照组显效5例,有效5例,无效13例,总有效率为43.5%(95%CI=23.2%～63.8%);两组综合疗效比较(u=3.053 7),P=0.004 0;治疗组ESR、ALT、AST均较对照组降低(P<0.05或P<0.01),且可以明显改善肺部X线改变。结论:肺纤方治疗特发性肺纤维化(IPF)临床疗效优于糖皮质激素,其收益为OR=0.11(95%CI=0.03～0.43),NNT=2(95%CI=1.46～5.39)。

肺纤方对博来霉素诱导肺纤维化大鼠wnt3a、β-catenin、WIF1和LRP表达的影响

目的观察肺纤方对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠wnt3a、β-catenin、WIF1、LRP表达的影响,探讨其抗肺纤维化的作用机制。方法采用气管插管滴注博来霉素制作肺纤维化大鼠模型。将120只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、泼尼松组和肺纤方高、中、低剂量组,造模次日给予相应药物灌胃。于造模后第14、28日分2批进行动物处理,Western blot检测wnt3a、β-catenin、WIF1的蛋白表达,RT-PCR检测LRP的mRNA表达。结果与假手术组比较,第14、28日模型组大鼠肺组织wnt3a、β-catenin、LRP表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),第28日WIF1表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,肺纤方中剂量组第14、28日大鼠肺组织wnt3a、β-catenin、LRP表达显著降低(P<0.05,P<0.01),WIF1表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论肺纤方具有抗肺纤维化的作用,其机制可能与抑制模型大鼠wnt3a、β-catenin、LRP的过表达和增加WIF1的低表达有关。

肺纤方合泼尼松环磷酰胺治疗特发性肺纤维化20例临床分析

目的探讨肺纤方合泼尼松环磷酰胺治疗特发性肺纤维化的临床疗效。方法将我院2006年1月至2012年12月收治的40例特发性肺纤维化患者分为观察组(n=20)和对照组(n=20),观察组采用肺纤方合泼尼松、环磷酰胺治疗,对照组采用泼尼松、环磷酰胺治疗。结果观察组疗效显著优于对照组(P<0.05)。结论肺纤方合泼尼松、环磷酰胺治疗特发性肺纤维化疗效明显优于单纯西医对照组,能有效减轻患者症状体征,值得临床推广。

艾灸结合肺纤通络方对博莱霉素所致肺纤维化大鼠的治疗效果及对NF-κB/TGF-β_(1)/smad 3信号通路的调控作用

目的探究艾灸结合肺纤通络方对博莱霉素(BLM)所致肺纤维化(PF)大鼠的治疗效果及对NF-κB/TGF-β_(1)/smad 3通路的调控作用。方法从50只大鼠中随机选取10只为对照组,其余40只采用博莱霉素诱导建立PF模型,4只大鼠死亡,其余随机分为PF组、艾灸组、联合组及阳性组,各9只。艾灸组采用艾灸治疗,联合组在艾灸的穴位处滴加5滴肺纤通络方并艾灸至干燥,阳性组给予泼尼松3 mL·kg^(-1),PF组及对照组给予等剂量的生理盐水。连续给药30d后,测量各组血清炎症因子及氧化应激指标水平,观察肺组织病理学变化,检测NF-κB/TGF-β_(1)/smad 3通路蛋白表达情况。结果与对照组比较,PF组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及HYP、GSH水平升高,MDA水平降低,NF-κB、TGF-β_(1)、smad 3 mRNA水平升高,NF-κB、TGF-β_(1)、smad 3蛋白表达上调(P<0.05);与PF组比较,艾灸组、联合组及阳性组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及HYP、GSH水平降低,MDA水平升高,NF-κB、TGF-β_(1)、smad 3 mRNA水平降低,NF-κB、TGF-β_(1)、smad 3蛋白表达下调(P<0.05);与艾灸组比较,联合组及阳性组血清IL-1β、IL-6、TNF-α及HYP、GSH水平降低,MDA水平升高,NF-κB、TGF-β_(1)、smad 3 mRNA水平降低,NF-κB、TGF-β_(1)、smad 3蛋白表达下调(P<0.05);与联合组比较,阳性组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平及HYP、GSH水平降低,MDA水平升高,NF-κB、TGF-β_(1)、smad 3 mRNA水平降低,NF-κB、TGF-β_(1)、smad 3蛋白表达下调(P<0.05)。结论艾灸结合肺纤通络方能够改善BLM所致PF大鼠炎症指标及氧化应激指标,对肺组织起到保护作用,其作用可能与NF-κB/TGF-β_(1)/smad 3通路有关。

肺纤方加减治疗36例特发性肺纤维化患者CT积分改变及生活质量影响

目的:观察肺纤方对特发性肺纤维化(IPF)患者胸部CT积分变化的影响。方法:给予36例IPF患者肺纤方加减口服,方中冬虫夏草使用冬虫夏草菌丝粉胶囊(百令胶囊)代替,每次4粒,配合中药口服,每日2次。观察治疗前后患者CT积分及生活质量的变化。结果:治疗后患者CT积分较治疗前下降,网格影、蜂窝影变化明显(P<0.05);患者生活质量得到一定改善。结论:肺纤方在一定程度上能改善肺肾亏虚,痰瘀阻络证患者的临床症状及体征,减轻患者影像改变,改善患者肺功能,提高其活动耐力及生活质量。

肺纤方提取物干预肺纤维化模型大鼠肺微血管内皮细胞新生血管形成的体外研究

目的探讨肺纤方提取物体外干预肺纤维化微血管生成的作用及机制。方法从肺纤维化模型大鼠分离培养肺微血管内皮细胞,将其等量分为空白组、氯沙坦组、泼尼松组、肺纤方大剂量组、肺纤方中剂量组、肺纤方小剂量组。对各组的迁移细胞及微血管内皮细胞形成的血管进行计数。结果与空白组和泼尼松组相比,肺纤方大、中剂量、氯沙坦均能抑制内皮细胞的迁移(P<0.05)。氯沙坦、肺纤方各剂量均能抑制血管形成(P<0.05),其中肺纤方大剂量几乎完全抑制血管形成。结论肺纤方具有抑制肺纤维化大鼠体外培养的肺微血管内皮细胞的迁移及新生血管形成,从而发挥抗肺纤维化作用。

肺纤方对博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺系数与肺组织病理的影响

目的观察肺纤方对博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺系数和肺组织病理的影响,研究肺纤方对肺间质纤维化的治疗作用。方法雄性W istar大鼠经气管插管灌注博莱霉素(1 mg/kg)复制大鼠肺间质纤维化模型,分为假手术组、模型组、泼尼松组和肺纤方组。造模后24 h开始常规每日1次灌胃给药。造模后第14、28、45天取材,计算肺系数,检测肺组织病理,进行肺组织病理学肺泡炎与肺间质纤维化分级;对Masson染色切片进行胶原纤维的面密度和数密度分析。结果肺纤方组28 d和45 d时肺系数显著低于14 d(P<0.05),而其他各组不同时间点比较没有统计学意义。模型组、泼尼松组、肺纤方组均有肺泡炎和肺间质纤维化改变,45 d时肺纤方组的肺间质纤维化程度较模型组和泼尼松组轻。28 d时,肺纤方组肺泡炎显著低于模型组(P<0.05)。45 d时肺纤方组与模型组比较肺间质纤维化程度明显降低(P<0.05)。定量分析显示胶原纤维的面密度和数密度在45 d时肺纤方组与模型组和泼尼松组比较均显著降低(P<0.05)。结论肺纤方有一定的减轻博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的作用,并能在较短时间内降低博莱霉素致肺间质纤维化大鼠的肺系数。

肺纤方对博莱霉素大鼠肺纤维化层粘连蛋白及Ⅰ、Ⅲ胶原的影响

目的观察肺纤方与强的松对照抗大鼠肺纤维化的作用。方法采用气管内注入博莱霉素制造大鼠肺纤维化模型,观察造模后14、28、45 d模型组、假手术组、肺纤方组、强的松组肺组织匀浆液中层粘连蛋白及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。结果肺纤方显著减轻肺纤维化大鼠层粘连蛋白及Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结论肺纤方有显著抗大鼠肺间质纤维化作用。

肺纤方对博莱霉素肺纤维化大鼠血小板衍生因子、内皮素、血栓素-2的影响

目的探讨活血化瘀药物肺纤方抑制肺间质纤维化大鼠肺组织血管生成和重构的作用机理。方法气管内注入博莱霉素制造大鼠肺纤维化模型,造模后14、28、45 d检测模型组、假手术组、肺纤方组、泼尼松组血清中的血小板衍生因子、内皮素、血栓素。结果肺纤方能够显著降低血清中的血小板衍生因子、内皮素、血栓素。结论肺纤方抗肺纤维化的作用机理,可能与抑制肺间质纤维化大鼠肺组织血管生成和重构育关。