补肾益肺消癥方对肺纤维化大鼠内质网应激及CHOP信号通路关键分子表达的影响

目的:探讨补肾益肺消癥方治疗特发性肺纤维化疗效的作用机制。方法:以博莱霉素致大鼠肺纤维化为动物模型,以吡非尼酮为阳性对照药物,补肾益肺消癥方干预,以透射电镜观察AECⅡ超微结构的变化,Real-time PCR和Western blot检测CHOP信号通路关键分子的基因及蛋白在病变肺组织中含量的变化。结果:透射电镜下与模型组比较,阳性对照组及中药各组弹性纤维、胶原纤维沉积及电子致密物减少,内质网扩张现象减轻。补肾益肺消癥方干预下,PERK、CHOP在蛋白水平和mRAN水平的表达呈下调趋势。结论:补肾益肺消癥方可以干预CHOP凋亡通路关键分子表达,调控肺纤维化大鼠细胞内质网应激,抑制AECⅡ细胞凋亡,阻滞和减缓肺组织的纤维化进程。

补肾益肺消癥方干预肺纤维化大鼠TGFβ信号通路的作用机制

目的:探讨补肾益肺消癥方治疗特发性肺纤维化疗效的作用机制。方法:以博莱霉素致大鼠肺纤维化为动物模型,补肾益肺消癥方进行干预;检测血清中TGF-b1含量的差异、肺组织中TGF-b1R基因表达的改变以及Smad2/3、Smad4蛋白含量的差异。结果:该方可以明显下调IPF大鼠外周血血清中TGF-b1的含量和Smad2、3的表达,对TGF-bR1基因表达无影响。结论:通过调控TGF-b信号传导通路,缓解炎症反应并抑制肺组织纤维化,是补肾益肺消癥方疗效的关键作用机制之一。

不同剂量丹参联合川芎嗪对肺纤维化大鼠的保护作用

目的探讨不同剂量丹参与川芎嗪联合对肺纤维化大鼠的保护作用及机制。方法选取180只健康雄性大白鼠作为研究对象,按其治疗方法将其分为A组、B组、C组、D组、E组和F组,每组30只,A组大鼠予以0.9%氯化钠溶液进行气管灌注,其余5组大鼠均予以博莱霉素气管灌注建立肺纤维化模型。模型建立成功后A组和B组每日予以0.9%氯化钠溶液治疗,C组予地塞米松治疗,D组予以丹参与川芎嗪联合小剂量治疗,E组予以丹参与川芎嗪联合中剂量治疗,F组予以丹参与川芎嗪联合大剂量治疗。治疗后比较不同时间点内各组大鼠间血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、肺组织结缔组织生长因子(CTGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、肺组织羟脯氨酸(HYP)、肺组织蛋白络氨酸激酶-(JAK1)、信号转导与转录活化因子1(STAT1)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6、IL-17的表达水平及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量和肺泡炎症程度及肺纤维化程度。结果较B组而言,C、D、E及F组大鼠TGF-β1、TNF-α、CTGF、bFGF、JAK1、STAT1及ICAM-1含量在治疗第7天、14天和28天时均少于A组,且E组和F组减少程度均大于B组和D组,B组和D组及E组和F组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。较B组而言,C、D、E及F组大鼠其IL-6、IL-17、HYP、MDA、SOD、ColⅠmRNA和ColⅢmRNA含量在治疗第7d、14d和28d时均较A组增多或减少,且E组和F组增加或减少程度均大于B组和D组,B组和D组及E组和F组间比较差异无统计学意义(P<0.05)。较B组而言,C、D、E及F组大鼠其肺泡炎症程度和肺纤维化程度评分在治疗第7天、14天和28天时均较A组低,E组和F组降低程度均大于B组和D组,B组和D组及E组和F组间比较无统计学意义,且随着时间的延长,肺泡炎症和肺纤维化程度逐渐降低(P<0.05)。结论不同剂量丹参联合川芎嗪对肺纤维化大鼠的肺部组织有着一定的保护作用,其主要机制可能为丹参联合川芎嗪可一定程度上抑制肺组织中TGF-β1、TNF-α、ColⅠmRNA及ColⅢmRNA等细胞因子的表达有关。

柴胡渗湿汤对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β_1、NF-κB影响的研究

目的探讨柴胡渗湿汤对肺纤维化模型大鼠肺组织中转化生长因子-β1、核因子-κB表达的影响,揭示其治疗肺纤维化的可能作用机理。方法将90只雄性Wistar大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、泼尼松组、柴胡渗湿汤组、柴胡渗湿汤+泼尼松组,每组18只。除正常对照组外,其余各组以支气管内注入博莱霉素的方法建立肺纤维化动物模型,于造模后第2天给予相应药物干预;于给药后14 d、28 d在光镜下观察部分大鼠肺组织的病理变化情况,并用免疫组化法检测大鼠肺组织中TGF-β1及NF-κB的表达。结果光镜下模型对照组较正常组肺组织炎症细胞浸润、结构破坏、肺纤维化明显,正常对照组大鼠肺组织TGF-β1和NF-κB的含量较模型对照组显著降低(P<0.05),提示造模成功;分别与柴胡渗湿汤相比,模型对照组肺组织TGF-β1和NF-κB的含量显著增高(P<0.05),泼尼松组两种指标的含量差异无统计学意义(P>0.05),而柴胡渗湿汤+泼尼松组两种指标的含量显著降低(P<0.05)。结论柴胡渗湿汤可能通过抑制肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1及NF-κB的表达,从而延缓大鼠肺纤维化的进展。

补肾益肺消癥方对肺纤维化大鼠MMPs基因表达及病理改变的影响

目的探讨补肾益肺消癥方治疗特发性肺纤维化的作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、阴性对照组、阳性对照组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组,以博莱霉素致大鼠肺纤维化模型。阳性对照组给予地塞米松灌胃,空白组、阴性对照组分别给予等量生理盐水,中药小、中、大剂量组分别按成人剂量组5,10,20倍灌胃。通过Real-time PCR检测各组肺组织中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9基因表达情况,HE染色观察大鼠肺组织病理的改变。结果模型组大鼠肺组织中MMP-2基因表达量相比其他各组明显升高,中药治疗组表达量与空白组相近;中药治疗组大鼠肺组织中MMP-9明显高于模型组(P<0.01);肺组织切片HE染色分析结果显示,阳性对照组和中药治疗组肺泡壁轻度增厚,肺泡结构破坏程度较轻,存在成纤维细胞增生,纤维化程度较模型组明显改善。结论补肾益肺消癥方可以缓解免疫应答所导致的炎症反应及细胞外基质蛋白和胶原的沉积,从而抑制肺组织纤维化的进程,达到治疗效果。

桃红四物汤对肺纤维化大鼠血清炎症因子的影响

目的:探讨桃红四物汤对肺纤维化模型大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)表达的影响,探索其治疗肺纤维化的潜在机理。方法 :将50只SPF级雌性大鼠随机分为空白组、模型组、甲泼尼龙组、桃红四物汤低剂量组、桃红四物汤高剂量组,除空白组外,余各组均给予气管内滴注博来霉素的方式建立肺纤维化动物模型,造模24h后每组给予相应药物灌胃。连续灌胃28d后处死大鼠,取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化,腹主动脉采血分离血清,酶联免疫(ELISA)法检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平。结果:与空白组相比,模型组的肺炎程度及肺纤维化程度明显更高,血清TNF-α、IL-1β、IL-6明显升高(P<0.05);与模型组比较,甲泼尼龙组、桃红四物汤低、高剂量组血清TNF-α、IL-1β、IL-6降低(P<0.05);与甲泼尼龙组比较,桃红四物汤低剂量组血清TNF-α、IL-1β、IL-6升高(P<0.05),高剂量组血清TNF-α、IL-1β、IL-6无明显变化(P>0.05)。结论:桃红四物汤可能通过抑制肺纤维化大鼠血清中的炎症因子表达,从而延缓肺纤维化进展。

红芪黄酮气溶胶给药与灌胃给药对肺纤维化大鼠的影响

目的:比较红芪黄酮灌胃给药及红芪黄酮气溶胶给药2种给药方法对大鼠肺纤维化模型(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的治疗作用。方法:选取40只SPF级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、红芪黄酮灌胃给药组及红芪黄酮气溶胶给药组,每组10只。空白组正常饮食喂养,不施加任何处理措施。其余3组大鼠使用博莱霉素气溶胶量化造模。造模后第2天开始给药,红芪黄酮灌胃给药组大鼠灌胃给药(37.41 mg/kg),红芪黄酮气溶胶给药组动物气溶胶给药(气溶胶浓度3.5~4.0 mg/m3,给药时间40 min),其余2组给予蒸馏水,每日1次,共计28天。实验结束,分别检测清醒及麻醉状态下动物肺功能;处死各组大鼠,取部分肺组织,制备匀浆,检测肺脏组织中透明质酸(hyaluronic acid,HA)和层黏连蛋白含量(laminin,LN);另取部分肺组织,分别使用HE染色及Masson染色方法,观察肺组织病理形态。结果:清醒状态及麻醉状态下造模组动物肺功能指标与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,各给药组肺功能相关指标均得到显著改善,且气溶胶给药组改善更为明显。病理切片结果显示,与空白组比较,造模组出现不同程度的异常改变;与造模组比较,各给药组病理形态有显著的改善,且气溶胶给药组作用更为明显。HA、LN含量测定结果显示,与空白组比较,模型组HA、LN含量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);气溶胶给药组与灌胃组比较,气溶胶给药组HA、LN含量均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:气溶胶给药与灌胃给药相比对肺纤维化模型大鼠治疗作用更为显著,气溶胶给药技术对于肺纤维化的治疗具有重要意义。

补肾益肺消癥方对肺纤维化大鼠IL-4信号通路关键分子表达的影响

目的:探讨补肾益肺消癥方治疗特发性肺纤维化疗效的作用机制。方法:以博莱霉素致大鼠肺纤维化(IPF)为动物模型,补肾益肺消癥方(当归、熟地黄、陈皮、法半夏、浙贝母、水蛭、炙甘草)进行干预;通过ELISA检测外周血血清中IL-4含量的差异,Real-time PCR检测肺组织中IL-4受体基因表达的改变,WesternBlot检测肺组织中信号传导子及转录激活子6(STAT6)蛋白含量的差异。结果:补肾益肺消癥方显著下调IPF大鼠外周血血清中IL-4的含量,尤以低剂量组明显(P<0.01);高、低剂量组可显著性增加IL-4受体基因的表达(P<0.05),对STAT6蛋白表达无影响。结论:补肾益肺消癥方可以通过下调IL-4的含量,干预IL-4信号传导通路关键分子的表达,缓解炎症反应,抑制肺组织纤维化进程,达到治疗效果,这可能是该方疗效的作用机制之一。

百草枯中毒致大鼠肺纤维化模型中肺组织的IL-17A表达

目的观察百草枯中毒大鼠血浆和肺组织匀浆中的IL-17A的动态变化,探讨大鼠百草枯中毒肺损伤的机制。方法将雄性SD大鼠24只随机分成百草枯中毒模型组和生理盐水对照组,分别给予20 mg/kg百草枯或等体积生理盐水1次性灌胃染毒,并在给药后7 d和14 d处死大鼠,观察其肺的病理变化。肺组织匀浆和血浆中IL-17A的含量。结果百草枯中毒后大鼠肺部病理切片表现为肺泡炎,肺纤维化等不同程度的肺损伤改变。血浆和组织匀浆中IL-17A在中毒后与对照组大鼠比较明显升高,并随时间变化,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在百草枯中毒肺损伤中,IL-17A可能发挥了重要作用。

肺纤维化(气虚血瘀证)大鼠模型造模方法新探索

[目的]探索内窥镜引导下制作肺纤维化(气虚血瘀证)大鼠模型的新方法。[方法]1)SD大鼠60只,运用内窥镜摄录监视系统及自创的鼠麻醉喉镜,采用无水乙醚吸入法麻醉方式,对大鼠气管内推注药物博莱霉素造肺纤维化模型。2)造模后随机分正常对照组,模型组,芪术合剂组,泼尼松组观察。中药芪术合剂组疗效显著,从以方测证的角度验证肺纤维化(气虚血瘀证)大鼠模型的制作成功。[结果]1)此造模方法具有气管内推注药物靶点准确,成功率高,无外源创伤,保障实验数据的原始性、可靠性,节约时间,提高工作效率,减少标本耗损量,降低实验成本。2)益气活血散结法中药干预以方测证结果表明,该方法制作的模型具有气虚血瘀证的病机特点。[结论]该方法的创新值得在肺系疾病大鼠模型制造实验中推广运用。

间质流膏对博莱霉素致大鼠肺纤维化模型PDGF-BB与α-SMA表达影响随机平行对照研究

[目的]观察间质流膏对博莱霉素致大鼠肺纤维化PDGF-BB与α-SMA表达影响。[方法]使用随机平行对照方法,将96只雄性Wistar清洁级大鼠编号按随机数字表法分为5组,A对照组(12只)、B模型组(28只)、C间质流膏加地塞米松组(28只)、D间质流膏组(28只)、E地塞米松组(28只)。10%水合氯醛大鼠腹腔注射麻醉,额镜直视下气管插管,气管滴入博来霉素生理盐水0.1mL(5mg/kg),滴注后立即将大鼠直立旋转,使药液在肺内分布均匀,复制肺纤维化模型。A、B组生理盐水腹腔注射0.3ml/d。C组间质流膏灌胃(党参24g,黄芪18g,白术、茯苓各12g,沙参20g,水蛭研末冲6g,蜈蚣研末冲2条,丹参21g,桃仁、川芎、地龙各15g,黄芩12g,白花蛇舌草、薏苡仁各30g,蒲公英24g,浙贝15g,莪术12g,山慈菇21g,甘草12g,连翘、鱼腥草各18g)10mL/kg大鼠体重(生药4.6g/10mL),地塞米松腹腔注射1mg/kg,1次/d。D组间质流膏灌胃(生药4.6g/10mL)10mL/kg大鼠体重,1次/d。E地塞米松腹腔注射1mg/kg,1次/d。连续干预4周(28d)。实验第28天A组脱颈椎处死大鼠3只,其他组分别处死大鼠7只,暴露气管,向大鼠右肺灌注10%甲醛溶液,使胸膜展平后将右肺浸入10%甲醛溶液中固定。常规石蜡包埋,切片(4μm)行HE和免疫组化染色。观测光镜下肺组织病理细胞、肺组织PDGFBB、α-SMA。[结果]B模型组肺泡结构破坏,肺泡壁显著增厚,肺间质纤维化瘢痕形成,毛细血管腔闭塞;C间质流膏加地塞米松组肺组织呈轻中度肺纤维化改变,病变范围局限,肺泡间隔胶原沉积较模型组减少;D间质流膏组与激素组比较肺纤维化程度明显减轻,较正常组略有改变。E地塞米松组肺纤维化改变不明显。肺纤维化程度由轻到重依次为:A组>C组>D组>E组>B组。PDGF-BB值,与A组比较,B组各时间段均明显增高(P<0.05);7d组间比较(P<0.01),D组与E组(P>0.05);14d组间比较(P<0.01),D组与E组(P>0.05);21d组间比较(P<0.01),两两比较均(P<0.05);28d组间比较(P<0.01),两两比较均(P>0.05)。[结论]间质流膏可明显降低博莱霉素致大鼠肺纤维化模型PDGF-BB与α-SMA表达。

肺功能检查在博来霉素诱导的大鼠肺纤维化中的实验研究

目的由于条件限制,在许多大鼠疾病模型中无法检测肺功能的变化情况,检测肺纤维化大鼠的肺功能对实验动物的肺功能应用具有重要意义。方法12只健康SD大鼠,随机分成正常对照组和博来霉素组,气管注射博来霉素(5 mg/kg)复制大鼠肺纤维化模型。于第28日腹主动脉放血法处死,比较两组体质量及肺质量,计算肺系数,检测两组大鼠肺功能和肺组织中羟脯氨酸的含量。结果与正常对照组比较,博来霉素组大鼠肺系数明显升高,博来霉素组羟脯氨酸的含量明显升高,同时HE和MASSON病理染色提示大鼠肺纤维化模型复制成功。大鼠肺功能检查结果:用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、50%肺活量的呼气流速(forced expiratory flow,FEF)、最大呼气流量(peak expiratory flow,PEF)均较正常对照组明显降低,且具有统计学意义,另外,博来霉素组FEV0.1/FVC较正常对照组升高。结论大鼠肺纤维化模型中肺功能检测技术基本成熟,可以进一步扩大样本量进行研究。

肺纤维化形成中细胞凋亡与p16蛋白表达的关系

目的分析小鼠肺纤维化(PF)形成中细胞凋亡与p16蛋白表达的关系,探讨特发性肺纤维化(IPF)的发病机制。方法将72只小鼠随机分为模型组、对照组各36只,模型组采用博来霉素导致PF。实验后3、7、14、28d分别处死两组小鼠8只,取出肺组织,采用苏木精—伊红及马松三色染色观察其肺组织病理变化;免疫组化及Western blot法检测肺组织p16蛋白表达;末端细胞凋亡原位标记法检测肺组织细胞凋亡情况。结果与对照组比较,模型组肺组织出现典型纤维化改变,肺泡上皮细胞凋亡指数升高,肺组织p16蛋白表达随时间延长而增强,p16蛋白阳性细胞数量增多(P<0.05或<0.01)。相关分析显示,p16蛋白表达与肺泡上皮细胞凋亡呈正相关(P<0.05)。结论 PF进程存在p16蛋白异常表达,过表达的p16蛋白可能介导肺泡上皮细胞凋亡过程,这可能是最终IPF发生、发展的机制之一。

保肺康颗粒通过调控Wnt/β-catenin信号通路干预大鼠肺纤维化

目的:基于保肺康颗粒对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响,探讨其对于肺纤维化大鼠模型的干预作用。方法:将50只健康大鼠适应性喂养1周后,随机选取8只作为空白组,其余42只大鼠采用常规麻醉后气管内注入硫酸博莱霉素溶液(5 mg·kg^(-1))的方法制备肺纤维化模型,空白组以相同操作方法注入等量生理盐水。造模后第7天,将剩余33只存活的博莱霉素造模大鼠随机剔除1只,其余32只随机分为模型组、醋酸泼尼松组、保肺康低、高剂量组,每组8只。保肺康高、低剂量组分别给予保肺康颗粒27.18,13.59 g·kg^(-1)灌胃,醋酸泼尼松组给予醋酸泼尼松片1.17 mg·kg^(-1)灌胃,空白组和模型组以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续21 d。比较各组大鼠肺顺应性和通气功能、病理学改变和纤维化程度评分、肺组织内Ⅰ型胶原(ColⅠ)和血清内羟脯氨酸(HYP)水平及肺组织中Wnt3a,β-catenin蛋白相对表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠肺功能指标用力肺活量(FVC),用力最大呼气流速(PEF),肺总阻力(RL)和动态顺应性(Cydn)均明显下降(P<0.05,P<0.01),模型组肺组织形态严重毁损,大量连续纤维化灶形成,纤维化严重程度评分显著升高(P<0.01),肺组织内ColⅠ和血清内HYP水平均显著升高(P<0.01),Wnt3a,β-catenin蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,醋酸泼尼松组、保肺康低、高剂量组FVC,PEF,Cydn均明显提高(P<0.05,P<0.01);醋酸泼尼松组、保肺康低、高剂量组病理学表现均有所改善,纤维化程度评分低于模型组(P<0.05,P<0.01),保肺康高、低剂量组评分低于醋酸泼尼松组(P<0.01);醋酸泼尼松组、保肺康低、高剂量组肺组织ColⅠ,HYP水平均低于模型组(P<0.05,P<0.01),保肺康高剂量组ColⅠ水平低于醋酸泼尼松组(P<0.01),保肺康高、低剂量组血清内HYP的水平均低于醋酸泼尼松组(P<0.01);保肺康高剂量组Wnt3a蛋白表达水平低于模型组(P<0.05),醋酸泼尼松组、保肺康低剂量组和保肺康高剂量组β-catenin蛋白表达水平低于模型组(P<0.05,P<0.01),且保肺康高剂量组表达水平低于醋酸泼尼松组(P<0.01)。结论:保肺康颗粒能够减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化,减少胶原沉积,改善肺顺应性,提高肺通气功能,对Wnt/β-catenin信号通路的抑制可能是其机制之一。

不同剂量博来霉素致大鼠肺纤维化模型制备

目的:对比观察不同剂量博来霉素致大鼠肺纤维化模型效果,寻求合理有效的致大鼠肺纤维化造模最佳剂量。方法:选取健康成年清洁级6周龄Wistar大鼠30只(雌雄各半),随机分为对照组(n=6)和博来霉素组(n=24)。博来霉素组各选6只大鼠分别气管内注射不同剂量(2、3、4、5 mg/kg)博来霉素,对照组大鼠给予气管内注射生理盐水,观察大鼠一般状况及死亡率,于28天处死大鼠,取肺组织,制备石蜡切片HE染色,观察各组大鼠肺泡炎及肺纤维化程度。以期筛选出既能成功制备大鼠肺纤维化模型,又能减少动物死亡率的最佳博来霉素造模剂量。结果:博来霉素造模后,随着时间延长,大鼠精神状态渐差,口唇紫绀明显,以5mg/kg组为著;各组大鼠28天死亡率,对照组明显低于模型组,差异显著(P<0.05),博来霉素不同剂量组组间死亡率比较,P>0.05,无统计学意义,但根据实验数据表明博来霉素5 mg/kg组死亡率远远高于其他组;光镜下可见对照组大鼠肺组织气道上皮光滑,气道周围无炎性细胞渗出,肺泡壁正常,肺间质无炎细胞浸润,模型组气管及肺泡炎性细胞浸润,肺泡结构紊乱破坏,有胶原纤维沉积,以博来霉素4、5 mg/kg组显著。结论:经气管注入博来霉素致大鼠肺间质纤维化模型建立,综合考虑造模效果及存活率,认为以4 mg/kg为较为理想的造模剂量。

吸入乙酰半胱氨酸对博莱霉素导致的大鼠肺纤维化的影响

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)雾化吸入对于博莱霉素(BLM)导致的大鼠肺纤维化的影响作用。方法:取清洁SD大鼠100只,平均分为10小组,1小组为对照组,其余每3小组为一组,分别为模型组,防治组,治疗组,通过在大鼠气管中注入BLM的方法来制造大鼠肺纤维化模型,防治组在造模前的7天以及造模后的7天内,治疗组在造模后的7天内,分别给予NAC雾化吸入治疗。在成功造模后的第7天、14天、28天,每组处死1小组大鼠,取出病理组织,通过免疫组化方法来观察肺组织纤维化的程度。研究NAC对大鼠肺纤维化的影响。结果:与模型组对比,防治组和治疗组在纤维化程度上明显较轻(P<0.05)。结论:吸入NAC对于博莱霉素导致的大鼠肺纤维化有明显的抑制作用,而且防治组疗效明显好于治疗组。既提前7天用药,效果更明显,大鼠获益更多。