当归注射液及前列腺素E_2对结缔组织生长因子在大鼠肺纤维化模型中表达作用的比较研究

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠肺间质纤维化中的表达及其在25%当归注射液、前列腺素E2(dmPGE2)的肺脏保护作用中的意义。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、当归组、PGE2组。按博莱霉素(BLM)5mg/kg体重复制大鼠肺纤维化模型,当归组、dmPGE2组术后分别给于25%当归注射液(腹腔内注射)、dmPGE2(肌肉注射),于第28天处死全部大鼠。制备大鼠肺组织切片,用原位杂交及免疫组化SABC法分别检测CTGF mRNA、纤维连结蛋白(FN)和Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)在肺内的表达,HE染色评价肺纤维化程度。结果模型组CTGF mRNA、FN和Col-Ⅲ的表达及肺纤维化程度明显高于对照组(P<0.01),而当归组及PGE2组明显低于模型组(P<0.01)。两治疗组间比较,除CTGF外,其余指标无显著性差异(P>0.05),各组指标的相关分析表明,CTGF表达水平与肺纤维化程度(r=0.886;P<0.01)、FN(r=0.836;P<0.01)和Col-Ⅲ(r=0.918;P<0.01)呈正相关关系。结论25%当归注射液可能通过下调CTGF而减轻肺间质纤维化。

鳖甲煎丸对肺纤维化模型大鼠外周血CTGF表达的影响

目的:探讨鳖甲煎丸对肺纤维化模型大鼠外周血结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:SD大鼠50只随机分为生理盐水对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组、鳖甲煎丸中剂量组、鳖甲煎丸高剂量组,采用博莱霉素气管内注入制备肺纤维化模型,造模后各组分别用生理盐水、西药、中药灌胃,第3、14、28天乙醚麻醉后毛细玻管眼眶静脉丛采血,ELISA法检测CTGF表达明显减少,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结果:模型对照组外周血中CTGF表达明显增加,第14天鳖甲煎丸中、高剂量组外周血CTGF的表达。结论:鳖甲煎丸可抑制肺纤维化模型大鼠外周血CTGF的表达,可能是抗肺纤维化作用的机制之一。

姜黄素对BLM诱导的肺纤维化模型大鼠CTGF表达的影响

目的观察博莱霉素诱导的大鼠肺间质纤维化模型中肺内结缔组织生长因子表达的变化,探讨姜黄素对肺纤维化大鼠肺组织内结缔组织生长因子表达的影响及姜黄素对肺间质纤维化的干预作用及其可能的机制。方法建立博莱霉素诱导的大鼠肺间质纤维化模型。将健康雄性昆明大鼠96只,随机分为4组,每组24只,分别为空白对照组、模型组、阳性药物对照组和姜黄素干预组。模型组、阳性对照组和姜黄素干预组均一次性滴入博莱霉素(气管内给予5 mg/kg)制作肺纤维化动物模型,空白对照组以同样方法一次性气管内注入等体积的生理盐水。造模后第1天,姜黄素干预组给予姜黄素200 mg/kg/d,阳性对照组给予醋酸泼尼松0.56 mg/kg/d,空白对照组和模型组每天分别灌服等体积的生理盐水。各组大鼠分三批分别在造模7 d、14 d、28 d时随机处死8只,取肺组织:1)行病理切片进行HE染色,观察肺组织肺泡炎程度和肺纤维化情况。2)进行免疫组织化学技术,结合图像分析来检测各组肺组织中结缔组织生长因子蛋白的表达情况。结果空白对照组大鼠结缔组织生长因子表达低微,模型组大鼠结缔组织生长因子的表达水平较空白对照组的正常肺组织明显上升(P<0.01),且与肺纤维化的程度显著相关。姜黄素干预组大鼠和阳性对照组大鼠肺组织中的结缔组织生长因子的表达与模型组大鼠相比明显降低,其差异有统计学意义(P<0.01),但仍高于空白对照组。结论证明了姜黄素对博莱霉素诱导的大鼠肺间质纤维化具有明显的防治作用,其机制可能是通过抑制结缔组织生长因子在肺组织中的表达来实现的。

钌红染色在大鼠肺纤维化模型中的应用

钌红能与细胞表面及活性层下项的黏多糖成分反应，还原四氧化锇成锇黑，形成电子致密沉淀物，在电镜下以高电子致密物形式存在。本实验采用博莱霉素诱导大鼠肺问质纤维化模型，钌红染色，观察肺纤维化表面活性物质及胶原纤维超微结构的变化。

缬沙坦对肺纤维化模型的干预作用及其对肝细胞生长因子表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对肺纤维化模型的干预作用及其可能的机制。方法60只Wistar大鼠采用随机数字表法随机分成3组,每组20只:(1)缬沙坦组,经气管插管灌注博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化,随后每日用缬沙坦16mg/kg灌胃进行干预;(2)模型组,气管内灌注用BLM,灌胃用生理盐水;(3)对照组,气管内灌注和灌胃均用生理盐水。各组动物于气管内灌注后第7、14、28、42天分别处死5只。取肺组织经苏木精-伊红、Masson胶原染色及测定羟脯氨酸浓度来评价治疗效果。用免疫组化及原位杂交方法分别检测转化生长因子β(TGF-β)蛋白和肝细胞生长因子(HGF)mRNA在肺内的表达。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HGF蛋白在大鼠肺组织的含量。结果缬沙坦组肺泡炎程度在第14、28、42天分别为(0·88±0·12)、(0·79±0·21)、(0·75±0·17)分,低于同期模型组的(2·05±0·25)、(1·38±0·12)、(1·19±0·11)分,差异均有统计学意义(P均<0·01);缬沙坦组肺纤维化程度在第7、28、42天分别为(0·28±0·03)、(1·74±0·18)、(1·91±0·09)分,也低于同期模型组的(0·45±0·10)、(2·08±0·32)、(2·77±0·15)分,差异均有统计学意义(P均<0·05);缬沙坦组肺组织羟脯氨酸含量在第14、42天分别为(1·08±0·13)、(1·39±0·20)μg/mg·pro,低于同期模型组的(1·45±0·19)、(2·19±0·37)μg/mg·pro,差异均有统计学意义(P均<0·01);缬沙坦组肺组织中TGF-β蛋白表达在早、晚期分别为2·27±0·30、2·05±0·18,均低于同期模型组的3·99±0·43、2·71±0·46,差异均有统计学意义(P均<0·05)。缬沙坦组HGFmRNA表达在早、晚期分别为1·61±0·20、0·52±0·19,均高于同期模型组的1·98±0·23、0·28±0·14,差异均有统计学意义(P均<0·05);缬沙坦组蛋白含量在早、晚期分别为(203±18)、(129±20)pg/ml,均高于同期模型组的(260±21)、(100±20)pg/ml,差异均有统计学意义(P均<0·05)。结论缬沙坦能减轻BLM诱导的大鼠肺纤维化,有可能通过抑制TGF-β和促进HGFmRNA的表达而实现。

博来霉素不同给药方式致大鼠肺纤维化模型探讨

目的:比较博来霉素(BLM)气管灌注、尾静脉注射及雾化吸入致大鼠肺纤维化模型的优劣,以便筛选出最佳的给药途径。方法:选择SPF级雄性SD大鼠80只,采用体重随机分组法将其分为正常组,单次气管灌注组(10 mg·kg^(-1)),多次气管灌注组(5 mg·kg^(-1)),单次静脉注射组(150 mg·kg^(-1)),多次静脉注射组(50 mg·kg^(-1)),单次雾化吸入模型组(30 min),多次雾化吸入模型组(30 min)。观察给药后7,14,28 d各组大鼠死亡情况及体质量变化。给药后28 d,观察各组大鼠肺系数,取大鼠肺组织制备石蜡切片并进行苏木素-伊红(HE)及马松(Masson)染色,并通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)含量,评价各组大鼠肺泡炎及肺纤维化程度。结果:与正常组比较,气管灌注组的大鼠死亡率在所有药物处理组中最高。大鼠肺系数的测定结果显示,与正常组比较,多次静脉注射组和多次雾化吸入组大鼠的肺系数显著升高(P<0.05,P<0.01)。雾化造模组较高于其他模型组,多次雾化模型组高于单次雾化模型组。大鼠HE及Masson染色结果提示,气管灌注组、静脉注射组和多次雾化吸入组大鼠肺组织中肺间隔增厚和肺间质纤维化程度较高,其中多次雾化模型组较其他组肺纤维化程度最为明显。ELISA结果发现,与正常组比较,雾化吸入组和气管灌注组大鼠肺组织中HYP和PAI-1含量显著升高(P<0.05)。多次雾化吸入组与单次雾化吸入组显著高于其他造模组。结论:多次雾化吸入博来霉素制备肺纤维化模型,造模大鼠的病理损伤和生理指标相对稳定,符合肺纤维化的演变过程,是一种有效的肺纤维化模型制备手段。

肺纤维化(气虚血瘀证)大鼠模型造模方法新探索

[目的]探索内窥镜引导下制作肺纤维化(气虚血瘀证)大鼠模型的新方法。[方法]1)SD大鼠60只,运用内窥镜摄录监视系统及自创的鼠麻醉喉镜,采用无水乙醚吸入法麻醉方式,对大鼠气管内推注药物博莱霉素造肺纤维化模型。2)造模后随机分正常对照组,模型组,芪术合剂组,泼尼松组观察。中药芪术合剂组疗效显著,从以方测证的角度验证肺纤维化(气虚血瘀证)大鼠模型的制作成功。[结果]1)此造模方法具有气管内推注药物靶点准确,成功率高,无外源创伤,保障实验数据的原始性、可靠性,节约时间,提高工作效率,减少标本耗损量,降低实验成本。2)益气活血散结法中药干预以方测证结果表明,该方法制作的模型具有气虚血瘀证的病机特点。[结论]该方法的创新值得在肺系疾病大鼠模型制造实验中推广运用。

补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子的影响

目的:观察补阳还五汤对博来霉素A5(BLMA5)所致肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、分类计数及血液和肺泡巨噬细胞(AM)释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,探讨补阳还五汤防治肺纤维化的机制。方法:大鼠一次性气管内注入BLM制备肺纤维化模型,在实验的第7d、14d、28d分批处死后进行支气管肺泡灌洗并收集灌洗液,于实验的第28d一次性处死记数细胞总数及分类计数,采用ELISA法测定血清及肺泡AM培养上清中TNF-α水平。结果:模型组各期BALF细胞计数及BALF上清中TNF-α含量较正常对照组明显增高,补阳还五汤组较模型组明显降低。结论:抑制TNF-α的释放可能是补阳还五汤防治肺纤维化的机制之一。

丹参酮对博莱霉素致鼠肺纤维化影响的实验观察

本研究观察了SD 大白鼠腹腔内注射丹参酮Ⅱ_A 磺酸钠(15mg/kg)对博莱霉素致鼠肺纤维化的影响,通过动态测定各实验组与肺纤维化形成相关的第3、7、14、28天肺组织匀浆内羟脯氨酸、LPO 的含量,表明丹参酮Ⅱ_A 磺酸钠组较单纯博莱霉素组明显减低,同时也观察了肺组织病理变化及形态学定量测量(肺组织中炎症细胞数/高倍视野,肺泡间隔宽度单位面积肺纤维化灶所占的分面积),结果表明丹参酮Ⅱ_A 磺酸钠减轻了博莱霉素所致肺纤维化。

红芪黄酮气溶胶给药与灌胃给药对肺纤维化大鼠的影响

目的:比较红芪黄酮灌胃给药及红芪黄酮气溶胶给药2种给药方法对大鼠肺纤维化模型(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的治疗作用。方法:选取40只SPF级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、红芪黄酮灌胃给药组及红芪黄酮气溶胶给药组,每组10只。空白组正常饮食喂养,不施加任何处理措施。其余3组大鼠使用博莱霉素气溶胶量化造模。造模后第2天开始给药,红芪黄酮灌胃给药组大鼠灌胃给药(37.41 mg/kg),红芪黄酮气溶胶给药组动物气溶胶给药(气溶胶浓度3.5~4.0 mg/m3,给药时间40 min),其余2组给予蒸馏水,每日1次,共计28天。实验结束,分别检测清醒及麻醉状态下动物肺功能;处死各组大鼠,取部分肺组织,制备匀浆,检测肺脏组织中透明质酸(hyaluronic acid,HA)和层黏连蛋白含量(laminin,LN);另取部分肺组织,分别使用HE染色及Masson染色方法,观察肺组织病理形态。结果:清醒状态及麻醉状态下造模组动物肺功能指标与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,各给药组肺功能相关指标均得到显著改善,且气溶胶给药组改善更为明显。病理切片结果显示,与空白组比较,造模组出现不同程度的异常改变;与造模组比较,各给药组病理形态有显著的改善,且气溶胶给药组作用更为明显。HA、LN含量测定结果显示,与空白组比较,模型组HA、LN含量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);气溶胶给药组与灌胃组比较,气溶胶给药组HA、LN含量均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:气溶胶给药与灌胃给药相比对肺纤维化模型大鼠治疗作用更为显著,气溶胶给药技术对于肺纤维化的治疗具有重要意义。

博菜霉素性羊肺纤维化的实验研究(1)——高分辨CT与病理对照(摘要)

肺纤维化(pulmonary fibrosis)是一组病因各异、临床表现相似的疾病谱,是多种弥散性肺间质疾病的一种病理改变,是对损伤的过度修复。肺纤维化模型是对各种征象的病理形态学基础进行深入研究的桥梁。通过精确的高分辨CT(HRCT)病理对照研究。

吸入糖皮质激素对实验性肺纤维化的干预作用

为观察吸入糖皮质激素对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的干预作用,并探讨其作用机制,通过气管内注入博莱霉素复制肺纤维化模型,随机分为对照组(C组)、模型对照组(M组)和模型干预组(B组),每组10 只。B组给予每天雾化吸入布地奈德(0.5 mg/kg体重)进行干预。ELISA方法测定血及支气管肺泡灌洗液 (BALF)中转化生长因子β1(TCF—β1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平,同时观察病理、血气分析等变化。结果表明,第1周M组、B组均有肺泡炎,肺系数、BALF中性粒细胞高于对照组;第4周,B组肺纤维化程度较M组减轻(P<0.05)。血气分析与病理结果相符,第1周M组、B组氧分压均低于对照组(P<0.05),第4周B组升高。第4周B组BALF中TGF-β1水平低于M组(37.70±5.05vs68.14±13.89,P<0.01)。M组BALF中 MCP-1水平高于其他组。结论:吸入布地奈德可减轻博莱霉素诱导的肺纤维化,抗纤维化作用的机制与降低 TGF-β1和MCP-1水平或阻止其升高有关。

肺纤维化早期阶段中医证型的实验研究

目的探讨肺纤维化早期阶段中医证型及证型与部分细胞因子的关系,为临床制定肺纤维化的合理治疗方案及中医“证”的客观化研究提供参考。方法将大鼠随机分为7组正常对照组、模型对照组、强的松对照组、瓜蒌薤白汤组、大黄虫丸组、肾气丸组和麦门冬汤组。除正常对照组外,其余各组均采用气管内一次性注入平阳霉素复制肺纤维化模型,灌胃用药,于造模后第7、14天分批处死动物,进行HE染色观察肺泡炎和肺纤维化程度,并通过免疫组化方法检测肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)的表达。结果①模型对照组第7天部分肺泡腔缩小或萎缩、肺泡隔增宽、以巨噬细胞为主的炎性细胞浸润、间质可见泡沫细胞,而到第14天炎性细胞浸润减少,炎症减轻,成纤维细胞增多,纤维组织增生,说明造模是成功的。②造模第7天各组肺泡炎由轻到重依次为正常对照组<瓜蒌薤白汤组=麦门冬汤组<强的松对照组=肾气丸组=大黄虫丸组<模型对照组,与模型对照组比较只有瓜蒌薤白汤和麦门冬汤组差异具有统计学意义;第14天麦门冬汤组、瓜蒌薤白汤组和强的松对照组肺泡炎低于模型对照组,差异具有统计学意义。③模型对照组大鼠肺组织的TNF-α表达高于正常对照组,而IL-10表达略低于正常对照组,其差异无统计学意义。强的松、瓜蒌薤白汤和麦门冬汤组的TNF-α表达均低于模型组,同时强的松和麦门冬汤组IL-10的表达高于其他用药组。结论①肺纤维化早期阶段痰浊痹阻证、肺阴亏虚证、肾气亏虚证和肺阴亏虚证可能均存在,但以痰浊痹阻证和肺阴亏虚证为主;②TNF-α参与了肺纤维化早期阶段肺泡炎的形成,与中医的痰浊痹阻证和肺阴亏虚证有一定关系;③抑制TNF-α和增强IL-10的表达可能是瓜蒌薤白汤和麦门冬汤防治肺纤维化的机制之一。

枇杷叶三萜酸对大鼠肺纤维化的防治及其对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、TGF-β1表达的影响

目的 研究枇杷叶三萜酸（TAL）对大鼠肺纤维化的防治作用并探讨其对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞（AM）分泌的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响。方法通过气管内一次性滴注盐酸平阳霉素（5mg／kg）复制大鼠肺纤维化模型。治疗组于造模后第2天开始灌胃给予不同剂量的TAL或醋酸泼尼松。

博来霉素诱导肺纤维化小鼠肺组织差异转录因子的筛选与功能分析

目的 转录因子与特发性肺纤维化(IPF)的关系仍需进一步研究。文章通过筛选博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型肺组织中转录因子表达谱探讨转录因子在IPF发生中的潜在调控作用。方法 SPF级健康雄性C57BL/6小鼠14只,随机分为博来霉素组与对照组,每组7只。博来霉素组按5 mg/kg剂量给予鼻腔滴注博来霉素,对照组给予等剂量等渗盐水。3周后处死全部小鼠,采用Masson染色检测肺部胶原沉积情况。提取肺组织总RNA,使用小鼠转录因子PCR Array筛选差异表达的转录因子,并对表达上调与下调的因子分别进行靶基因预测和功能分析。结果 Masson染色结果显示博来霉素组胶原含量堆积,对照组则无明显异常。PCR Array结果显示,与对照组相比,博来霉素组小鼠肺组织中共检测到1个上调转录因子与5个下调转录因子。差异转录因子共与43个(上调27个,下调16个)靶基因存在调控关系。GO注释与KEGG分析结果显示,上调转录因子主要与调控细胞凋亡进程、细胞质、蛋白结合等功能有关,并在MAPK、PI3K-AKT、FoxO等信号通路中富集;下调转录因子主要与以DNA为模板的转录调控、细胞核、DNA结合等功能有关,并在HIF-1、p53等通路中富集。结论 博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中存在EGR1、AR等转录因子的差异表达,后者或可为IPF的临床治疗提供潜在靶点。

基于生物信息学和实验探究艾灸对肺纤维化的作用及其机制

目的基于现代生物信息技术,预测艾灸干预肺纤维化的作用靶点和通路,并通过动物实验验证作用效果及其机制。方法通过生物信息预测得到艾灸干预肺纤维化的作用靶点,蛋白互作获得作用的关键靶点,GO和KEGG将通路可视化,采用AutoDock4.2.6对接软件进行验证。博来霉素4 U·kg^(-1)构建肺纤维化模型,连续给药干预28 d。每日观察小鼠外观,测量小鼠饮食、体质量,计算肺指数,HE和Masson染色观察肺组织病变及纤维化程度,ELISA测定相关因子,蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达,荧光定量法测定mRNA水平。结果得到关键靶点8个,关键通路为EGFR/JAK/STAT1,分子对接显示4种核心成分有极好的对接活性。动物实验结果表明艾灸可改善小鼠体质量,提高存活率,HE和Masson染色结果显示艾灸后炎症细胞和胶原细胞减少。艾灸组小鼠的肺系数、肺组织Hyp和血清IL-6、CCL2炎症因子水平显著降低,肺组织EGFR、JAK、STAT1、p-STAT1蛋白表达显著降低,相关mRNA水平显著降低。结论艾灸可通过抑制EGFR/JAK/STAT1通路延缓肺纤维化进程。

化痰类中药在博来霉素所致肺纤维化大鼠模型中抗氧化活性的比较

目的:探讨常用化痰类药物在博来霉素所致大鼠肺纤维化模型中的抗氧化作用,并对其抗氧化能力进行比较。方法:采用气管内滴入博来霉素(5mg/kg)的方法制作大鼠肺纤维化模型,以天南星、川贝母、海藻、胖大海、清半夏、白前、黄药子、前胡8味中药的水煎液及吡非尼酮对模型鼠进行灌胃干预28d,检测各组大鼠肺组织中SOD、GSH、MDA、Nrf2、Nrf2-mRNA表达水平,并对其抗氧化能力进行评分比较。结果:模型组SOD、GSH较空白组显著下降(P≤0.01),MDA明显升高(P≤0.01),Nrf2升高(P≤0.05);与模型组比较,吡非尼酮组、川贝母组、白前组、海藻组、前胡组均对SOD有明显改善作用(P≤0.01或P≤0.05),海藻组对GSH改善作用明显(P≤0.01),川贝母组、清半夏组、白前组MDA明显降低(P≤0.01),各给药组Nrf2表达均升高(P≤0.01)。综合评分结果显示川贝母、海藻的抗氧化能力较强。结论:化痰类中药对博来霉素所致的大鼠肺纤维化模型有明显的干预作用,其抗氧化作用以川贝母和海藻为突出,证实了化痰类中药可以通过干预机体的氧化/抗氧化机制对肺纤维化起到干预作用。