建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型并探讨高原低氧肺组织损伤机制

目的摸索相关参数建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型并探讨高原低氧肺组织损伤机制。方法1.建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型的方法:采用随机数字表法将雄性大鼠分为5组,即空白对照组,高原低氧6h组、24h组、48h组、72h组,适应性喂养7 d后进低压氧舱(模拟海拔7000 m),以肺组织纹理模糊、肺泡壁变厚、肺泡间隔增宽判断造模成功。2.探讨高原低氧肺损伤机制的方法:分别比较各组大鼠动脉血血气分析(ABG)结果、肺组织血管紧张素II(Ang II)含量、肺组织内皮素1(ET-1)含量和肺组织血管紧张素转化酶(ACE)m RNA的表达情况及肺组织超微结构,并作相关性分析。结果1.各组雄性大鼠ABG相关指标的变化:与对照组比较,高原低氧6 h、24 h、48 h、72 h组氧分压(PaO_(2))、动脉血氧饱合度(SaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2))和酸碱度(p H)值均下降,在一定时间范围内缺氧时间越长下降越明显(P<0.05)。2.各组雄性大鼠肺组织形态学的变化:与对照组比较,光镜下可见高原低氧各组出现不同程度的肺纹理模糊、肺泡壁增厚、肺泡间隔增宽;随着缺氧时间延长,肺组织损伤逐渐加重。3.各组雄性大鼠肺组织AngⅡ、ET-1含量变化:与对照组比较,高原低氧各组大鼠肺组织AngⅡ、ET-1含量明显升高(P<0.01),在一定时间范围内随缺氧时间延长而增加,72 h组达到高峰。4.各组雄性大鼠肺组织ACE m RNA表达比较:与对照组比较,高原低氧各组大鼠肺组织ACE m RNA表达均上调,6h组升高显著,72h组达到峰值(P<0.01)。结论利用低压氧舱模拟海拔7000 m环境,可以有效建立大鼠肺组织损伤模型;高原低氧肺损伤机制可能与ET-1、AngⅡ及ACE m RNA的表达水平上调,肾素-血管紧张素系统(RAS)失衡有关。

柚皮素对肺结核大鼠肺组织损伤的影响及其机制

目的探究柚皮素(NAR)对肺结核(PTB)大鼠肺组织损伤的影响及其机制。方法120只大鼠分为对照组(control)、模型组(PTB)、柚皮素低[25 mg/(kg·d)]、中[50 mg/(kg·d)]、高剂量[100 mg/(kg·d)]组和柚皮素高剂量+Colivelin[信号转导与转录激活因子3(STAT3)激活剂]组(NAR-H+Colivelin),每组20只。计算肺组织湿重/干重(W/D)比值;ELISA法检测干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;Western blot检测IL-6和STAT3蛋白表达。结果与control组相比,PTB组肺组织损伤严重,肺泡结构紊乱、塌陷,有大量炎症细胞浸润,肺间质充血增厚;W/D比值、IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γ、MDA水平及α-SMA、IL-6表达和STAT3磷酸化水平均增加(P<0.05),SOD和GSH-Px水平均降低(P<0.05)。与PTB组相比,NAR-L组、NAR-M组和NAR-H组大鼠肺组织损伤程度及炎症细胞浸润减轻;W/D比值、IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γ、MDA水平及α-SMA、IL-6表达和STAT3磷酸化水平剂量依赖性降低(均P<0.05),SOD和GSH-Px水平剂量依赖性增加(均P<0.05)。Colivelin逆转了柚皮素对PTB大鼠肺组织损伤的保护作用(P<0.05)。结论柚皮素可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路激活,改善肺结核大鼠肺组织损伤。

疏风解毒胶囊预防给药对流感病毒感染小鼠模型TLR4介导肺组织炎性损伤的影响

目的探究疏风解毒胶囊预防给药对甲型流感病毒肺炎小鼠的影响及可能的干预机制。方法采用甲型H1N1流感病毒(FM1株)滴鼻感染ICR小鼠,构建病毒性肺炎模型。每日固定时间观察各组小鼠一般状态,计算各组小鼠肺指数、抑制率和病毒载量;采用Micro-CT、苏木精-伊红染色(HE)法观察小鼠肺组织病理形态变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中TLR4、MyD88蛋白的表达含量。结果预防性给予疏风解毒胶囊可降低小鼠的肺指数,降低肺组织中病毒载量,修复流感小鼠肺部损伤,减轻肺部病变,降低肺组织中TNF-α和IL-6含量。Western blot结果显示疏风解毒胶囊可下调肺组织TLR4、MyD88蛋白的表达。结论疏风解毒胶囊预防性给药对甲型流感病毒肺炎小鼠具有保护作用,其机制与抑制病毒复制、改善肺组织病变、抑制炎症因子释放和下调肺组织中TLR4、MyD88蛋白的表达有关。

用于多重免疫荧光染色的小鼠肺组织冰冻切片制备方法优化研究

目的优化小鼠肺组织冰冻切片制作方法,提高肺组织冰冻切片质量,有利于提高免疫荧光染色的特异性,获得更准确可靠的实验结果。方法使用C57BL/6小鼠,分别采用传统冷冻后固定法、冷冻前固定法、改良灌注冷冻前固定法3种方法制作冰冻切片,经免疫荧光染色后使用激光扫描共聚焦荧光显微镜观察肺组织染色情况。使用荧光显微镜对肺组织切片进行全片扫描,计算单位面积内完整气道数量。结果传统冷冻后固定法制作的小鼠肺组织冰冻切片,肺泡结构破坏,气道壁断裂严重,存在非特异性染色;冷冻前固定法制作的小鼠肺组织切片,肺泡和气道结构相对完整,但肺泡塌陷,部分气道结构破坏;改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织切片,肺泡和气道结构形态均完整、清晰,多重免疫荧光染色定位准确。改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织冰冻切片单位面积内完整气道(直径≥100μm)数量高于冷冻前固定法((0.66±0.15)/mm^(2) vs(0.33±0.14)/mm^(2),P<0.05),也显著高于传统冷冻后固定法((0.66±0.15)/mm^(2) vs(0.02±0.04)/mm^(2),P<0.01)。结论使用改良灌注冷冻前固定法制作冰冻切片,利于保持小鼠肺组织形态完整,利于获得高质量的多重免疫荧光染色结果。

柚皮素对肺炎支原体感染小鼠肺组织修复效果及高迁移率族蛋白B1/核因子-κB信号通路的影响

目的探讨柚皮素对肺炎支原体(MP)感染小鼠肺组织的修复效果及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法2022年5—9月,BALB/c小鼠建立MP感染模型,将建模成功的小鼠按照随机数表法分为模型组,柚皮素低(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组,阿奇霉素(90 mg/kg)组。每组12只。另取12只小鼠作为对照组,各组给予对应干预2周。全自动血气分析仪检测小鼠动脉血氧分压(PaO2);称量小鼠肺湿质量,并计算肺系数;HE染色观察小鼠肺组织病理学变化并对肺损伤进行评分;酶联免疫吸附法检测小鼠肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-8水平;荧光定量PCR法检测小鼠肺组织中HMGB1、NF-κB信使核糖核酸(mRNA)水平;蛋白质印迹法检测小鼠肺组织中HMGB1、NF-κB蛋白水平。结果对照组小鼠肺泡组织结构清晰正常;与对照组相比,模型组小鼠肺泡组织具有明显的炎症细胞浸润,肺泡壁变厚,红细胞、肺水肿液渗入,动脉血PaO2[(35.57±3.70)mmHg比(88.96±8.66)mmHg]显著降低(P<0.05),肺系数[(0.98±0.08)%比(0.51±0.04)%]、肺损伤评分[(3.63±0.34)分比(0.00±0.00)分]、肺组织中TNF-α[(40.07±5.04)ng/L比(11.43±1.56)ng/L]、IL-1β[(119.60±13.25)ng/L比(50.37±6.38)ng/L]、IL-8、HMGB1、NF-κB mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,柚皮素低、高剂量组、阿奇霉素组小鼠肺泡壁变薄,红细胞、分泌液减少,炎症细胞浸润减少,肺泡组织趋于正常,动脉血PaO_(2)降低不明显(P<0.05),肺系数、肺损伤评分、肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-8、HMGB1、NF-κB mRNA和蛋白水平依次降低(P<0.05)。结论柚皮素能明显改善MP感染小鼠肺组织损伤,可能与抑制HMGB1/NF-κB信号通路的激活有关。

“手十二井穴”放血预处理对大鼠急性低氧肺组织损伤模型血气、HIF-1α及VEGF水平的影响

目的 观察“手十二井穴”放血预处理对大鼠急性低氧肺组织损伤模型血气相关指标、低氧诱导因子(HIF)-1α及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响,探讨“手十二井穴”放血预处理对急性低氧肺组织损伤的影响。方法 将72只雄性SD大鼠随机分为对照组8只、低氧(模型)组32只、井穴放血预处理(放血)组32只,模型组和放血组又分为6、24、48、72 h 4个时间段亚组,每组各8只。采用实验动物低氧模拟舱模拟15%O_(2)浓度,制备大鼠急性低氧肺组织损伤模型。放血组按“少商”“商阳”“中冲”“关冲”“少冲”“少泽”的顺序,每天1次,共5 d。用手持式血气分析仪检测肺动脉血气氧分压(PaO_(2))、血氧饱和度(SaO_(2))、酸碱度(pH)、二氧化碳分压(PaCO_(2))等相关指标,采用Western印迹法检测HIF-1α表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测VEGF含量。结果 与对照组比较,模型组各时间段PaO_(2)、SaO_(2)明显降低,HIF-1α和VEGF表达水平显著升高(P<0.01)。与同时间段模型组比较,放血组PaO_(2)和SaO_(2)均出现升高,PaO_(2)在6、48 h时有统计学意义,SaO_(2)值在6、24、48 h时有统计学意义(P<0.05,P<0.01),HIF-1α表达在各时段明显下调,VEGF含量在24、48、72 h时明显下降(P<0.05,P<0.01)。但放血组PaO_(2)各时间段和SaO_(2)(6、24 h)仍低于对照组,HIF-1α(6、48、72 h)和VEGF各时间段表达水平仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 “手十二井穴”放血预处理在一定时间和程度上可改善大鼠急性低氧(15%O_(2),85%N_(2))肺组织损伤模型的缺氧情况,其可能的作用与升高动脉血PaO_(2)、SaO_(2)及下调HIF-1α表达、降低VEGF含量有关,从而有利于模型大鼠适应急性低氧环境。

定喘颗粒对呼吸道合胞病毒肺炎幼鼠肺组织病毒载量及气道阻力的影响

目的 探讨定喘颗粒对呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎幼鼠肺组织病毒载量、炎症因子及气道阻力的影响。方法 选取30只SD幼龄大鼠随机分为3组,正常组、RSV肺炎组、定喘颗粒干预组,每组10只。采用滴鼻法建立RSV肺炎模型;采用双腔体描记法检测幼龄大鼠气道阻力,苏木精-伊红染色法观察肺组织病理改变;ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果 (1)病毒载量方面:与正常组比较,RSV肺炎组、定喘颗粒干预组病毒载量均增高,差异有统计学意义(P<0.05);与RSV肺炎组比较,定喘颗粒干预组病毒载量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)气道阻力方面:与正常组比较,RSV肺炎组、定喘颗粒干预组气道阻力均增高,差异有统计学意义(P<0.05);与RSV肺炎组比较,定喘颗粒干预组气道阻力明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)病理损伤及干湿比方面:与正常组比较,RSV肺炎组、定喘颗粒干预组病理损伤评分及肺湿干比均增高,差异有统计学意义(P<0.05);与RSV肺炎组比较,定喘颗粒干预组病理损伤评分及肺湿干比均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)BALF中IL-8、TNF-α、IL-1β的含量方面:与正常组比较,RSV肺炎组、定喘颗粒干预组IL-8、TNF-α、IL-1β含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与RSV肺炎组比较,定喘颗粒干预组IL-8、TNF-α、IL-1β含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 定喘颗粒干预后可降低肺组织病毒载量,降低气道阻力,改善肺损伤程度,抑制幼鼠RSV肺炎炎症因子水平。

早发性脊柱侧弯合并胸廓发育不良综合征幼猪模型肺组织学及超微结构

目的探究早发性脊柱侧凸(early onset scoliosis,EOS)合并胸廓发育不良综合征(thoracic insufficiency syndrome,TIS)幼猪在生长友好技术治疗前后肺组织学及超微结构变化。方法选择6周龄幼猪,随机分为对照组(n=3)、模型组(n=5)和治疗组(n=5),在6周龄时构建EOS+TIS幼猪模型。在14周龄时解除拴系的同时行矫正治疗。18周龄时对幼猪实施安乐死,取肺组织行HE染色、Masson染色,对3组肺组织的肺实质、肺血管发育进行病理学观察;通过量化放射状肺泡计数(RAC)、肺泡壁厚度(AWT)、肺泡腔面积比(ASDR)、呼吸膜厚度(RFT)、平均胶原纤维量(ACFV)、肺毛细血管密度(PCD)、肺动脉壁厚度比值(WT%)和肺动脉壁横截面积比值(WA%)指标评价支气管肺发育不良、肺纤维化表现;同时在透射电镜下观察幼猪模型肺组织超微结构的改变。结果3组幼猪模型病理学观察:与对照组比较,模型组表现出支气管肺发育不良及肺纤维化,治疗组上述表现获得缓解。3组幼猪RAC、AWT、ASDR、RFT、ACFV、PCD组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05);WT%、WA%组间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。透射电镜下模型组细胞结构受到破坏、完整性差,治疗组细胞结构得到改善。结论EOS+TIS幼猪肺组织表现出支气管肺发育不良及肺纤维化的特征;运用生长友好技术治疗EOS+TIS幼猪,其支气管肺发育不良及肺纤维化得到一定程度的改善。

体外功能性肺组织模型构建、调控及在肺纤维化和COVID-19中的应用

肺纤维化是很多肺部疾病发生发展过程中出现的病理现象。近年出现的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)引发的呼吸系统综合征也会出现弥漫性肺泡损伤,并诱发肺纤维化。因此,开展肺纤维化和COVID-19体外模型构建与调控研究在肺部疾病治疗和药物筛选方面意义重大。目前,现有研究已建立了多种体外肺组织二维、三维细胞培养模型,本文将全面概述这些模型的构建方法,并结合这些模型在肺纤维化及COVID-19中的应用研究,对体外肺组织模型在药物传递、高通量药物筛选及发病机制研究等生物医学领域中的应用前景进行综述,为其进一步研究提供参考。

真菌荧光染色法在肺组织冰冻切片中的应用

冰冻切片对临床术中快速诊断意义重大[1]。肺冰冻切片多用于肺部肿瘤的快速良恶性诊断,其中良性病变的真菌感染主要通过常规石蜡切片PAS染色及六胺银染色来明确诊断[2]。近年来荧光染色法检测的应用越来越多[3]。针对石蜡制片耗时长的问题,本研究采用肺冰冻切片真菌荧光染色。

吸入用盐酸氨溴索溶液在大鼠肺组织内的药物代谢动力学研究

目的考察吸入用盐酸氨溴索溶液在大鼠肺组织内的药物代谢动力学(简称药动学)特征。方法采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定SD大鼠肺组织中盐酸氨溴索含量,色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,进样量为5μL;采用电喷雾离子源,正离子多反应监测模式。通过给予大鼠吸入用盐酸氨溴索溶液(相当于盐酸氨溴索22.5 mg),分别于给药前及给药后0.083,0.25,0.5,1,2,4,6,8,12,24 h采集大鼠肺组织,并以DAS 3.0软件计算药动学参数。结果大鼠肺组织内盐酸氨溴索质量浓度在10~1000 ng/mL范围内与待测成分与内标峰面积的比值线性关系良好(r=0.9986,n=7);精密度、稳定性、回收试验及基质效应结果均符合方法学要求。半衰期(t_(1/2))为4.33 h,峰浓度(C_(max))为3997.40 ng/g,药-时曲线下面积(AUC_(0-t))为4311.88(ng·h)/g,平均滞留时间(MRT_(0-t))为2.74 h,清除率为5.05(L·h)/kg。结论该方法操作简便,结果准确可靠,可用于大鼠肺组织内吸入用盐酸氨溴索溶液的药动学研究。

益气活血方通过Ghrelin对机械通气肺损伤大鼠肺组织的保护机制研究

目的:通过观察益气活血方对机械通气肺损伤(VILI)大鼠血清、肺泡灌洗液及肺组织中Ghrelin、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、肾素、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的变化及其对肺组织的影响,以发现其对肺组织的保护作用及机制。方法:将40只SD大鼠随机分成空白组、模型组、中药组和阳性药物组,乙醚麻醉后用动物人工呼吸机通气的方式制备VILI大鼠模型,其中阳性药物组造模前腹腔给药Ghrelin,中药组在通气后给予益气活血方灌胃2周,观察肺组织结构及炎症细胞浸润程度,酶联免疫吸附检测(ELISA)法检测Ghrelin、AngⅡ、肾素、IL-6、TNF-α在各组大鼠血清和肺泡灌洗液中的表达,RT-PCR法检测肺组织IL-6、TNF-αmRNA表达。结果:与空白组比较,造模后,机械通气肺损伤模型组大鼠血清及肺组织中AngⅡ、肾素、IL-6、TNF-α均有不同程度水平升高,Ghrelin表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。给药2周后,和模型组相比,中药组AngⅡ、肾素、IL-6、TNF-α表达水平略微下降,Ghrelin表达上调(P<0.05);HE染色病理提示两给药组大鼠肺组织形态结构明显改善。结论:益气活血方对VILI大鼠肺组织有保护作用,可能与下调VILI大鼠肺组织中AngⅡ、肾素、IL-6、TNF-α,上调Ghrelin表达水平,减轻了炎症反应对肺组织的损伤有关。

慢性阻塞性肺疾病动物模型肺组织病理评价方法研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种可预防和治疗的疾病,以气道和肺泡异常导致的持续呼吸道症状和气流受限为特征[1]。COPD发病率、致残率均高,社会经济负担重,使其成为世界范围内重大课题,针对发病机制、药物作用机制的基础研究占据目前COPD研究的重要地位,以大鼠为代表的动物模型也得到广泛应用[2]。肺组织病理是判定COPD最直观的指标,故动物实验中将其作为造模成功的标志及判定药物疗效的标准。

大蒜素对COPD大鼠肺组织损伤及内质网应激的影响

本研究的目的是探讨大蒜素(ALL)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织损伤及内质网应激(ERS)的影响。我们采用了烟雾暴露法建立COPD大鼠模型,并将40只大鼠随机分为四组:空气暴露对照组、COPD模型组、COPD+低剂量ALL治疗组以及COPD+高剂量ALL治疗组。ALL的处理剂量分别为50mg/kg和100mg/kg,每天通过腹腔注射给药。治疗持续4周,之后对大鼠进行肺功能测试,并收集肺组织进行组织学分析和生化检测。结果显示,与COPD模型组相比,ALL治疗组的大鼠肺功能显著改善,肺组织病理损伤得到减轻。通过免疫组织化学染色和西方印迹分析,我们发现ALL能够显著降低COPD大鼠肺组织中内质网应激标志物GRP78和CHOP的表达。此外,ALL治疗显著减少了炎症细胞浸润和氧化应激水平,同时提高了抗氧化酶(如SOD和CAT)的活性。低剂量和高剂量ALL治疗组之间的比较显示,高剂量ALL的效果更为显著。由此可见,大蒜素对COPD大鼠模型的肺功能有显著的改善作用,并能减轻肺组织损伤。这可能与其降低内质网应激和抗炎症的作用有关。这为大蒜素在COPD治疗中的应用提供了实验基础。

低氧性肺动脉高压雄性大鼠肺组织中的p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白的表达

目的构建低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)雄性大鼠模型,了解低氧性肺动脉高压雄性大鼠肺组织中的p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白的表达特点。方法将16只SPF级雄性SD大鼠随机分为control组、hypoxic组,每组8只。将hypoxic组大鼠置低压低氧舱(模拟海拔5000 m)饲养、control组置舱外饲养(海拔2260 m),持续28 d。使用右心导管术检测大鼠平均肺动脉压(mean pulmonary arterial pressure,mPAP),分离心脏并称重以计算RVHI;用HE染色法观察肺小动脉病理形态学变化,计算血管壁面积占血管总面积的百分比(WA%)、血管壁厚度占血管直径的百分比(WT%);用Western Blotting法检测肺组织p38、p-p38、IκBα、p-IκBα、p65、p-p65蛋白的表达水平。结果同control组比较,hypoxic组大鼠mPAP、RVHI升高(P<0.05),大鼠肺小动脉管壁明显增厚,管腔变窄,WA%、WT%升高(P<0.05);hypoxic组大鼠肺组织p-p38、p-IκBα、p-p65蛋白的表达水平均升高(P<0.05),p-p38/p38、p-IκBα/IκBα、p-p65/p65同样升高(P<0.05)。结论在低氧条件下,HPH雄性大鼠肺组织中的p-p38、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平均升高,p38 MAPK/NF-κB信号通路被激活。

基于Morris方法的微波消融肺组织温度场参数敏感度分析

为了获取微波消融肺组织温度场中组织特性敏感度,采用有限元方法建立微波消融肺组织计算模型,进行电磁场-温度场的耦合,基于Morris方法获取组织电导率(σ)、相对介电常数(ε)、导热率(k)、密度(ρ)、比热容(Cp)和血液灌注率(ωb)的敏感度,建立二维有限元模型.肺组织的σ、ε、k、ρ、Cp、ωb六个参数各设置4个水平,分别获取在50 W、300 s时的微波消融肺组织的消融面积和中心温度,并采用Morris方法,分析各参数对消融面积和消融形状的影响程度.结果表明,血液灌注率、相对介电常数、电导率是对微波消融肺组织的消融区域和消融形状影响较大的参数.

雾化吸入威视派克对提高大鼠肺组织分辨率的实验研究

目的:通过雾化吸入威视派克(VSP)对比剂提高肺组织分辨率的方式,对大鼠肺部进行显像,以实现大鼠气道显像的目的。方法:选择SPF级雄性SD大鼠5只,体重90~100 g,随机分为对照组1只、实验组4只:对照组雾化吸入生理盐水2 ml,实验组分别雾化吸入剂量为0.1 ml/kg VSP、0.3 ml/kg VSP、0.5 ml/kg VSP、0.7 ml/kg VSP与生理盐水混悬液共2 ml;所有大鼠在麻醉后即时、雾化吸入生理盐水或VSP后0、30、60、90、120、150、180 min分别进行肺部CT扫描,通过比较肺组织CT值变化以及对比CT三维气道重建影像,了解雾化吸入VSP对肺部显像情况的影响。结果:对照组肺组织CT值及气道显像情况在雾化吸入生理盐水前后无明显变化;实验组随着雾化吸入VSP剂量的增加,其肺部组织CT值随之升高,于120 min达峰值,且其气道三维重建影像在雾化吸入VSP后显像更佳。结论:雾化吸入VSP提高大鼠肺组织分辨率及气道成像的方法是可行的:雾化吸入剂量为0.5 ml/kg VSP对于提高大鼠肺组织分辨率效果最佳,且最佳显像时间为120 min。

秦皮苷对肺炎克雷伯菌所致重症肺炎大鼠肺组织损伤及纤维化的作用及机制研究

目的探究秦皮苷对肺炎克雷伯菌所致重症肺炎大鼠肺组织损伤及纤维化的作用,并分析可能的机制。方法50只大鼠随机分为对照组、模型组及秦皮苷低、中、高剂量组(10只·组^(-1)),除对照组外其余各组大鼠均建立肺炎克雷伯菌所致重症肺炎模型,并于建模成功后,秦皮苷低、中、高剂量组大鼠给予10、20、40 mg·kg^(-1)秦皮苷溶液灌胃处理(连续7 d),模型组及对照组同时间给予等量生理盐水灌胃处理。采用全自动血气分析仪检测血清中动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、动脉血氧饱和度(SaO_(2))、动脉氧分压(PaO_(2));苏木精-伊红(HE)染色、胶原纤维(Masson)染色观察肺组织病理学变化并对小鼠肺纤维化程度进行评分;免疫印迹法检测各组大鼠肺组织中蛋白激酶B(Akt)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白水平。结果与对照组比较,模型组大鼠血液中PaCO_(2)活性、肺纤维化评分、肺组织中p-Akt/Akt、HIF-1α、CollagenⅢ蛋白水平均升高,SaO_(2)、PaO_(2)水平均降低(P<0.05);与模型组比较,秦皮苷低、中、高剂量组大鼠血液中PaCO_(2)活性、肺纤维化评分、肺组织中p-Akt/Akt、HIF-1α、CollagenⅢ蛋白水平均降低,SaO_(2)、PaO_(2)水平均升高(P<0.05)。结论秦皮苷能够改善肺炎克雷伯菌所致重症肺炎大鼠肺组织损伤及纤维化,可能是通过抑制Akt/HIF-1α通路活化抑制胶原沉积实现的。

虫草素调节MAPK/AP-1信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织损伤的影响

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/激活蛋白-1(AP-1)信号通路探讨虫草素(Cor)对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织损伤的改善作用。方法 利用烟熏联合脂多糖滴入气管的方法建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型,将造模大鼠随机分为模型组(COPD)、虫草素低、中、高剂量组(Cor-L、M、H,10、20、50 mg/kg)、阳性对照组(NAC,0.5 g/kg),另设置正常培养的大鼠为对照组(NC)。使用肺功能仪检测大鼠肺功能指标呼气峰流速(PEF)、用力肺活量(FVC);HE染色观察大鼠肺组织病理学变化;对肺泡灌洗液白细胞进行计数分离;ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6和LTB4水平;微量法试剂盒检测肺组织中MDA、SOD、GSH-Px水平;Western Blot检测MAPK/AP-1信号通路蛋白表达。结果 与NC组比较,COPD组大鼠肺组织出现肺泡肿大,炎性细胞浸润等病理学变化,肺功能(PEF、FVC)、巨噬细胞比率、淋巴细胞比率、SOD、GSH-Px活性显著下降,白细胞数目、中性粒细胞比率、TNF-α、IL-6和LTB4水平、MDA含量、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p38、C-jun、C-fos蛋白表达显著上升(P<0.05);与COPD组比较,Cor各剂量组、NAC组大鼠肺组织病理学变化明显好转,肺功能(PEF、FVC)、巨噬细胞比率、淋巴细胞比率、SOD、GSH-Px活性显著上升,白细胞数目、中性粒细胞比率、TNF-α、IL-6和LTB4水平、MDA含量、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p38、C-jun、C-fos蛋白表达显著下降(P<0.05);NAC组与Cor-H组上述指标无显著差异(P>0.05)。结论 虫草素可以抑制MAPK/AP-1信号通路,减轻炎症反应和氧化应激,改善慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织病理损伤。

参贝北瓜颗粒对支气管哮喘大鼠气道炎症和肺组织病理变化的影响

目的探讨参贝北瓜颗粒对卵清蛋白诱发的大鼠哮喘模型气道炎症和肺组织病理学的影响。方法建立卵清蛋白诱导的SD大鼠哮喘模型,参贝北瓜颗粒高剂量组和低剂量组分别灌胃给予参贝北瓜颗粒20 g·kg^(-1)和10 g·kg^(-1),布地奈德组给予布地奈德(0.03 mg·kg^(-1))雾化治疗,空白组与模型组分别灌胃给予等体积生理盐水。雾化激发期间记录大鼠哮喘临床症状,并量化评分;ELISA法测定大鼠血清中卵清蛋白特异性免疫球蛋白E(OVA-IgE)浓度;测定支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)的白细胞分类计数并计算嗜酸性粒细胞的比例;肺组织行HE及PAS染色,观察肺组织的病理学改变,测定支气管壁各层厚度。结果参贝北瓜颗粒能缓解哮喘大鼠的临床症状,降低模型大鼠血清中OVA-IgE水平(P<0.05,P<0.01);抑制肺泡灌洗液中各类白细胞的增加,嗜酸粒细胞比率有所下降(均P<0.01);肺组织病理学显示其能抑制支气管平滑肌和支气管壁增厚,减少支气管上皮杯状细胞增生及黏液的过度分泌,使炎性细胞浸润程度减轻(均P<0.01)。结论参贝北瓜颗粒可能通过缓解支气管哮喘模型大鼠的气道炎症、改善支气管上皮细胞的病理学改变,从而发挥治喘作用。