大黄䗪虫丸对博来霉素致肺纤维化大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的基于“肺络干血”假说,探究大黄䗪虫丸对博来霉素致肺纤维化大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法将60只健康雄性SD大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、吡非尼酮组(C)、大黄虫丸大剂量组(D)、大黄䗪虫丸中剂量组(E)、大黄䗪虫丸小剂量组(F),每组10只。除A组外各组采用气管内滴入博来霉素(5 mg/kg)复制大鼠肺纤维化模型。连续给药28天后处死大鼠,取肺组织行Masson染色观察病理变化,实时PCR检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、I型胶原(Collagen I)及Smad3蛋白的mRNA表达;Western blot法检测Smad3、p-smad3的蛋白表达水平。结果病理:B组纤维化改变明显,F组纤维化程度为各用药组中最轻。PCR:较A组相比,B^E组大鼠TGF-β1、Smad3及Collagen I的基因表达均显著升高(P<0.01),F组Smad3、Collagen I的基因表达显著升高(P<0.01),TGF-β1的基因表达明显升高(P<0.05);较B组相比,F组TGF-β1、Smad3的基因表达显著降低(P<0.01),Collagen I的基因表达明显降低(P<0.05);较C组相比,F组TGF-β1的基因表达显著降低(P<0.01),Smad3、Collagen I的基因表达明显降低(P<0.05)。Western blot:与A组相比,B组Smad3蛋白表达明显升高(P<0.05)、B^D组p-smad3蛋白表达均显著升高(P<0.01),E组p-smad3蛋白表达明显升高(P<0.05);与B组相比,E组Smad3、D组p-smad3蛋白表达明显降低(P<0.05),E、F组p-smad3蛋白表达均显著降低(P<0.01);与C组相比,F组p-smad3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论大黄䗪虫丸有抗纤维化的作用,可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减少细胞外基质沉积有关,小剂量使用效果最佳。

大黄䗪虫丸对TGF-β1干预后A549细胞EMT与Smad2及Collagen Ⅰ表达情况的影响

目的基于"特发性肺纤维化患者存在肺络干血"假说,观察大黄䗪虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞EMT及Smad2,CollagenⅠ表达的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法正常培养并取对数生长期A549细胞,TGF-β1对其干预48 h,电子显微镜下观察A549细胞的形态学变化;选择吡非尼酮作为阳性对照药,RTPCR法检测EMT相关基因及Smad2 mRNA的表达;Western blot法检测Smad2、p-smad2、CollagenⅠ蛋白表达。结果成功获取发生EMT的A549细胞;以Fibronectin mRNA表达情况判断EMT程度由高到低依次为:模型组(M),大黄䗪虫丸含药血清大剂量组(D),大黄䗪虫丸含药血清中剂量组(Z),西药组(P),大黄䗪虫丸含药血清小剂量组(X),空白对照组(K);作为细胞外基质(EMC)重要成分,与M相比,Z与X中CollagenⅠ表达显著降低(P<0.01),亦较接近K中表达(P>0.05);与M相比,X中Smad2表达显著降低(P<0.01),P与Z中Smad2表达降低(P<0.05),且表达值均接近K(P>0.05);与M相比,D、Z、X中Smad2 mRNA及p-smad2表达均显著降低(P<0.01),但与K中表达值亦有显著差异(P<0.01)。结论大黄䗪虫丸对TGF-β1干预后A549细胞发生EMT程度及Smad2,CollagenⅠ的表达有影响,推测大黄䗪虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β1/Smad2介导的EMT有关。

大黄䗪丸对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响

目的基于"特发性肺纤维化(IPF)患者存在肺络干血"假说,观察大黄䗪虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响,探讨其防治特发性肺纤维化的作用机制。方法正常培养并取对数生长期A549细胞,5 ng/mL的TGF-β1对其干预后,Masson染色观察上皮-间充质转化(EMT)过程;选择吡非尼酮作为阳性对照药,采用血清药理学和cck-8法观察不同浓度大黄䗪虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响。结果成功获取发生EMT的A549细胞;24 h,OD值从高到低依次为:空白对照组(K组)、大黄䗪虫丸含药血清中剂量组(Z组)、大黄䗪虫丸含药血清小剂量组(X组)、模型组(M组)、大黄䗪虫丸含药血清大剂量组(D组)、西药组(P组);48 h,OD值从高到低依次为:K组、M组、Z组、X组、P组、D组;72 h,OD值从高到低依次为:K组、M组、D组、Z组、P组、X组。结论大黄䗪虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖率有影响,推测大黄䗪虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β1诱导的EMT有关。

大黄䗪虫丸对转化生长因子-β_(1)诱导A549细胞上皮-间充质转化的影响

目的:基于“IPF患者存在肺络干血”假说,观察大黄䗪虫丸含药血清对TGF-β_(1)诱导后A549细胞上皮-间充质转化(EMT)及Smad3,CollagenⅢ表达的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法:正常培养并取对数生长期A549细胞,TGF-β_(1)对其诱导48 h,电子显微镜下观察A549细胞的形态学变化;选择吡非尼酮(PFD)为阳性对照药,RT-PCR法检测EMT相关基因及Smad3 mRNA的表达;Western Blottingting法检测Smad3,p-Smad3,CollagenⅢ蛋白表达。结果:成功获取发生EMT的A549细胞;以α-SMA mRNA表达情况判断EMT程度由高到低依次为:模型组(M),大黄䗪虫丸含药血清大剂量组(D),西药组(P),大黄䗪虫丸含药血清中剂量组(Z),大黄䗪虫丸含药血清小剂量组(X),空白对照组(K);与M组比较,Z组,X组,P组中CollagenⅢ表达不同程度降低(P<0.05),且其在Z组与K组中表达差异无统计学意义(P>0.05);与M组及K组比较,各观察组Smad3表达差异无统计学意义(P>0.05),但对其基因及磷酸化,即Smad3 mRNA及p-Smad3的表达有影响,且与M组比较,Z组,X组,P组中均不同程度降低(P<0.05),D组中表达虽低于M组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大黄䗪虫丸对TGF-β_(1)诱导后A549细胞发生EMT程度与Smad3 mRNA及CollagenⅢ的表达有影响,推测大黄䗪虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β_(1)/Smad3介导的EMT有关。

大黄■虫丸对TGF-β1诱导A549细胞Rho/ROCK信号通路表达的影响

目的:观察大黄■虫丸含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导后A549细胞RhoA/ROCK信号通路表达情况的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法:正常培养并取对数生长期A549细胞,TGF-β1对其诱导48 h,电子显微镜下观察A549细胞的形态学变化;选择吡非尼酮作为阳性对照药,RT-PCR法检测TGF-β1、ROCK1、CollagenⅢ mRNA的表达;Western Blot法检测p-RhoA、ROCK1、α-SMA蛋白的表达。结果:成功获取发生上皮细胞-间充质转化(EMT)的A549细胞;与模型组比较,各给药组CollagenⅢ mRNA表达均显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,除大黄■虫丸大剂量组ROCK1 mRNA下调不明显外,其他各实验组TGF-β1 mRNA、p-RhoA蛋白、ROCK1 mRNA及其蛋白的表达均出现不同程度下调(P<0.01)。结论:大黄■虫丸可通过不同程度下调TGF-β1介导RhoA/ROCK1信号通路相关的EMT程度,起到抗纤维化作用,且与其剂量密切相关。