肺缺血再灌注细胞模型的建立及Bag-1表达

目的 建立肺缺血再灌注细胞模型并研究BCL-2结合抗凋亡基因(BCL-2 associated anthanogen-1,Bag-1)在肺缺血再灌注中的表达,以期为研究Bag-1在肺缺血再灌注疾病的作用机制提供实验基础。方法 本课题以A549细胞系作为肺缺血再灌注模型的细胞模型,实验分5组,将A549细胞给予不同缺氧时间:0 h、6 h、12 h、18 h、24 h缺氧,再复氧24 h处理后,通过低温、低氧、葡萄糖剥夺建立缺血再灌注细胞模型。通过比较5组细胞活性、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)以及活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平,确定建模效果,同时观察Bag在肺缺血再灌注中的表达。结果 不同缺氧时间处理后,缺氧组细胞活性均较正常组细胞活性降低(P<0.01),并随缺氧时间延长细胞活性下降,各时间点间细胞活性存在显著差异(F=85.03,P<0.001)。缺氧组LDH、ROS浓度均较正常组细胞明显升高(P<0.01),各时间点间LDH(F=107.67,P<0.001)、ROS(F=42.61,P<0.001)水平具有统计学意义,Bag-1表达在缺氧6 h时最高,后随时间延长水平逐渐下降。结论 以A549细胞系作为模型细胞,以低温、低氧、葡萄糖剥夺为方法可成功建立缺血再灌注细胞模型,Bag-1在缺血再灌注损伤中表达趋势为先升高,再降低。

生脉饮复合依托咪酯预处理对肺缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

缺血再灌注(IR)是引起临床肺移植、创伤和急性肺损伤(ALI)的主要原因之一。IR引起的炎症反应和氧化应激是导致和加重其继发性损伤的重要因素。本研究旨在探究生脉饮复合依托咪酯对肺缺血再灌注损伤(LIRI)的治疗作用及其机制。方法 我们用雄性SD大鼠构建LIRI模型,并给药生脉饮和依托咪酯。通过检测大鼠肺组织损伤和氧化应激相关分子的表达,我们探究了生脉饮和依托咪酯对缺血再灌注后肺组织损伤和氧化应激的影响。此外,我们还研究了TLR4信号通路活性的变化,以阐明生脉饮的作用机制。结果 IR后大鼠肺组织损伤相关指标的表达水平明显上升,而生脉饮和依托咪酯则减轻了这种损伤程度。此外,IR后大鼠肺组织的氧化应激水平明显增加,表现为抗氧化分子SOD含量下降、MDA含量上升,而生脉饮和依托咪酯则提高了大鼠肺组织的抗氧化水平。IR后的肺组织中,TLR4等信号通路的活性明显增加,而生脉饮和依托咪酯则抑制了这些信号通路的活性。结论 生脉饮复合依托咪酯预处理可能通过减轻大鼠肺脏病理性损伤、改善肺功能、减轻细胞氧化应激、和抑制TLR4信号通路,从而缓解LIRI。

麦冬多糖通过Nrf2/HO-1信号通路对肺缺血再灌注损伤大鼠肺组织的保护作用

目的:探讨麦冬多糖(OP)对肺缺血再灌注损伤(LIRI)大鼠肺组织的保护作用。方法:60只SD雄性大鼠随机分为假手术组,LIRI组,OP低、中、高剂量组,OP高剂量+核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂ML385组(OM组),每组10只。OP低、中、高剂量组造模前分别给予50、100、200 mg/kg OP连续灌胃14 d,假手术组和LIRI组给予等体积生理盐水灌胃,OM组在高剂量OP处理基础上,于造模前1 h腹腔注射30 mg/kg ML385。除假手术组外其余各组采用夹闭左肺门法建立大鼠LIRI模型。缺血再灌注120 min后处死大鼠,计算各组大鼠肺组织湿/干质量比,检测血浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测肺组织中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、 Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)水平,实时荧光定量PCR法检测Nrf2、HO-1 mRNA的表达。结果:与假手术组相比,LIRI组大鼠肺组织湿/干质量比升高(P<0.05);血浆中SOD活性降低、MDA含量升高(P<0.05);肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05);肺组织Nrf2、HO-1蛋白和mRNA的表达升高(P<0.05)。OP可逆转LIRI大鼠以上指标的变化,且有一定的剂量依赖性(P<0.05)。与OP高剂量组相比,OM组大鼠肺组织湿/干质量比升高(P<0.05);血浆中SOD活性降低、MDA含量升高(P<0.05);肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05);肺组织Nrf2、HO-1蛋白和mRNA的表达降低(P<0.05)。结论:OP对LIRI大鼠肺组织有一定的保护作用,该作用可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

缺血后处理通过抑制细胞焦亡减轻大鼠肺缺血/再灌注引发的肝损伤

目的:探讨细胞焦亡在大鼠肺缺血/再灌注(I/R)引发的肝脏损伤中的作用及缺血后处理(I-post-C对其干预的保护机制。方法:将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照(control)组、I/R组、I/R+I-post-C组及I/R+INF39(细胞焦亡抑制剂)组,每组8只。普通光镜下观察肝脏组织形态;用相关化学试剂盒测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和caspase-1活性;采用ELISA的方法检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18水平;使用Western blot及免疫荧光法检测肝组织细胞焦亡相关蛋白的表达情况。结果:与control组相比,I/R组肝小叶结构紊乱,部分肝细胞出现水肿、空泡样变性和坏死,炎症细胞浸润,血清ALT和AST水平显著升高(P<0.01);细胞焦亡相关指标核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)和gasdermin D N端片段(GSDMD-N)蛋白表达增加(P<0.05);NLRP3的免疫荧光表达显著增强(P<0.01);caspase-1活性显著上升(P<0.01);血清中IL-1β和IL-18水平显著升高(P<0.01)。与I/R组相比,I/R+I-post-C组和I/R+INF39组的肝细胞水肿减轻、坏死减少,中央静脉、肝血窦扩张及淤血减轻;大鼠血清ALT和AST水平显著降低(P<0.05);NLRP3免疫荧光表达减弱(P<0.05);细胞焦亡相关指标NLRP3、caspase-1和GSDMD-N的蛋白水平显著降低(P<0.01);血清中IL-1β和IL-18含量显著降低(P<0.01)。结论:I-post-C可通过抑制细胞焦亡减轻大鼠肺I/R引发的肝损伤。

缺血预处理通过抑制铁死亡减轻大鼠肺缺血-再灌注损伤

目的:探讨铁死亡是否参与大鼠肺缺血-再灌注损伤(LIRI),以及缺血预处理(I-pre-C)是否通过抑制铁死亡而减轻LIRI。方法:将SPF级雄性SD大鼠随机分成4组:对照组(control组),缺血-再灌注(IR)30 min组(IR组)、铁死亡抑制剂去铁胺(DFO)组(IR+DFO组)和I-pre-C组,进行指标检测及肺脏病理观察。使用光镜、电镜和二氢乙啶(DHE)染色等评估大鼠肺组织的损伤程度;Western blot等方法检测缺血-再灌注肺组织铁死亡的相关指标。结果:与control组相比,IR组肺组织的活性氧(ROS)水平升高,丙二醛(MDA)和Fe水平升高,谷胱甘肽(GSH)水平下降,铁死亡相关蛋白酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)和转铁蛋白受体1(TFR1)水平升高,铁蛋白重链1(FTH1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)下降(P<0.01);与IR组相比,IR+DFO组肺组织的ROS水平显著下降,铁死亡的线粒体形态有所改善,MDA水平下降,GSH水平上升(P<0.01);与IR组相比,I-pre-C明显改善了大鼠肺组织损伤,肺组织ROS水平显著下降(P<0.01),且能够降低IR引起的MDA水平和Fe的累积,升高GSH水平,同时有效调控铁死亡相关蛋白的水平,包括下调ACSL4和TFR1及上调FTH1和GPX4水平(P<0.01)。结论:铁死亡参与大鼠LIRI;抑制铁死亡能够有效缓解IR引起的肺损伤;I-pre-C通过抑制铁死亡而减轻大鼠LIRI。

缺血后处理通过ROS-TXNIP-NLRP3-GSDMD途径抑制大鼠肺缺血/再灌注诱导的细胞焦亡

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体介导的细胞焦亡在大鼠肺缺血/再灌注损伤(lung ischemia/reperfusion injury,LIRI)中的作用及缺血后处理(ischemic post-conditioning,I-post-C)的干预效果。方法:将20只6~8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为4组:对照(control)组、LIRI组、I-post-C组和INF39(细胞焦亡抑制剂)+LIRI组。实验结束后处死大鼠,取左肺组织;普通光镜下观察肺组织形态;采用二氢乙啶染色评价肺组织活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;采用试剂盒检测肺组织氧化应激指标丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的变化及caspase-1活性;用ELISA评估白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18水平;RT-qPCR检测NLRP3、IL-1β和IL-18的mRNA表达水平;Western blot检测NLRP3、gasdermin D N端片段(N-terminal fragment of gasdermin D,GSDMD-N)、cleaved caspase-1和硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxininteracting protein,TXNIP)的蛋白水平;用免疫荧光染色法检测TXNIP的表达。结果:LIRI组肺组织表面呈暗红色与淡红色相间,质实较脆,有明显的肺泡壁破裂、肺泡变形塌陷、中性粒细胞和红细胞浸润以及间质性水肿。与control组相比,LIRI引起大量ROS产生(P<0.01),LIRI组肺组织中MDA含量和MPO活性显著增加(P<0.01),GSH含量显著减少(P<0.01),TXNIP的mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.05),肺组织中IL-1β和IL-18的mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01),NLRP3的mRNA及蛋白水平显著上调(P<0.05),GSDMD-N和cleaved caspase-1的蛋白水平显著升高(P<0.01)。与LIRI组相比,I-post-C组肺组织损伤明显减轻,肺组织中ROS的累积显著减少(P<0.01),MDA含量和MPO活性显著降低(P<0.05),GSH含量显著增加(P<0.01),TXNIP的mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05)。与LIRI组相比,I-post-C和INF39+LIRI组肺组织中IL-1β、IL-18和NLRP3的mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05),GSDMD-N和cleaved caspase-1的蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:缺血/再灌注可激活细胞焦亡并引起大鼠肺损伤,I-post-C可减轻大鼠LIRI,其机制可能与ROS-TXNIP-NLRP3-GSDMD通路有关。

激活CB2R抑制凋亡减轻肺缺血再灌注损伤的机制研究

目的:建立C57BL/6小鼠肺缺血再灌注模型,选用大麻素2(CB2)受体激动剂JWH-133和拮抗剂AM-630预处理,研究CB2R在缺血再灌注所致肺损伤中的作用。方法:48只小鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、JWH133组和AM630+JWH133组,每组各12只。I/R组小鼠开胸后采用血管钳夹闭左侧肺门1 h,松开血管钳后再灌注2 h,Sham组小鼠开胸后只分离但不夹闭左侧肺门,双肺通气3 h;JWH133组阻断肺门前5 min于腹腔内注射JWH-133(5 mg/kg),使用血管钳夹闭左侧肺门缺血1 h,松开后再灌注2 h;AM630+JWH133组在注射JWH-133前30 min腹腔内注射AM-630(2 mg/kg),其余同JWH133组。每组小鼠再随机分为2个亚组,分别用于血气分析和肺湿干比测定、肺组织病理学检查和凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和caspase-9)的检测。结果:与I/R组比较,JWH133组小鼠氧合指数增加,肺湿干比和肺损伤病理学评分降低,HE染色显示肺组织结构明显改善,Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax和caspase-9蛋白表达明显降低。在给予JWH-133前腹腔内注射AM-630预处理后,JWH-133的上述作用被逆转。结论:腹腔内注射CB2R激动剂JWH-133可以抑制小鼠肺组织细胞凋亡,明显减轻肺缺血再灌注损伤。细胞凋亡可能参与了激活CB2R所介导的肺保护作用。

褪黑素通过JAK2/STAT3信号通路对糖尿病大鼠肺缺血再灌注损伤的作用机制研究

目的探讨褪黑素对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肺缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及其潜在分子机制。方法将大鼠随机分为对照+假手术组(Control+Sham组)、糖尿病+假手术组(DM+Sham组)、对照+缺血再灌注组(Control+IR组)、糖尿病+缺血再灌注组(DM+IR组)、糖尿病+缺血再灌注+褪黑素组(DM+IR+MT组),每组8只。检测各组大鼠的肺组织湿重/干重(W/D)比值;苏木精-伊红染色检测各组大鼠肺组织病理学变化;检测各组大鼠肺组织中氧化应激因子谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)活性;ELISA实验检测炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的浓度;蛋白质印迹法检测各组大鼠肺组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白水平。结果与Control+Sham组比较,Control+IR组中W/D比值升高,肺泡间隔和间隙水肿,间质增厚,肺泡内出血和白细胞浸润,肺损伤评分较高,GSH-PX、SOD、T-AOC活性降低,MDA水平升高,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平升高(P<0.05)。DM+Sham组和DM+IR组的上述指标进一步升高,其中DM+IR组的差异性更显著。与DM+IR组比较,DM+IR+ME组中W/D比值显著降低,肺组织损伤明显减轻,肺损伤评分降低,GSH-PX、SOD、T-AOC活性显著升高,MDA水平显著降低,IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平降低(P<0.05)。结论褪黑素通过降低氧化应激和炎症水平从而减轻糖尿病大鼠的肺I/R损伤,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路有关。

肺缺血再灌注损伤后TNF_α、IL-6和IL-8的变化及其意义

为探讨炎性细胞因子在肺缺血再灌注损伤发病机制中的作用，采用大鼠在体温缺血再灌注模型，动态测定了肺组织和血浆肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ_α）、白介素-６（ＩＬ－６）和白介素－８（ＩＬ－８）含量的变化。结果表明，肺缺血再灌注损伤早期肺组织ＴＮＦ_α、ＩＬ－６、ＩＬ－８相继释放增加，上述因子的血浆变化滞后于肺组织变化。提示炎性细胞因子参与了肺缺血再灌注损伤的发生和发展过程。

黄芪甲苷保护大鼠肺缺血再灌注肺损伤的形态学研究

目的研究黄芪甲苷保护肺缺血再灌注肺组织损伤的作用机制。方法建立SD大鼠肺缺血再灌注实验模型,假手术组为空白对照组,黄芪甲苷用1%羧甲基纤维素钠配制成8、6、3mg/ml浓度的溶液,灌胃剂量按1ml·100g-1体质量给药,肺缺血再灌注1h后取肺组织测肺湿干比值(W/D)和肺髓过氧化物酶(MPO)活性,在光镜和透射电镜下观察肺组织的形态结构变化。结果模型组肺(W/D)和MPO最大,与假手术组比较有显著性差异(P<0.05)。黄芪甲苷各组肺W/D及MPO均较模型组低(P<0.01,P<0.05),黄芪甲苷中剂量组的肺W/D及MPO最低。形态学观察显示,模型组肺毛细血管扩张,红细胞漏出,肺泡腔含大量水肿液,肺Ⅰ型和肺Ⅱ型上皮细胞均有显著的病理改变。黄芪甲苷高、中、低剂量组中,肺毛细血管扩张程度均不同程度降低,其中以中剂量组效果最为明显,肺泡腔内无水肿液及漏出的红细胞,肺Ⅱ型上皮细胞脱颗粒减少。结论黄芪甲苷对大鼠肺缺血-再灌注肺损伤有明显的对抗作用,以中剂量组效果最好。

氧化应激与总肺缺血再灌注细胞凋亡的相关性及川芎嗪干扰的影响

目的探讨氧化应激在兔肺组织细胞凋亡中的作用及川芎嗪的影响。方法制备兔在体原位肺缺血再灌注(IR)损伤模型(PIRI),于IR 1、3、5 h分别测各组血浆MDA及SOD活力。应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL),检测IR损伤引起的肺细胞凋亡的变化;进行氧化应激指标与细胞凋亡的相关性分析。结果 IR组1、3、5 h各组血浆SOD活力较假手术组比较显著降低(均P<0.05),TMP组在缺血1 h再灌注1、3、5 h SOD与IR组比较SOD活力明显升高(P<0.05,P<0.01)。在缺血1 h再灌注1、3、5 h IR组与假手术组比较MDA含量显著增高(P<0.01),TMP组在再灌注1、3、5 h的MDA含量显著高于假手术组(P<0.05,P<0.01),但低于IR组(P<0.05,P<0.01)。肺IR后IR组1、3、5 h发生明显的肺细胞凋亡(均P<0.01),而TMP组细胞凋亡指数与同一时相IR组比较显著降低(P<0.05,P<0.01);SOD与细胞凋亡指数呈负相关(r=-0.665,P<0.05),MDA与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.764,P<0.05)。结论氧化应激导致的细胞凋亡在肺IR损伤机制中可能发挥着重要作用,川芎嗪可抑制氧化应激反应从而减轻细胞凋亡的发生,此机制可能是川芎嗪减轻肺IR损伤的机制之一。

评价早期肺缺血再灌注损伤敏感性的细胞因子探讨

[目的]探讨敏感反映早期肺缺血再灌注损伤的细胞因子。[方法]复制兔早期在体肺缺血再灌注模损伤模型,分 别于左肺门阻断2 h和恢复灌注1 h后采取动脉血液标本行血气分析和采用酶联免疫吸附法测定动脉血白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-6(1L-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α);摘取左肺行病理学检查和测定湿、干质量及 湿干重比。并与缺氧对照组比较,动态观察细胞因子的水平变化。[结果]成功制作兔早期在体肺缺血再灌注损伤模型,在实验 全过程中,两组外周血的IL-6和IL-8含量均无明显变化(P>0.05);恢复灌注1 h后,缺血再灌注组的IL-1β和TNF-α 含量明显高于对照组和灌注前(P<0.01)。[结论]细胞因子IL-1β和TNF-α是评价兔早期肺缺血再灌注损伤敏感性的细胞 因子。

乳化氟碳联合川芎嗪对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨乳化氟碳联合川芎嗪对肺缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法建立大鼠肺缺血再灌注模型,随机分为对照组(C组)、川芎嗪组(T组)、乳化氟碳组(P组)和乳化氟碳联合川芎嗪组(TP组),每组10只,分别在恢复血供前5 min由尾静脉给药,并在恢复血供3 h后处死动物,取肺脏组织测定丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,观察肺脏组织病理改变并评分。结果 T组、P组、TP组肺组织MDA、MPO含量显著低于C组(P<0.05),TP组MPO含量显著低于T组和P组(P<0.05);T组、P组、TP组肺组织SOD含量显著高于C组(P<0.05),TP组SOD活性显著高T组和P组(P<0.05);4组动物肺组织TNF-α含量无统计学差异(P>0.05);C组肺组织可见明显水肿、肺泡腔可见红细胞及渗出;T组、P组肺组织未见明显水肿,可见少量红细胞及渗出;TP组肺组织未见明显水肿,可见少量渗出;C组病理积分大于T组、P组及TP组,T组及P组病理积分大于TP组(P<0.05)。结论乳化氟碳及川芎嗪可提高内源性清除氧自由基的能力,抑制中性粒细胞在肺内聚集,减少肺缺血再灌注损伤,两者联合使用效果更好。

大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺缺血再灌注损伤后的肺保护机制

目的探讨大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺缺血再灌注损伤后肺的保护作用以及可能的作用机制。方法将健康雄性SD大鼠60只随机分成4组:对照组、氨溴索组、肺缺血再灌注(I/R)组、I/R+氨溴索组,每组15只。造模前分别给予大剂量氨溴索组和I/R+氨溴索组静脉注射盐酸氨溴索0.75g/L,分别给予对照组和I/R组注射与上述氨溴索治疗量等容量的生理盐水。观察肺组织病理学改变并评分,检测湿干重比值(W/D)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞凋亡数目、核转录因子-κB(NF-κB),Western blot方法观察大鼠肺组织Toll样蛋白4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路的蛋白表达水平。结果与对照组相比,I/R组肺泡壁增宽,肺泡腔内可见出血等炎症表现,W/D、炎症因子显著升高,肺组织W/D、IL-1β、TNF-α、凋亡细胞、NF-κB活性和TLR4信号通路相关蛋白表达水平明显升高;与(I/R)组相比,I/R+氨溴索组肺泡腔内出血、水肿等炎症表现减轻,W/D、炎症因子、凋亡细胞显著降低,肺组织NF-κB转录活性及TLR4信号通路表达水平明显降低。结论大剂量盐酸氨溴索通过下调TLR4信号通路发挥对缺血再灌注损伤大鼠的肺保护作用。

山莨菪碱对兔肺缺血-再灌注损伤保护作用的实验研究

目的 :探讨山莨菪碱对肺缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法 :建立兔单肺原位温缺血再灌注模型。 30只日本大耳白兔随机分成 3组 ,每组 10只。对照组不行缺血再灌注处理 ;缺血再灌注组行左肺缺血再灌注处理 ;山莨菪碱组行左肺缺血再灌注处理 ,并静脉给予山莨菪碱 (8mg/kg)。各组进行肺组织湿/干质量比 (W/D)、丙二醛 (MDA )、髓过氧化物酶 (MPO)活性和肺毛细血管通透指数 (L PI)的测定 ,并进行肺组织光镜、电镜的观察及肺组织损伤 (L TD)程度的定量评价。结果 :经 90 min缺血、12 0 m in再灌注后 ,缺血再灌注组的 W/D、L PI、MDA、MPO活性及 L TD程度较对照组均显著升高 (P均 <0 .0 1) ,肺组织病理损伤明显。山莨菪碱组可降低上述指标的水平 (P均 <0 .0 1)和病理损伤。结论 :山莨菪碱对肺缺血再灌注损伤有明显的保护作用 ,其作用机制与抑制中性粒细胞在肺内积聚、减轻氧自由基造成的肺损伤有关。

大鼠肺缺血再灌注损伤后前炎症细胞因子IL-1β mRNA的表达分析

目的通过对大鼠移植肺灌洗后、冷缺血保存和再灌注期间前炎症细胞因子IL-1β mRNA的表达进行分析,探讨IL-1β在此过程中介导的移植肺炎性损伤机制。方法本研究大鼠分6组,包括:正常肺(未灌洗)对照组、仅肺灌洗处理组、肺灌洗后冷缺血保存6h、12h、24h各1组、冷缺血保存24h后左肺移植再灌注3h组。在相应各时间点采取肺组织,用荧光定量实时PCR法检测IL-1β mRNA的表达并进行髓过氧化物酶(MPO)活性测定。结果除冷缺血12h组和冷缺血24h组之间IL-1β mRNA表达相对量差别不显著外(P=0.167),其余各组之间IL-1β表达相对量差别均有显著统计学意义(P<0.05)。仅灌洗组、冷缺血组和24h冷缺血移植再灌注3h组的IL-1β mRNA表达相对量均高于正常对照组,且随处理时间的延长而表达增加。仅灌洗组、冷缺血组和24h冷缺血移植再灌注3h组的MPO活性均高于正常对照组,且随处理时间的延长而表达增加,P<0.05。各组肺组织中MPO活性和IL-1β mRNA相对表达量呈较强的正相关关系,相关系数r=0.869,P<0.01。结论前炎症因子IL-1β在肺缺血再灌注损伤机制中发挥着重要炎性损伤作用,可以作为移植肺功能评价及预后的重要指标之一;IL-1β基因的表达在保存液灌洗后的冷缺血保存早期就开始出现,而不是在再灌注之后的事件。

血红素氧合酶对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

探讨血红素氧合酶 1(HO 1)对大鼠肺缺血再灌注损伤 (I/R)的保护作用。Wistar大鼠随机分成假手术 (sham)组、I/R组、Hemin组和ZnPP IX组。采用夹闭大鼠左肺门 30min ,再灌注 12 0min ,分别观察各组HO 1活性 ,肺组织形态学变化 ,肺湿干重比、伊文思蓝含量、支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞计数及蛋白含量变化。与sham组比较 ,I/R组和hemin组肺组织HO 1活性显著增高 (P <0 0 1) ,ZnPP IX组能取消hemin诱导的HO 1活性增高 (P <0 0 1)。光镜下可见I/R组和ZnPP IX组肺组织水肿 ,部分动物肺泡腔中可见出血 ,并伴有局部肺不张 ,而hemin组肺组织形态学改变明显减轻。Hemin组肺湿干重比、伊文思蓝含量、BALF中细胞数和蛋白含量均低于I/R组和ZnPP IX组 ,但仍高于sham组 (P <0 0 1)。结果提示 ,HO

异丙酚对CO_2气腹后大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的观察异丙酚对CO2气腹后大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法选择雄性大鼠48只,随机分为A、B、C、D组,每组12只。A、B、C组经尾静脉泵注生理盐水、D组经尾静脉泵注异丙酚。A组不做其他处理,B组经CO2气腹建立大鼠肺缺血模型,C、D组经CO2气腹建立大鼠肺血再灌注模型。各组造模后处死大鼠,取肺组织检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),计算肺湿干质量比(W/D),采用免疫组化法、Real-time PCR法、Western blotting法分别检测肺组织中HO-1阳性细胞数、蛋白表达及mRNA水平。结果 B、C组SOD、MDA、W/D与A组比较差异有统计学意义(P均<0.05),D组SOD、MDA、W/D与A组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。D组肺组织中HO-1蛋白表达阳性细胞数、蛋白相对表达量、mRNA相对表达量高于其他三组(P均<0.01)。结论异丙酚在CO2气腹后大鼠肺脏血再灌注损伤中具有保护作用,其机制可能与HO-1表达增加有关。