丁酸钠诱导人慢性髓系白血病K562细胞肺耐药相关基因蛋白的表达

背景与目的:肺耐药相关蛋白(lungresistance-relatedprotein,LRP)的过度表达是急性白血病患者对化疗不敏感及提示不良预后的指征之一。本研究探讨丁酸钠(sodiumbutyrate,NaB)对人慢性髓系白血病K562细胞LRP表达的诱导作用,并初步探讨LRP对细胞内阿霉素(adriamycin,ADM)、柔红霉素(daunorubicin,DNR)浓度的影响。方法:以K562细胞为体外模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NaB作用前后K562细胞LRPmRNA的水平;采用流式细胞仪结合间接免疫荧光检测比较NaB处理前后K562细胞LRP蛋白表达的变化。分别以流式细胞仪和荧光显微镜检测NaB处理前后K562细胞内DNR的蓄积和细胞内ADM分布的变化。结果:经2mmol/LNaB处理后较之处理前:①K562细胞的LRPmRMA水平明显增加;②LRP蛋白表达由阴性转为阳性,阳性细胞百分率由1.65%上升到35.81%;③经NaB处理后K562细胞内DNR的蓄积明显减少,细胞内DNR平均荧光较处理前减少了68.36%;④ADM在细胞核内分布明显减少,在细胞浆内分布明显增多。结论:NaB可诱导K562细胞LRPmRNA水平和蛋白表达的增加,LRP表达可造成细胞内DNR蓄积减少和ADR由细胞核向细胞浆转移。

SiRNA逆转肺耐药相关蛋白表达介导的白血病细胞多药耐药

目的:研究双链短干扰RNA(siRNA)对白血病多药耐药细胞模型(K562/NaB)肺耐药相关蛋白(LRP)表达及功能的影响.方法:针对LRP基因设计合成特异性siRNA,在脂质体介导下转染K562/NaB;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测K562细胞LRP mRNA的水平;用流式细胞术检测K562/NaB细胞LRP蛋白表达的变化和细胞内柔红霉素(DNR)的蓄积;MTT法检测阿霉素(ADM)对K562/NaB细胞耐药的半数抑制浓度(IC50).结果:siRNA转染后:K562/NaB细胞的LRPmRMA水平明显降低;LRP蛋白表达由阳性转为阴性;细胞内DNR的蓄积明显增加,DNR平均荧光增强3.28倍;对ADM药物敏感相对逆转效率为78.18%.结论:siRNA可逆转由LRP介导的白血病细胞多药耐药.

非小细胞肺癌端粒酶催化亚基hTERT mRNA测定及其临床意义

[目的]阐明非小细胞肺癌(NSCLC)端粒酶催化亚基hTERT与TNM分期的关系并探究其与多药耐药相关基因蛋白MRP,LRP的关系。[方法]对50例NSCLC手术切除标本进行以下测定 :以RT_PCR和免疫酶标法(ELISA)检测肺癌手术标本中端粒酶活性 ;应用PCR和定量放射端粒扩增法 (TRAP)检测hTERT活性 ,并对其灰度扫描以定量测定hTERT;以RT-PCR检测冰冻肺癌组织的MRP和LRP的mRNA水平。[结果]50例NSCLC中端粒酶阳性率为84% (42/50) ,hTERT阳性率为78%(39/50) ,两者之间呈较好的相关性 (P<0.001)。端粒酶阳性组hTERT定量值为136.98±53.63;端粒酶阴性组定量值为15.50±43.84,有显著性差异(P<0.05)。MRP的阳性率为42% (21/50) ;LRP为68% (34/50)。hTERT定性 ,定量表达与MRP呈强相关而与LRP无关。不同的肿瘤细胞病理类型或T分期之间 ,hTERT的定性和定量表达无显著差异。不同N分期者hTERT定量值有显著差异。而hTERT阳性率定性测定差异未达到统计学意义。不同TNM分期的hTERT的定量表达有明显差异。不同分化程度之间端粒酶活性、hTERT的定性和定量表达差异均无统计学意义。[结论]NSCLC的hTERT定量和定性表达与端粒酶之间均有很好的相关性和一致性。hTERT表达水平的高低与NSCLCTNM分期及淋巴结转移有关。