非吸烟型肺癌分子遗传学研究进展

吸烟是肺癌发病的首位原因,但全球仍有约25%(超过30万人)的非吸烟者死于肺癌。流行病学调查显示吸烟型和非吸烟型肺癌在临床和生物学特征上有重要差异,提示这两种癌症可能具有不同的癌发生机制。本文就非吸烟型肺癌的病理学特征、流行病学和分子遗传学研究等方面的新进展作一综述。

尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶1A7基因多态与肺癌遗传易感性的关系

背景与目的:代谢酶尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶1A7(UDP-glucuronosyltcansferase,UGT1A7)可催化香烟中的致癌物质苯并[琢]芘、亚硝胺NNK和杂环胺PhIP与葡糖醛酸结合使之失活,在解毒机制中起重要作用。本实验旨在研究UGT1A7基因多态与肺癌易感性的关系。方法:以聚合酶链反应-变性高效液相色谱(DHPLC)技术和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,分析317例正常对照和312例肺癌患者外周血淋巴细胞基因组DNA,UGT1A7129～131和208位点多态基因型分布,及其与肺癌风险的关系。结果:与携带UGT1A7*1/*1基因型个体比较,携带UGT1A7*3/*1基因型的个体患肺腺癌的风险增高1.80倍(校正的OR为1.80;95%CI1.03～3.12),携带UGT1A7*3基因型的个体患肺腺癌的风险增高1.59倍(校正的OR为1.59,95%CI0.96～2.63)。UGT1A7多态与肺鳞癌风险不相关。结论:UGT1A7基因多态可能是中国人肺癌遗传易感性因素。

ERCC1与XPD和XPA的遗传多态性对非小细胞肺癌铂类化疗敏感性预测的研究

目的：分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者ERCC1 Asn118Asn，XPD Lys751Gln和XPAA23G各基因型与以铂类为基础的化疗敏感性的关系，以及不同基因型之间疗效及生存期之间的差异。方法：采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法分析94例NSCLC患者的基因型，并与疗效及生存期结合分析。结果：XPD Lys751Gln Lys／Lys、Lys／Gln和Gln/Gln基因型之间的中位生存期差异有统计学意义，χ^2=7．353，P＝0．007。Lys／Lys中位生存期为11个月，而Lys／Gln和Gln／Gln中位生存期为12个月，95％Cl分别为9．94～12．06和11．21～12。79。Lys／Lys、Lys／Gln和Gin／Gin各基因型对含铂类方案化疗临床获益（CR＋PR＋SD）差异无统计学意义，χ^2=2．604，P=0．272。XPA A23G AA和GG基因型及ERCC1Asn118Asn AA和TT基因型疗效之间差异无统计学意义（χ^2=1．383，P=0．550；χ^2=0．451，P=1.000）。未检测到XPA及ERCCl杂合子基因型。结论：XPD751可作为预测肺癌患者生存期的一个重要指标，为肿瘤的个体化治疗提供理论依据。

肺癌遗传易感性与基因多态性的研究进展

肺癌是对人类生命威胁最大的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率在全球都呈上升趋势，全国第三次死因回顾调查报告显示，肺癌是我国居民第一位肿瘤死因，占恶性肿瘤分类构成22．7。肺癌死亡率在近30年上升了464．84％。

CYP1A2 163A／C基因多态性与肺癌遗传易感性的Meta研究

【目的】探讨CYP1A2＊1F基因多态性与肺癌易感性之间的关系。【方法】收集CYP1A2 163A／C基因多态性与肺癌易感性文献6篇，累计肺癌病例1033例，对照1626例，应用Meta分析探讨CYP1A2＊1F基因多态性与肺癌易感性之间的关系。【结果】CYP1A2＊1F基因多态性中CCVSAA的OR值为1．04，95％可信区间为0．54～2．02；ACVSAA的OR值为0．85，95％可信区间为，0．61～1．20；CC＋ACVSAA的OR值为0．88，95％可信区间为0．60～1．27；CC vs AA＋AC的OR值为0．83；95％可信区间为0．54～1．28。【结论】CYP1A2＊1F基因多态性不增加肺癌的患病风险。

Aurora-A激酶在人类不同肺癌细胞株中的表达

背景与目的近年来的研究发现Aurora-A在多种恶性肿瘤中高表达。本研究检测Aurora-A激酶在人类不同肺癌细胞株中的表达及其与DNA含量的关系,旨在寻找肺癌新的分子治疗靶点和肿瘤标记物,为指导肺癌个性化治疗提供一种新的方法。方法应用RT-PCR与Westernblot方法检测PG(高转移的巨细胞肺癌)、A549(肺腺癌)、NCI-H460(大细胞肺癌)3种肺癌细胞株Aurora-A的表达;流式细胞仪检测3种肺癌细胞DNA含量(四倍体及多倍体),分析Aurora-A的表达与DNA含量的相关性。结果半定量RT-PCR电泳结果显示,A549、PG、NCI-H460中Aurora-A/β-actin比值分别为1.16、1.14、0.84;Westernblot结果在A549、PG与NCI-H460中的Aurora-A/β-actin比值分别为21.13、8.96与6.43,提示3种肺癌细胞Aurora-A均呈高表达。A549、PG、NCI-H460细胞含有四倍体的细胞比例分别为14.97%、19.88%和10.60%,三者有显著性差异(P<0.01);其多倍体(>4N)的细胞比例分别为3.59%、2.66%、2.30%。提示Aurora-A表达强弱与肺癌细胞多倍体的比例高低有相关性。结论3种肺癌细胞中Aurora-A基因均高表达,其表达水平在不同肺癌细胞株中存在差异。

应用组织芯片技术检测KAI1、MRP-1、FAK蛋白在肺癌组织中的表达

背景与目的:肿瘤的发生发展、浸润转移与多基因改变密切相关。目前Kang-ai-1(KAI1)、移动相关蛋白(motility-relatedprotein-1,MRP-1)和局部粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)3种基因在肺癌中的共同作用研究较少。本研究旨在探讨这3种基因的蛋白产物在肺癌发生发展中的作用及其在肿瘤诊断和预后判断中的价值。方法:应用免疫组化SP方法检测包含240个点的肺癌组织芯片中KAI1、MRP-1和FAK蛋白的表达。结果:KAI1在肺癌原发灶中阳性率为25.9%,MRP-1为42.6%,与正常肺组织(100%)相比均显著下调;FAK蛋白在肺癌组织中阳性率为44.4%,与正常肺组织相比显著增高;KAI1、FAK两种蛋白在肺癌组织中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大体类型及组织类型无关,而与肿瘤的分化程度、临床分期及是否伴有淋巴结转移密切相关,两种蛋白的表达呈显著负相关。MRP-1蛋白在肺癌组织中的表达与组织类型有关,小细胞肺癌与非小细胞肺癌相比差异显著,MRP-1与KAI1呈显著正相关,与FAK呈显著负相关。结论:KAI1、MRP-1和FAK的异常表达与肺癌的浸润转移有关,联合检测这3项指标对肺癌的发生发展有重要的预测作用。

肿瘤谱阵列芯片技术分析人体不同癌组织hHBrk1基因的差异表达

目的检测不同肿瘤及其癌旁正常组织中hHBrk1基因的差异表达,为进一步研究hHBrk1基因对肿瘤生物学过程的影响提供线索。方法以154对正常及肿瘤组织(19种不同人体组织)和10种肿瘤细胞株的cDNA的肿瘤谱阵列芯片(Cancer profiling arrayⅡ)为研究材料,采用Northern杂交方法分析目的基因表达水平的差异。根据阳性结果收集临床肿瘤组织样本,用RT-PCR检测hHBrk1基因表达,以验证芯片结果的可靠性。结果154对组织及10个肿瘤细胞株均表达hHBrk1基因。其中肺肿瘤组织高表达hHBrk1基因,与正常配对肺组织表达丰度差异有显著性(P<0.01);在肾癌组织中的hHBrk1基因表达丰度低于配对肾组织(P<0.01)。RT-PCR证实8临床肺肿瘤组织中5例高表达hHBrk1基因。结论肿瘤谱阵列芯片技术能够快速检测hHBrk1基因在不同组织中的表达差异,hHBrk1基因可能与肺癌及肾癌的发生、发展有关。

CYP2A13基因8种错义突变与肺癌易感性的关联研究

目的探讨细胞色素p450 2A13(Cytochrome p450 2A13,CYP2A13)基因8种错义突变与肺癌易感性的相关性。方法采用以自然人群为基础的病例-对照方法,对2007-2011年间收集的91例肺癌病例以及140例年龄和性别相匹配的正常对照者进行研究。采用等位基因特异扩增法(Allele-Specific Amplification,ASA)对血液样本中CYP2A13基因的8种错义突变位点进行检测。结果在对照组和病例组之间,各错义突变位点的基因型频率均无统计学的差异(均P>0.05);p.Arg257Cys(12.1%vs11%)、p.Thr134_Leu135insThr(2.1%vs1.1%)、p.Arg101Gln(7.3%vs4.4%)、p.Phe453Tyr(2.2%vs1.1%)、p.Arg494Cys(2.9%vs1.1%)、p.Arg101Ter(6.6%vs2.2%)、p.Asp158Glu(2.1%vs1.1%)、p.Val323Leu(0.07%vs0%)。各错义突变位点的等位基因频率也均无统计学差异(均P>0.05);p.Arg257Cys(6.8%vs5.5%)、p.Thr134_Leu135insThr(1.1%vs0.5%)、p.Arg101Gln(4.0%vs2.2%)、p.Phe453Tyr(1.1%vs0.5%)、p.Arg494Cys(1.5%vs0.5%)、p.Arg101Ter(4.0%vs1.1%)、p.Asp158Glu(1.1%vs0.5%)、p.Val323Leu(0.4%vs0%)。结论中国汉族人群中存在CYP2A13基因错义突变,但CYP2A13基因错义突变与肺癌易感性可能不存在关联,这提示虽然CYP2A13在肺癌发生中起到了一定作用,但可能不是影响我国汉族人群肺癌易感性的主要因素,还存在其它因素的交互影响。

细胞色素P4502E1和1A1多态性与肺癌关系的病例对照研究

目的 :探讨细胞色素P45 0 2E1和P45 0 1A1的多态性与肺癌的关系。方法 :采用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态性技术检测新发肺癌患者91例及非肺部疾患同性别的患者 91例的细胞色素CYP 2E1和CYP 1A1的基因多态性 ,并分析比较。结果 :在 2组间平衡吸烟的因素后 ,CYP 2E1和CYP 1A1基因多态性分别单独分析时 ,与肺癌关系较弱 ,其OR值分别为 1 46和 1 5 1,与对照组相比差异无统计学意义 ,P >0 0 5 ;而两者联合分析时 ,CYP2E1C1C1型和CYP 1A1突变型的OR值为 3 0 0 ,95 %CI为 1 0 3～ 8 78,差异有统计学意义 ,χ2 =4 0 2 ,P <0 0 5。结论 :CYP 2E1和CYP 1A1单一基因的多态性不能增加患肺癌的危险 ,而两者联合作用时则可增强患肺癌的风险。

肺癌中FH IT基因缺失和p53蛋白表达的研究

目的:探讨肺癌组织中FH IT(frag ile h istid ine triad gene)基因缺失和p53蛋白表达及其与临床病理因素的关系。方法:采用逆转录-巢式聚合酶链反应方法及免疫组织化学ABC法分别检测42例肺癌组织中FH IT基因缺失和p53蛋白表达。结果:肺癌组织中FH IT基因缺失和p53蛋白表达阳性率分别为66.7%(28/42)和76.2%(32/42),FH IT基因缺失肺癌的p53蛋白阳性率明显高于FH IT基因正常表达的肺癌(P<0.01)。FH IT基因缺失与肺癌的淋巴结转移有关,p53蛋白表达与临床分期、淋巴结转移密切相关。结论:FH IT基因缺失和p53蛋白异常表达与肺癌发生、发展密切相关,二者相互促进,呈明显正相关。

miR-605和miR-149基因多态性以及相关因素与肺癌易感性的关联研究

目的:探讨miR-605和miR-149基因多态性以及相关危险因素与肺癌易感性的关联。方法:2002年-2008年共收集了244例肺癌患者以及243例年龄和性别相匹配的正常对照者的社会人口学特征等数据以及外周静脉血样。采用PCR-RFLP技术对miR-605(rs2043556)和miR-149(rs2292832)的两个单核苷酸多态性的基因型进行检测,采用多因素Logistic模型分析miR-149和miR-605基因多态性及吸烟与肺癌易感性的关系。结果:本研究未发现rs2043556与肺癌的易感性有关;AA基因型作为对照,AG和GG基因型肺癌易感性的OR分别为1.2(95%CI:0.4-3.4)和1.7(95%CI:0.6-4.8);经过性别分层后,在男性中携带至少1个G(GG+AG)等位子相对于AA基因的OR=1.5(95%CI:1.0-2.3)。rs2292832与肺癌的易感性之间未发现相关性;TT基因型作为对照组,TC和CC基因型肺癌易感性的OR分别为0.7(95%CI:0.3-2.2)和0.6(95%CI:0.2-1.9);与不吸烟者相比,每天吸烟<20支的个体发病风险显著增加(OR=1.7,95%CI:1.0-3.0),吸烟20支及以上者的发病风险进一步增加(OR=4.2,95%CI:2.3-7.6);吸烟与miR-605和miR-149基因之间未发现对肺癌有交互作用。结论:本研究未发现miR-149基因多态性与肺癌的易感性之间存在关联;miR-605的突变可能增加男性肺癌的危险;吸烟明显增加了肺癌的发病风险,但是miR-149和miR-605基因与吸烟对肺癌没有明显的交互作用。

非小细胞肺癌预后相关的多因素分析

目的:分析非小细胞肺癌的临床病理特点与预后的相关因素。方法:应用SPSS软件回顾分析80例获得随访资料的非小细胞肺癌患者的预后相关因素。结果:(1)TNM分期、Ki-67标记指数以及微血管密度是预后的独立危险因素。(2)耐药基因GST-π和病理类型是预后的相对危险因素。(3)患者年龄、性别、病程长短、肿瘤大小、部位、有无坏死与预后无显著相关。结论:TNM分期是非小细胞肺癌最重要的预后独立指标,其次为Ki-67标记指数、微血管密度,而肿瘤耐药基因GST-π和病理类型则是预后相对指标。

不同EGFR基因状态肺癌患者p53、COX-2表达及其临床意义

【目的】探讨P53蛋白、环氧化酶-2(COX-2)在不同表皮生长因子受体(EGFR)基因状态肺癌患者中的表达特征,并分析其临床意义。【方法】回顾性分析本院2017年4月至2018年4月收治的96例肺癌患者的临床资料,所有患者均经穿刺活检病理学确诊。经Taqman-ARMS法测定EGFR基因是否发生突变,并据此分成突变组、野生型组。经免疫组化法测定p53、COX-2蛋白在肺癌组织中的表达情况,比较突变组、野生型组的p53、COX-2表达情况。随访12个月,分析患者随访期间的生存、死亡情况。比较不同基因状态患者p53、COX-2表达与生存、死亡的关系,采用Logistic回归模型分析肺癌患者预后不良的危险因素。【结果】经检测提示EGFR突变42(43.75%)例,野生型54(56.25%)例。突变组的p53、COX-2阳性表达率分别为33.33%、40.48%,显著低于野生型组的57.41%、61.11%(P<0.05)。在随访期间,有29(30.21%)例死亡,67(69.79%)例生存。p53阳性患者生存率为53.33%,显著低于p53阴性患者的84.31%,其病死率也显著高于p53阴性患者(46.67%vs15.69%,P<0.05)。COX-2阳性患者生存率为56.00%,显著低于COX-2阴性患者84.78%,其病死率也显著高于COX-2阴性患者(44.00%vs5.22%,P<0.05)。Logistic回归性分析提示分化程度(中/低分化)、肿瘤分期(Ⅲ~Ⅳ)、淋巴结转移、肿瘤直径≥3cm、p53阳性、COX-2阳性是肺癌患者预后不良的危险因素(P<0.05)。【结论】EGFR基因突变的肺癌患者p53、COX-2阳性率较低,且p53、COX-2阳性患者的死亡风险更高,二者均是肺癌预后不良的危险因素。

人MeCP2基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的构建针对人甲基化结合蛋白MeCP2的shRNA真核表达质粒,稳定转染肺腺癌细胞A-549观察其对MeCP2表达的影响。方法根据MeCP2的mRNA序列,利用Ambion网上设计软件设计两条针对该基因不同靶点的shRNA干扰序列,克隆到线性化的质粒载体上,PCR、测序鉴定插入成功,且插入方向正确。转染A-549细胞,观察其在mRNA和蛋白水平对MeCP2的影响。结果成功构建两个MeCP2的shRNA真核表达质粒,并稳定转染到肺癌细胞A-549中,两个真核表达质粒在mRNA水平和蛋白水平对MeCP2有明显的抑制作用。结论人MeCP2的shRNA真核表达质粒成功构建及鉴定为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

应用比较基因组杂交检测肺癌染色体异常

目的探讨染色体异常在肺癌发生和发展中的可能作用。方法采用比较基因组杂交（CGH）技术分析了17例原发性肺癌新鲜组织的染色体异常。结果17例肺癌组织均检出染色体畸变（扩增和／或缺失），而且每个病例涉及多条染色体畸变。非小细胞肺癌（NSCLC）的染色体扩增和缺失平均发生率（7处／例和4．8处／例）与小细胞肺癌（SCLC）（8．4处／例和9．6处／例）差异无统计学意义，但NSCLC与SCLC的染色体扩增和缺失的发生部位及其频率有所不同，NSCLC染色体3q24—28和11q13的扩增的频率（58．3％和58．3％）显著高于SCLC（0％和0％）（P〈0．05）。结论NSCLC和SCLC在发生和发展过程中都涉及多部位染色体（多基因）异常，NSCLC与SCLC染色体扩增和缺失的发生部位及其频率有所不同可能是导致两者不同生物学特性的基础。

VEGF-2578C>A基因多态性与肺癌发病关联性的Meta分析

目的 Meta分析方法探讨血管内皮生长因子（VEGF）-2578C〉A基因多态性与肺癌发病的相关性。方法检索CBM、CNKI和Pub Med数据库,收集国内外从建库到2013年11月公开发表的关于肺癌与VEGF-2578C〉A关联研究的文献,应用Rev Man5.0分析软件进行Meta分析。结果最终纳入病例对照研究7篇,包含肺癌组1657例和健康对照组1716例。结果显示：在等位基因模型（OR=1.29,95%CI=1.15-1.45,P〈0.0001）;隐性模型（OR=1.85,95%CI=1.36-2.53,P=0.0001）;纯合子模型（OR=2.04,95%CI=1.48-2.80,P〈0.0001）;杂合子模型（OR=0.53,95%CI=0.30-0.92,P=0.02）中,VEGF-2578C〉A基因多态性与肺癌发病相关具有统计学意义。敏感性分析提示结论稳定性好。结论 VEGF-2578C〉A单核苷酸基因多态性与肺癌发病风险相关,携带A等位基因的基因型（CA＋AA）可以显著增加肺癌的发病风险。

NONHSA1254644在肺腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA NONHSA1254644在肺腺癌中的表达及临床意义。方法选取99例肺腺癌患者的癌组织和配对的癌旁组织并收集患者的临床资料,qRT-PCR检测其表达水平,随后分析其表达量与临床参数的关系,并采用CCK8实验探讨其对肺腺癌细胞系A549增殖的影响。结果 NONHSA1254644在肺腺癌中表达下调,其表达量与患者的分化呈正相关,过表达NONHSA1254644能抑制A549细胞的增殖。结论 NONHSA1254644参与肺腺癌的发生和发展过程。

重组CKB真核表达载体的构建及其稳定转染NCI—H520细胞系的建立

目的构建pEGFP—N1－CKB真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞NCI—H520中，建立稳定转染的NCI—H520细胞系，为后续研究奠定基础。方法以人CKBcDNA文库为模板，用PCR扩增人CKBcDNA的编码区，并将扩增的cDNA片段与载体连接后亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中。重组子经酶切分析及测序鉴定后，用脂质体转染技术将其导入到人肺鳞癌细胞系NCI—H520，经G418筛选并建立稳定的转染细胞株，应用Westernblot检测转染前后该细胞株CKB基因的表达。结果pEGFP—N1－CKB经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确，真核表达载体构建成功；经Westernblot检测，重组质粒转染株中CKB基因的表达水平明显高于对照组，证实CKB基因已稳定转染到NCI-H520细胞中并得到表达。结论成功构建了pEGFP—N1－CKB真核表达质粒，建立了稳定表达CKB的NCI-H520细胞系，为进一步研究CKB的生物学功能奠定了基础。