益肺汤对人肺腺癌耐顺铂细胞株移植瘤裸鼠P-gp基因表达和免疫功能影响的实验研究

目的:通过观察益肺汤对人肺腺癌耐顺铂细胞株(A549/DDP)移植瘤裸鼠脾脏指数和肺癌多药耐药P-糖蛋白(Pgp)基因表达的影响,探讨益肺汤对裸鼠免疫功能的影响和逆转肺癌多药耐药的作用机制。方法:建立A549/DDP裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、顺铂组、益肺汤低剂量组、益肺汤中剂量组、益肺汤高剂量组、益肺汤中剂量+顺铂组,共6组,每组10只,分别给与相应的药物干预。给药21天后,处死小鼠取瘤组织和脾脏,称脾重,计算各组脾脏指数;检测瘤组织基因P-gp的表达情况。结果:与对照组比较,顺铂组的脾脏指数显著降低,益肺汤中、高剂量组的脾脏指数有所提高,差异均有统计学意义(P<0.05);与顺铂组比较,益肺汤低、中、高各剂量组及益肺汤中剂量+顺铂组的脾脏指数均显著提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。益肺汤低、中、高各剂量组及益肺汤中剂量+顺铂组的P-gp基因的表达量均低于对照组,而顺铂组的表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:益肺汤能提高裸鼠的免疫功能,逆转非小细胞肺癌多药耐药,其逆转机制是通过下调多药耐药基因P-gp的表达来实现的。

补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞PI3K、AKT、Survivin表达的影响

目的观察补中益气汤含药血清对肺腺癌耐顺铂细胞株(A549/DDP)磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、丝/苏氨酸蛋白激酶(protein kinase B,AKT)、生存素(Survivin)蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法制备中剂量补中益气汤含药血清(0.576 g/mL),将A549/DDP细胞分成4组:空白血清组、最佳含药血清组、LY294002组、最佳含药血清组+LY294002组(即联合组)。采用免疫细胞化学和免疫蛋白印迹法(western blot)方法检测PI3K、AKT和Survivin蛋白的表达。结果最佳含药血清组和联合组PI3K、AKT、Survivin蛋白的表达显著低于空白血清组(P<0.05),联合组PI3K、AKT、Survivin蛋白减少的更加明显,但与最佳含药血清组相比无统计学差异;LY294002组Survivin蛋白的表达明显低于空白血清对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补中益气汤含药血清作用于PI3K/AKT信号转导通路,能降低肺腺癌顺铂耐药细胞株PI3K、AKT、Survivin蛋白的表达,提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

新型2-氨基-4-苯基-3-氰基-4H-吡喃并熊果酸衍生物的设计合成及活性研究

以熊果酸为原料,经过氧化、缩合、取代、环化四步反应得到2-氨基-4-苯基-3-氰基-4H-吡喃并熊果酸衍生物4a、4b和4c,其结构经过^(1)H NMR、^(13)C NMR、HRMS确证。采用CCK-8法评价化合物4a~4c对人非小细胞肺癌细胞株(A549)、人肺腺癌耐顺铂细胞株(A549/DDP)的抗增殖活性,化合物4a~4c对A549及A549/DDP细胞的抑制活性都优于阳性对照药物顺铂,其中化合物4b对A549/DDP细胞表现出良好的体外抑制活性[IC_(50)=(0.087±0.003)μmol/L]及选择性。

补中益气汤含药血清逆转A549/DDP的顺铂耐药及对mTOR表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂耐药的逆转作用及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响。方法:动物随机分组,制备补中益气汤高、中、低剂量血清(给药剂量分别为11.34,5.67,2.83 g.kg-1.d-1),将A549,A549/DDP细胞体外分为顺铂(DDP)组,空白血清+DDP组,含药血清高剂量+DDP组,含药血清中剂量+DDP组,含药血清低剂量+DDP组,细胞对照组,经过15%各组血清联合DDP不同浓度(10,20,40,80,100,200μmol.L-1)作用48 h,采用MTT法检测补中益气汤不同浓度含药血清对A549/DDP顺铂耐药的逆转作用;采用免疫荧光,免疫细胞化学,Western-blot方法检测mTOR的表达。结果:与DDP组比较,补中益气汤不同浓度含药血清作用于A549/DDP后IC50和耐药倍数均有显著降低(P<0.05),以补中益气汤中剂量组(等临床剂量组)作用最为显著(P<0.01),A549/DDP中mTOR的染色吸光度及荧光强度均明显减弱(P<0.01),蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:补中益气汤能增强A549/DDP对顺铂的敏感性,并能通过降低细胞生存通路中mTOR的表达而有效逆转肺腺癌细胞的顺铂耐药。

十全大补汤含药血清对A549/DDP细胞株中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的干预作用

目的:探讨十全大补汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的干预作用。方法:以SD大鼠制备高、中、低剂量(65,32.5,16.25 g·kg-1,10 m L·kg-1)的十全大补汤含药血清和空白对照血清(生理盐水10 m L·kg-1)。培养细胞分为十全大补汤含药血清高、中、低剂量组和空白血清组,采用MTT法检测各组50%抑制浓度(IC50),采用蛋白质印迹法检测各组糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),p-GSK-3βser9,β-连环蛋白(β-catenin)及survivin蛋白表达。结果:随着十全大补汤含药血清浓度的升高,顺铂(DDP)对A549/DDP细胞的IC50逐渐降低,以中、高剂量组最显著(P<0.01);十全大补汤含药血清对A549/DDP细胞浆GSK-3β蛋白的表达无影响,但可显著下调胞浆p-GSK-3βser9蛋白的表达及细胞总β-catenin和survivin蛋白的表达,以中、高剂量组最明显(P<0.01)。结论:十全大补汤可通过降低A549/DDP细胞浆p-GSK-3βser9蛋白及细胞总β-catenin,survivin蛋白的表达而影响Wnt/β-catenin信号转导通路,进而发挥对顺铂耐药的增敏作用。