白杨素通过下调Annexin A3逆转人肺腺癌A549/DDP细胞顺铂的耐药性

目的观察白杨素对肺腺癌顺铂(DDP)耐药性细胞A549/DDP耐药敏感性的影响。方法取A549和A549/DDP细胞,qRT-PCR及Western blot法检测膜联蛋白A3(Annexin A3)基因及蛋白表达,CCK-8法测不同浓度白杨素(0、5、25、50、100 mmoL/L)干预后细胞生存率;将A549/DDP细胞分为A549/DDP组、白杨素组(50 mol/L)、Annexin A3过表达组(Annexin A3mimic组)、Annexin A3阴性对照组(Annexin A3 NC)、白杨素+Annexin A3mimic组,另取A549细胞正常培养作为空白对照组;CCK-8法检测细胞对DDP的半数生存浓度(IC50)及耐药指数;qRT-PCR和Western blot法检测Annexin A3基因和蛋白表达水平,流式细胞义监测细胞凋亡率,小鼠荷瘤实验检测移植瘤体积。结果不同浓度的白杨素均能时效依赖性和剂量依赖性降低A549、A549/DDP细胞生存率(P<0.05),选取50 mol/L为实验浓度作用细胞48 h;与A549细胞比较,A549/DDP细胞Annexin A mRNA及蛋白表达、对DDP的IC50、耐药指数均升高,凋亡率降低(P<0.05);与A549/DDP组比较,白杨素组细胞IC50、耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),Annexin A3 mimic组细胞IC50、耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);Annexin A3基因高表达可减弱A549/DDP细胞对白杨素的敏感性,降低细胞凋亡率(P<0.05);小鼠荷瘤实验证实,与单独的DDP治疗组比较,白杨素与DDP联合治疗可显著降低小鼠A549/DDP移植瘤瘤体体积(P<0.05),Annexin A3基因高表达的小鼠逆转白杨素与DDP联合治疗效果(P<0.05)。结论白杨素可能通过下调Annexin A3表达,逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性。

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549/DDP细胞的耐药逆转及其机制

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用及对多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响。方法MTT法测定白花蛇舌草乙醇提取物对A549/DDP细胞耐药的逆转作用;半定量RT-PCR和Western Blot分别检测肿瘤细胞MRP mRNA和蛋白的表达。结果白花蛇舌草乙醇提取物使A549/DDP细胞对DDP的耐药倍数由10.294下降至5.586;并显著降低A549/DDP MRP mRNA和蛋白的表达。结论白花蛇舌草乙醇提取物可以部分逆转肺腺癌A549/DDP细胞对DDP的耐药;其逆转作用可能通过降低细胞MRP的表达来实现。

槐耳清膏对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响及顺铂耐药逆转作用

目的:探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞和A549/DDP细胞增殖的抑制影响及其顺铂耐药细胞A549/DDP的逆转作用。方法:以体外培养的人肺腺癌A549及A549/DDP细胞为实验模型,采用MTT法测定不同浓度槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖抑制率,并运用流式细胞术检测顺铂联合槐耳清膏对A549/DDP细胞的变化,以及增敏作用效应。结果:槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,随着药物浓度的增加,其抑制率逐渐增加,具有明显的量-效关系(P<0.05)。顺铂40μmol/L作用于A549及A549/DDP细胞48 h后,其凋亡率分别为(27.61±3.45)%和(17.93±1.73)%,两组间有统计学差异(P<0.01)。槐耳清膏1 mg/m L作用于人肺腺癌A549和A549/DDP细胞40 h后,再以相同浓度顺铂诱导,A549细胞凋亡率为(32.35±2.68)%,A549/DDP细胞凋亡率为(30.01±3.65)%,两组间无统计学意义,但与单独DDP作用相比,差异具有显著意义(P<0.01)。结论:槐耳清膏能显著抑制人肺腺癌A549及A549/DDP细胞的增殖,诱导细胞凋亡,还可以增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

人参单体Rh_2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的体外研究

背景与目的肺癌已成为人类癌症主要死亡原因之一。从植物中开发抗肿瘤药物是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点。本研究的目的是观察人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞系凋亡的作用,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养的人肺腺癌A549/DDP细胞经不同浓度梯度的人参单体Rh2干预,分别应用MTT实验观察其对细胞增殖的影响,用流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数及相关基因表达的改变,以及用双抗体夹心ELISA法测定细胞上清液sApo-1/Fas浓度变化。结果①人参单体Rh2可抑制A549/DDP细胞的生长,并呈剂量、时间依赖作用。②人参单体Rh2处理A549/DDP细胞24h,实验组凋亡指数显著高于对照组(P<0.001),G0/G1期细胞比例显著高于对照组(P<0.01),S期细胞比例显著低于对照组(P<0.01),G2/M期细胞比例与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。③实验组p53、Fas阳性表达率显著高于对照组(P<0.01,P<0.001),Bcl-2阳性表达率显著低于对照组(P<0.001)。④实验组A549/DDP细胞培养上清液于不同时间sApo-1/Fas含量均显著低于对照组(P<0.05)。结论人参单体Rh2具有诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的作用,其分子机制可能是上调p53和Fas及下调Bcl-2的表达、通过Fas/FasL系统途径诱导细胞凋亡。

姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的:探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法:采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTT法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h后,流式细胞仪分析细胞周期.结果:亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P>0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57μmol/L和146.79μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P<0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P<0.05).20μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论:姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.

补中益气汤含药血清联合siRNA对肺腺癌A549/DDP细胞的LRP表达影响

目的:运用小干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)的方法特异性沉默肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)基因,观测该方法同补中益气汤含药血清联合应用逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的效果。方法:设计并合成针对LRP基因对应序列的siRNA,采用转染试剂对细胞进行转染。实验分组为:空白对照组、补中益气汤含药血清组、siRNA组及补中益气汤含药血清+siRNA组,利用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测对该基因的抑制作用,Western blot及免疫细胞化学法检测蛋白质表达。结果:参照空白对照组,补中益气汤含药血清组、siRNA组及补中益气汤含药血清+siRNA组mRNA及LRP蛋白表达均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补中益气汤含药血清和siRNA均能降低A549/DDP的LRP蛋白表达,并且2种因素之间存在交互作用。

重组人IL-24对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的:探讨重组人白细胞介素24(rhIL-24)对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞的体外抑制效应;探讨rhIL-24联合顺铂体外诱导A549/DDP细胞凋亡、细胞周期的影响。方法:rhIL-24、顺铂(DDP)及rhIL-24+DDP干预A549/DDP细胞,用CCK-8法检测A549/DDP细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:rhIL-24联合DDP作用24 h对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖抑制率分别为25.2%,与单独用DDP组比较P<0.05有显著性差异;流式细胞仪检测rhIL-24浓度为160 ng/ml作用24 h对人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡率为19.0%;细胞周期检测中rhIL-24作用A549/DDP细胞24 h后G2期增多。结论:rhIL-24能抑制A549/DDP细胞增殖,对正常细胞无毒性,联合DDP组效果优于单独用药组,具有化疗增敏效应;rhIL-24能诱导A549/DDP细胞凋亡和影响细胞周期。

GeXP检测rhIL-24联合DDP对人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡相关基因的实验研究

目的:利用多基因遗传表达分析系统(GeX P)探讨重组人白细胞介素-24(rhI L-24)联合顺铂(DDP)诱导人肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞6个凋亡相关基因的变化。方法:用rhI L-24、DDP及rhI L-24+DDP干预A549/DDP细胞,应用多基因遗传表达分析系统(GeX P)同时检测Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase3、Rb与P53等6个凋亡相关基因。结果:rhI L-24蛋白可引起A549/DDP细胞Bax基因、Caspase3基因、Rb基因转录上调;Bcl-2基因、Survivin基因转录下调,但抑癌基因P53变化无规律,rhI L-24联合DDP后Bax、Survivin、Rb表达较单独rhI L-24组变化更加显著。结论:rhI L-24蛋白可通过上调Bax,下调Bcl-2、Survivin,激活Caspase3,上调抑癌基因Rb诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡。

补中益气汤含药血清联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞Nrf2、PRX1、SOD、GPX4的影响

目的探讨补中益气汤含药血清联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞中核因子红系2相关因子2(Nrf2)及其下游抗氧化蛋白的影响。方法将60只大鼠按随机数字表法分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组15只。低、中、高剂量组分别灌胃3.29、6.57、13.13 g/kg补中益气汤,1次/d,持续7 d。末次给药后1 h,腹主动脉取血,制备补中益气汤含药血清。将A549/DDP细胞按随机数字表法分为空白组(空白组大鼠血清)、模型组(空白组大鼠血清+顺铂)、低剂量组(低剂量含药血清+顺铂)、中剂量组(中剂量含药血清+顺铂)、高剂量组(高剂量含药血清+顺铂),相应药物干预24 h后,采用CCK-8法检测各组A549/DDP细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50);共聚焦荧光定位法检测p-Nrf2荧光表达强度;RT-qPCR法检测Nrf2 mRNA水平;Western blot法检测各组A549/DDP细胞中Nrf2、p-Nrf2、过氧化物还原酶1(PRX1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、SOD蛋白相对表达。结果与模型组比较,低、中、高剂量组A549/DDP细胞对顺铂的IC50降低(P<0.01);p-Nrf2荧光强度降低(P<0.01);Nrf2 mRNA水平降低(P<0.01);Nrf2、p-Nrf2、SOD、PRX1、GPX4蛋白表达下调(P<0.01),尤以中、高剂量组效果更显著(P<0.05)。结论补中益气汤含药血清通过抑制A549/DDP细胞中Nrf2活性表达及下调其靶基因SOD、PRX1、GPX4蛋白表达,改善肺腺癌顺铂耐药。

芝麻素对长春瑞滨诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的影响

[目的]探讨芝麻素对长春瑞滨诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡的影响.[方法]选择人肺腺癌A549细胞株进行体外传代培养,制备成浓度为1.0×105个/mL的细胞悬浮液并接种于96孔板中.实验设空白组(加入DMEM培养液)、对照组(加入DMEM培养液及人肺腺癌A549细胞株)、芝麻素组(芝麻素10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL)、长春瑞滨组(长春瑞滨5、10、15、20、25、30、35μg/mL)及联合用药组(加入IC50浓度的芝麻素和长春瑞滨,IC50为后续联合用药组实验药物浓度).空白组加入160μL的DMEM培养液,对照组及实验组各加入160μL已制备好的人肺腺癌A549细胞株悬浮液,待细胞株贴壁后,空白组、对照组及实验组分别加入20μL的生理盐水和20μL各相关浓度的药物.采用MTT法检测细胞增殖能力,利用倒置显微镜及HE染色法观察细胞形态学变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果]在10~100μg/mL质量浓度范围内,低质量浓度的芝麻素具有抑制A549细胞株增殖的作用,IC50质量浓度为40μg/mL;在5~35μg/mL质量浓度范围内,长春瑞滨具有抑制A549细胞株增殖的作用,且随着药物质量浓度升高细胞抑制率升高,IC50质量浓度为20μg/mL;芝麻素与长春瑞滨联合用药对A549细胞株的抑制率明显高于单药用药(P<0.01).倒置显微镜及HE染色法观察结果显示,与对照组比较,芝麻素(40μg/mL)、长春瑞滨(20μg/mL)及联合用药(芝麻素40μg/mL+长春瑞滨20μg/mL)作用于A549细胞株48 h后贴壁细胞数量均明显减少,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱,部分细胞体积变小、变圆或呈不规则形,核染色质凝集,细胞膜起泡形成凋亡小体,失去原有肿瘤细胞多角形或梭形形态,且联合用药组较单药组上述变化更为明显.流式细胞仪检测结果显示,药物作用48 h后,芝麻素组(40μg/mL)、长春瑞滨组(20μg/mL)及联合用药组(芝麻素40μg/mL+长春瑞滨20μg/mL)细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01),且联合用药组早期凋亡率明显高于单独用药组(P<0.01).[结论]芝麻素可增强长春瑞滨诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用.

miR-33a-5p靶基因分析验证及对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究miR-33a-5p过表达对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及探索其可能的机制。方法在A549细胞中瞬时转染miR-33a-5p mimics,CCK-8和BrdU实验检测细胞增殖能力,转录组测序(RNA-seq)检测mRNA表达水平,targetscan(8.0)、miRDB(2020)、miRWalk(release_2022_01)和ENCORI(starbase,v2.0)联合筛选miR-33a-5p的潜在靶基因,并与RNA-seq的下调表达的基因取交集,RT-qPCR进行基因表达验证。结果RT-qPCR结果显示,miR-33a-5p在A549细胞中高表达(P<0.05);CCK-8实验和BrdU实验结果显示,细胞增殖能力受到抑制(P均<0.05);RNA-seq结果显示,差异基因共494个,其中上调266个,下调228个;GO功能富集主要在细胞外区组成、质膜的组成、受体复合物、细胞外泌体、细胞外基质结构组成、钙离子结合等,KEGG富集主要在补体和凝血途径、胰岛素抵抗、ABC转运途径、IL-17途径、NOD样受体途径和NF-κB信号通路等;靶基因预测分析和RT-qPCR表达验证显示,MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR是miR-33a-5p的潜在靶基因(P均<0.05)。结论miR-33a-5p可能通过调控MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR基因转录后表达水平来抑制A549细胞的增殖。

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的:探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果:MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达(均P<0.01),选取表达水平较高的A549细胞进行后续实验。敲低MUC13后,A549细胞的增殖能力显著降低,G0/G1期的细胞数量显著增多、G2/M期及S期的细胞数量显著减少,细胞凋亡率显著升高,细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01);A549细胞中E-cadherin表达显著上调,N-cadherin、vimentin表达显著下调,p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著降低(均P<0.01);再加入IGF-1处理后,A549细胞中p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著升高(均P<0.01)。结论:MUC13在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达,其可能通过激活EGFR/PI3K/AKT信号通路促进A549细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。

基于JAK2/STAT3通路研究周氏固金消瘤汤含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨周氏固金消瘤汤(ZSGJXLT)含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响及其机制。方法:应用健康SD大鼠制备ZSGJXLT含药血清与空白血清,将0%(空白血清)及5%、10%、20%、30%、40%ZSGJXLT含药血清作用于A549细胞,CCK-8法测算细胞活性抑制率和半数抑制浓度(IC_(50))。用0%ZSGJXLT(空白对照组)、5%ZSGJXLT(ZSGJXLT低剂量组)、10%ZSGJXLT(ZSGJXLT中剂量组)及20%ZSGJXLT(ZSGJXLT高剂量组)含药血清培养A549细胞,细胞划痕实验及高内涵细胞成像技术观察细胞运动情况;Transwell侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移情况;Western blot法检测A549细胞JAK2/STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:与空白对照组相比,不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞活性受到不同程度的抑制,与时间及浓度呈正相关性,24 h的IC_(50)为25.42%。与空白对照组相比,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞划痕愈合率、细胞移动速度均显著下降(均P<0.05),不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞侵袭及迁移数量明显减少(均P<0.05)。与空白对照组比较,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞的p-JAK2、p-STAT3、VEGFA蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);不同浓度ZSGJXLT含药血清组MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达有下调趋势,而E-cadherin蛋白表达有上调趋势,呈剂量依赖性,其中ZSGJXLT高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:周氏固金消瘤汤含药血清能抑制A549细胞侵袭迁移能力,其机制可能与调控JAK2/STAT3通路有关。

补中益气汤中的有效成分槲皮素通过GSTP1-JAK-STAT途径增强肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂的敏感性

【目的】探究补中益气汤的有效成分槲皮素联合顺铂治疗在增强肺腺癌对顺铂敏感性中的作用及其潜在分子机理。【方法】(1)网络药理学分析:从TCMSP数据库筛选补中益气汤的有效成分及其对应靶点,从TCGA数据库下载肺腺癌疾病的数据,并基于差异分析和网络药理学分析挖掘补中益气汤治疗肺腺癌的主要活性成分和潜在作用靶点,通过富集分析以判断相关信号通路,通过分子对接模拟技术分析关键基因与有效成分之间的对接关系。(2)细胞实验:槲皮素或顺铂单一处理以及两者联合处理肺腺癌细胞(A549、A549/DDP),通过细胞计数试剂盒(CCK)-8、Western Blot法、流式细胞术分别对应分析肺腺癌细胞的细胞活力、关键蛋白的表达和细胞凋亡情况。细胞热迁移分析(CETSA)验证活性成分槲皮素与靶蛋白谷胱甘肽S-转移酶π(GSTP1)的结合关系。【结果】补中益气汤中的有效成分槲皮素能与GSTP1紧密结合。通路富集分析显示槲皮素和顺铂可能通过铂类耐药以及Janus激酶(JAK)-信号传导与转录激活因子(STAT)通路影响肺腺癌的进展。此外,槲皮素联合顺铂可下调肺腺癌细胞中GSTP1和JAK-STAT信号通路相关蛋白的表达。在功能上,槲皮素能加强顺铂诱导的肺腺癌细胞的抗癌活性。【结论】槲皮素可减轻肺腺癌耐药细胞对顺铂的耐药性。

刺梨果多糖对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的作用及机制研究

目的探讨刺梨果多糖对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法在0、2、4、6、8、10 g·L^(-1)刺梨果多糖干预A549细胞24、48、72 h后,采用CCK-8法检测A549细胞增殖情况。在0、2、6、10 g·L^(-1)刺梨果多糖干预A549细胞24、48 h后,采用细胞划痕实验测定A549细胞的迁移情况;Transwell实验测定A549细胞侵袭情况。在0、2、6、10 g·L^(-1)刺梨果多糖干预A549细胞48 h后,采用流式细胞术(PI单染法)测定A549细胞周期;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)测定A549细胞的凋亡情况;Real-Time PCR法测定A549细胞的周期、凋亡相关基因表达水平;Western Blot法测定A549细胞的周期、凋亡相关蛋白表达水平。结果(1)干预24、48、72 h后,与对照组(0 g·L^(-1))比较,刺梨果多糖2、4、6、8、10 g·L^(-1)组的A549细胞生长受到显著抑制,细胞的存活率显著降低(P<0.05,P<0.01),刺梨果多糖干预48 h的IC50值为6.109 g·L^(-1),后续实验采用2、6、10 g·L^(-1)浓度作为刺梨果多糖低、中、高剂量。(2)干预48 h后,与对照组比较,刺梨果多糖2、6、10 g·L^(-1)组的A549细胞迁移距离显著增加(P<0.05,P<0.01),细胞侵袭数量显著减少(P<0.05,P<0.01);刺梨果多糖6、10 g·L^(-1)组的G0/G1期、G2/M期细胞比例均显著升高(P<0.05,P<0.01),S期的细胞比例显著降低(P<0.01);刺梨果多糖2、6、10 g·L^(-1)组A549细胞的G0/G1、G2/M期相关调控因子CDK-4、CDK-6、CyclinD1、CDK-1、CyclinB1 mRNA及蛋白表达水平均显著下调(P<0.05,P<0.01);A549细胞的凋亡率均显著升高(P<0.01);凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01);促凋亡Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),抗凋亡Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论刺梨果多糖能够抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期于G0/G1和G2/M期,并通过线粒体通路和死亡受体通路诱导A549细胞凋亡。

中药干预人肺腺癌A549细胞的实验研究进展

恶性肿瘤中,肺癌在国内和世界范围内的发病率、死亡率均居首位。非小细胞肺癌是主要的肺癌类型,而肺腺癌是非小细胞肺癌中常见的病理类型。A549细胞是一种实验用肺癌细胞,常被用于肺腺癌的研究模型。由于中药的低毒、有效、安全等特点,越来越多的研究聚焦于中药治疗肺癌的作用机制。目前,关于中药对肺腺癌A549细胞的实验研究不断开展,笔者经过查阅大量相关文献,将研究分为中药复方和中药单体的干预研究,对其进行综述。

肺腺癌患者胸水肿瘤细胞PD-L1/TTF-1表达及应用分析

目的探讨肺腺癌患者胸水肿瘤细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)/甲状腺转录因子1(TTF-1)、PD-L1免疫组化染色的表达及与组织标本PD-L1表达一致性及其应用研究。方法选取2021年1月至2023年4月间首都医科大学附属北京朝阳医院收治的符合入组条件的50例肺腺癌患者为研究对象,比较同一病例组织标本中肿瘤细胞的PD-L1表达和胸水细胞蜡块中肿瘤细胞的PD-L1、PD-L1/TTF-1表达情况,评估它们之间表达的一致性。结果50例肺腺癌组织标本PD-L1的表达与患者性别、年龄、标本类型、病灶性质、标本来源和EGFR突变对比差异无统计学意义(P>0.05);胸水细胞蜡块中肿瘤细胞PD-L1/TTF-1免疫组化双染的表达与组织标本PD-L1表达的一致性较好(κ=0.846,P<0.05),明显高于PD-L1免疫组化单染(κ=0.754,P<0.05),与手术或活检切除标本一致性较好(κ=0.90,P<0.05),高于胸腔镜或穿刺小标本(κ=0.82,P<0.05),与原发病灶标本的一致性适中(κ=0.689,P<0.05),与转移病灶标本的一致性较好(κ=0.779,P<0.05)。结论胸水细胞学标本采用PD-L1/TTF-1免疫组化双染与组织标本PD-L1表达一致性较高,细胞蜡块PD-L1/TTF-1双染可在组织不易获取时作为一种有益补充,供临床制定免疫治疗方案参考。

莫诺苯宗对肺腺癌细胞自噬和凋亡的分子机制研究

目的:探究莫诺苯宗和自然杀伤细胞激活受体基因(KLRC3)对肺腺癌(LUAD)细胞凋亡和自噬的影响,为LUAD的治疗提供理论基础。方法:分别使用不同浓度莫诺苯宗处理LUAD细胞,并采用CCK-8法检测莫诺苯宗对LUAD细胞活力的影响;随后,使用80μmol/L的莫诺苯宗、50 nmol/L的KLRC3干扰质粒(si-KLRC3)、和100 nmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)1.5μg/ml KLRC3过表达载体(pcDNA-KLRC3)处理细胞后采用流式细胞术和Western blotting检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白的表达量。结果:莫诺苯宗浓度大于20μmol/L时可有效减弱LUAD细胞活力,且以剂量依赖性地促进了LUAD细胞的凋亡和自噬(均P<0.05)。KLRC3在LUAD细胞中低表达,干扰KLRC3减弱了莫诺苯宗对LUAD细胞自噬和凋亡的促进作用,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。此外,过表达KLRC3也促进了LUAD细胞的凋亡和自噬,而KLRC3和莫诺苯宗对LUAD细胞凋亡和自噬的促进作用均可被3-MA所抵消,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:莫诺苯宗可能通过促进KLRC3的表达诱导自噬进而促进LUAD细胞的凋亡。

区分肺腺癌和肺鳞状细胞癌的潜在基因分析

目的对非小细胞肺癌(NSCLC)潜在基因进行分析,寻找区分肺腺癌(LUAD)和肺鳞状细胞癌(LUSC)的相关基因,探索NSCLC诊断与治疗的更有效方法。方法利用3个基因表达综合(GEO)数据库(GSE4882、GSE7339和GSE40275)分析LUAD和LUSC组织样本中的差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体(GO)富集分析并构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络来寻找关键枢纽基因。最后在临床样本中验证关键枢纽基因的差异表达。结果在GSE4882、GSE7339和GSE40275数据集中发现22个LUAD和LUSC的DEGs,通过构建PPI网络发现了6个关键枢纽基因(KRT18、RAN、NME1、NME2、MIF和CFB),进一步在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中分析枢纽基因表达与生存之间的关系,发现KRT18可能是区分LUAD和LUSC的潜在基因,同时构建了KRT18基因突变与LUAD和LUSC患者预后的风险预测模型。最后采用新乡医学院第一附属医院临床组织样本对KRT18表达进行验证。结论KRT18可能是区分LUAD和LUSC潜在基因。

肺复方通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路对A549/DDP细胞耐药性的影响

目的观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响。方法选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化,Western blotting和RT-PCR检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路及下游血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达变化。结果与空白对照组、顺铂组相比,联合组引起细胞G1期阻滞,增加细胞内活性氧的累积,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比,肺复方组和联合组能减少Nrf2核转位,下调p-Akt、HO-1、NQO1、MRP1蛋白表达和mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论肺复方能够通过调控PI3K/Akt/Nrf2信号通路增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。