miR-33a-5p靶基因分析验证及对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究miR-33a-5p过表达对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及探索其可能的机制。方法在A549细胞中瞬时转染miR-33a-5p mimics,CCK-8和BrdU实验检测细胞增殖能力,转录组测序(RNA-seq)检测mRNA表达水平,targetscan(8.0)、miRDB(2020)、miRWalk(release_2022_01)和ENCORI(starbase,v2.0)联合筛选miR-33a-5p的潜在靶基因,并与RNA-seq的下调表达的基因取交集,RT-qPCR进行基因表达验证。结果RT-qPCR结果显示,miR-33a-5p在A549细胞中高表达(P<0.05);CCK-8实验和BrdU实验结果显示,细胞增殖能力受到抑制(P均<0.05);RNA-seq结果显示,差异基因共494个,其中上调266个,下调228个;GO功能富集主要在细胞外区组成、质膜的组成、受体复合物、细胞外泌体、细胞外基质结构组成、钙离子结合等,KEGG富集主要在补体和凝血途径、胰岛素抵抗、ABC转运途径、IL-17途径、NOD样受体途径和NF-κB信号通路等;靶基因预测分析和RT-qPCR表达验证显示,MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR是miR-33a-5p的潜在靶基因(P均<0.05)。结论miR-33a-5p可能通过调控MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR基因转录后表达水平来抑制A549细胞的增殖。

基于JAK2/STAT3通路研究周氏固金消瘤汤含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨周氏固金消瘤汤(ZSGJXLT)含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响及其机制。方法:应用健康SD大鼠制备ZSGJXLT含药血清与空白血清,将0%(空白血清)及5%、10%、20%、30%、40%ZSGJXLT含药血清作用于A549细胞,CCK-8法测算细胞活性抑制率和半数抑制浓度(IC_(50))。用0%ZSGJXLT(空白对照组)、5%ZSGJXLT(ZSGJXLT低剂量组)、10%ZSGJXLT(ZSGJXLT中剂量组)及20%ZSGJXLT(ZSGJXLT高剂量组)含药血清培养A549细胞,细胞划痕实验及高内涵细胞成像技术观察细胞运动情况;Transwell侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移情况;Western blot法检测A549细胞JAK2/STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:与空白对照组相比,不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞活性受到不同程度的抑制,与时间及浓度呈正相关性,24 h的IC_(50)为25.42%。与空白对照组相比,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞划痕愈合率、细胞移动速度均显著下降(均P<0.05),不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞侵袭及迁移数量明显减少(均P<0.05)。与空白对照组比较,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞的p-JAK2、p-STAT3、VEGFA蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);不同浓度ZSGJXLT含药血清组MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达有下调趋势,而E-cadherin蛋白表达有上调趋势,呈剂量依赖性,其中ZSGJXLT高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:周氏固金消瘤汤含药血清能抑制A549细胞侵袭迁移能力,其机制可能与调控JAK2/STAT3通路有关。

土牛膝醇提物提取工艺优化及体外抗人肺腺癌A549细胞活性研究

土牛膝是应用广泛的药用植物,其功效众多,为研究其醇提物抗癌功效,采用Box-Behnken响应面法优化土牛膝的醇提工艺,并对醇提物进行体外人肺腺癌A549细胞毒性及细胞划痕试验。获得了最佳提取工艺为:提取温度90℃,液料比40∶1,提取时间2 h,在此条件下,土牛膝醇提物提取率为9.23%。细胞毒性试验结果显示,随着醇提物浓度的上升,A549细胞的存活率迅速下降,当醇提物浓度为256μg/mL时,对A549细胞的抑制率达94.65%,且细胞划痕结果显示醇提物对A549细胞迁移有一定抑制作用,可为研究土牛膝药用特性提供参考。

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。

牡蛎低分子活性肽BPO-L对人肺腺癌A549细胞周期和相关癌基因、抑癌基因表达的调控作用

采用酸抽提、凝胶柱层析等方法,从僧帽牡蛎体内分离提取到牡蛎低分子活性多肽组分BPO-L,以HMBA处理组为平行对照,流式细胞仪检测细胞周期变化及以免疫细胞化学方法检测相关癌基因、抑癌基因表达变化.研究BPO-L对人肺腺癌A549细胞分化的生物学效应,探索其对肺癌细胞的作用机理.实验结果显示,BPO-L能有效抑制A549细胞增殖活动,促使细胞阻滞于G0/G1期.在此过程中,A549细胞c-myc,MTp53等癌基因蛋白表达减弱,p21WAF1/CIP1和Rb等抑癌基因蛋白表达活性的增强.本研究证实BPO-L对肺癌细胞具有显著的诱导分化作用.其诱导癌细胞分化机理与其调节和干预c-myc、MTp53等癌基因与p21WAF1/CIP1和Rb等抑癌基因的表达有关.

丹参酮ⅡA诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的探讨丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人肺腺癌A549作用及其可能作用机制。方法通过细胞形态学和MTT法观察TanⅡA对A549细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察细胞凋亡;采用荧光分光光度计检测细胞内钙及线粒体膜电位;RT-PCR检测Bad和MT-1A mRNA的表达。结果 TanⅡA能抑制A549细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用A549细胞24、48和72h的IC50分别为117.85、14.87和6.89μmol·L-1。TanⅡA作用A549细胞24h后,A549细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,A549细胞凋亡百分率逐渐增大。TanⅡA作用后,A549细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达下调。结论 TanⅡA具有抗A549作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达下调有关。

磷脂酰肌醇3激酶信号通路影响细胞凋亡在肺腺癌A549细胞群集耐药中的作用

目的 探讨PI3K信号通路在肿瘤群集耐药中的作用。方法 采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法 ,进行肺腺癌A5 49细胞体外立体培养 ,通过Westernblot、原位细胞凋亡检测、四唑盐 (MTT)比色法及血球计数器计数法检测Akt、Bcl 2、Bad的表达、细胞凋亡率及对阿霉素 (ADM )敏感性。结果 ①立体培养细胞存在Akt的高表达 ;②同平面培养比较 ,立体培养细胞存在Bcl 2高表达 ,Bad低表达 ,细胞凋亡率低 ,对ADM敏感性低的特征 ,阻断PI3K信号通路后 ,两者差异明显缩小。结论 PI3K信号通路可通过抑制细胞凋亡在肺腺癌A5 49细胞群集耐药中发挥作用 。

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloids from Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系。方法应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变。结果THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多)。结论THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计。

姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用MTT法检测姜黄素对A549细胞存活率的影响。运用吖啶橙染色方法,观察细胞形态变化。利用TUNEL染色,检测DNA断裂情况。采用Western blot技术,检测P53蛋白表达变化。结果:姜黄素显著抑制A549细胞增殖。吖啶橙和TUNEL染色显示姜黄素可以诱导A549细胞凋亡。Western blot结果显示姜黄素提高了A549细胞中P53蛋白的表达。结论:姜黄素通过激活P53蛋白,抑制A549细胞增殖和诱导A549细胞凋亡。

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞增殖的影响；Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用后细胞凋亡情况；流式细胞仪检测药物作用后的细胞周期和凋亡率；Western Blot检测药物作用后的Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果白花蛇舌草乙醇提取物抑制A549细胞增殖呈时-效和量-效关系；Hoechst33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞后可见凋亡细胞；40 mg/ml白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞12，24，36，48h，药物组G1-G0期细胞百分比分别为（42.82±3.95）%，（51.84±6.37）%，（54.76±8.85）%和（64.94±7.56）%，药物组细胞凋亡率分别为（5.72±0.98）%，（7.10±2.08）%，（19.89±4.25）%，（32.55±6.51）%，均高于对照组（P均（0.05），且G1-G0期细胞百分比和凋亡率随药物作用时间增加而增加；Western Blot显示，白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞，Bax的表达随作用时间增加而增加，Bcl-2的表达随作用时间增加而减低。结论白花蛇舌草乙醇提取物随着药物浓度和作用时间的增加对肺腺癌A549细胞的体外抑制效应增加；其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G1-G0期和通过上调Bax和下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的。

藤梨根提取物抗人肺腺癌A549细胞生长的实验研究

采用MTT检测法、集落形成试验、流式细胞术检测细胞凋亡及建立裸鼠移植瘤模型进行体内实验，观察藤梨根提取物对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用。结果显示各浓度的藤梨根提取物对肺腺癌A549细胞均有较强的抑制效应，且呈现出明显的时相性和量-效依赖性；藤梨根提取物作用后G0～G1期细胞数增加，细胞出现凋亡，并随药物浓度增大作用增强；移植瘤体内试验显示藤梨根提取物高剂量组移植瘤生长缓慢，体积明显小于对照组及低剂量组。表明藤梨根提取物对人肺腺癌A549细胞在体内外均有生长抑制作用，并可诱导其细胞凋亡。

槲皮素对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的观察槲皮素对肺腺癌A549细胞生长及对hTERT基因表达的影响。方法以台盼蓝拒染法计数肺腺癌细胞的生长抑制率,透射电镜和DNALadder实验了解A549细胞凋亡的发生;PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERTmRNA表达。结果台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈剂量和时间依赖性,槲皮素处理48h后的IC50为22.5μmol/L。DNA Ladder实验和透射电镜形态学检测显示出细胞凋亡的特征性变化,细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经槲皮素处理后肺腺癌A549细胞hTERTmRNA表达降低,端粒酶活性受抑制。结论槲皮素能抑制肺腺癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导A549细胞凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。

全反式维甲酸抑制人肺腺癌A549细胞迁移的机制探讨

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对人肺腺癌细胞迁移的影响及其作用机制。方法细胞划痕实验检测ATRA对A549细胞迁移的影响;Western blot分析肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达和肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化程度;观察MLCK抑制剂ML-7是否影响A549细胞的迁移能力。结果 1 mg.L-1 ATRA处理的A549细胞和细胞对照以及溶剂对照细胞相比,细胞的迁移距离无明显变化,而10 mg.L-1ATRA可明显降低细胞的迁移距离(P<0.05)。Western blot分析结果表明10 mg.L-1 ATRA可明显降低A549细胞ML-CK的表达和MLC磷酸化(P<0.05);ML-7可明显降低A549细胞迁移(P<0.05)。结论 ATRA通过降低MLCK的表达和MLC磷酸化,抑制A549细胞的迁移。

淫羊藿苷抑制PI3K/AKT通路对肺腺癌A549细胞存活和转移的影响

目的:探讨淫羊藿苷对肺腺癌A549细胞存活和转移的影响及作用机制。方法:CCK8法检测不同浓度淫羊藿苷(0、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10、20、50、100、200、300和400μmol/L)处理A549细胞后对其存活率的影响,并选择最佳浓度进行后续实验。流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot法检测上皮标记蛋白E-cadherin和间质标记蛋白N-cadherin、Vimetin表达及PI3K和AKT的磷酸化情况;检测单独或联合给予10μmol/L PI3K激活剂740Y-P对细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和通路蛋白表达的影响。结果:100μmol/L及以上浓度的淫羊藿苷对A549细胞有明显的细胞毒性(P<0.05),选取10、20、50μmol/L作为后续实验浓度;淫羊藿苷可剂量依赖性提高A549细胞凋亡率(P<0.05),抑制细胞侵袭、迁移(P<0.05),影响N-cadherin、E-cadherin和Vimentin蛋白表达(P<0.05),下调PI3K和AKT磷酸化水平可减弱740Y-P对A549细胞增殖、侵袭迁移能力的增强作用,增强其对凋亡的抑制作用。结论:淫羊藿苷可通过影响PI3K/AKT信号通路激活抑制A549细胞存活和转移。

槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖抑制及诱导凋亡的影响。方法制备不同浓度的槐耳清膏(0、3、6、9 mg/ml)和羟基喜树碱100μg/ml作用于A549细胞,分别于24、36和48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果槐耳清膏与羟基喜树碱均可诱导A549细胞凋亡,槐耳清膏各浓度组与阴性对照组相比差异显著(P<0.05),且这种抑制存在浓度和时间依赖性,槐耳清膏浓度在3.0 mg/ml 36 h后抑制作用最强,羟基喜树碱组与之比较无显著差异(P>0.05),各浓度槐耳清膏组在与A549细胞作用36 h后达到抑制高峰。结论槐耳清膏在体外能抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡作用。

两面针碱、花椒棚碱对肺腺癌A549细胞的抑制作用研究

目的观察两面针碱以及花椒棚碱对抗肺腺癌A549细胞的抑制作用。方法采用MTT比色法观察检测,两面针碱及花椒棚碱对A549细胞抑制效应,并计算IC_(50)。结果两面针碱、花椒棚碱对A549细胞的IC_(50)分别为0.68μg·mL^(-1)、173.41μg·mL。两面针碱在1.015μg·mL^(-1)浓度下能够诱导66.0%的A549细胞凋亡,在显微镜下显示为细胞的皱缩、核裂解、核固缩等现象。结论两面针碱体外对A549细胞有杀伤作用,能显著抑制A549细胞的生长,而花椒棚碱高浓度溶液虽然能显示出抑制A549细胞的生长,但体外对A549细胞无杀伤作用。

汽油尾气对人肺腺癌A549细胞的氧化损伤效应研究

为研究汽油燃烧汽车尾气(简称汽油尾气)的氧化损伤效应及其可能的毒作用机制,以人肺腺癌A549细胞为研究对象,采用MTT试验测试汽油尾气对细胞的毒性作用;通过测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性了解细胞在汽油尾气作用下抗氧化水平的改变;并用彗星试验检测汽油尾气对细胞DNA氧化损伤及修复的影响．结果显示汽油尾气在浓度≥0．0625L·mL-1时即显示出明显的细胞毒性;汽油尾气作用下A549 细胞SOD及GSH-Px活性均下降,在一定的浓度范围内与对照组比较有统计学差异(p<0．05)．汽油尾气可诱导 A549细胞不同程度的DNA氧化损伤,且细胞拖尾率和DNA迁移长度均随着汽油尾气浓度的增加而增加;损伤后 A549细胞修复发生较快,3小时内基本修复完全．提示汽油尾气具有明显的细胞毒性作用,可影响A549细胞抗氧化酶活性,并可导致DNA的氧化损伤．

两种体外培养条件下肺腺癌A549细胞生物学特性的变化

目的 比较体外肺腺癌A5 4 9细胞在平面及立体培养条件下细胞周期、细胞凋亡及对化疗药物敏感性的变化。方法 采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法 ,进行肺腺癌A5 4 9细胞体外立体培养 ,并通过流式细胞技术、原位细胞凋亡检测试剂盒、四唑盐 (MTT)比色法及血球计数器计数法比较两种培养条件下肺腺癌A5 4 9细胞在细胞周期、细胞凋亡及对阿霉素 (ADM)敏感性方面的差异。结果 通过倒置显微镜、电镜观察及照相 ,确定了体外三维立体培养模型的建立 ;同平面培养比较 ,立体培养细胞存在细胞周期中G1期阻滞现象、细胞凋亡率低 ,对阿霉素的敏感性低的特征。结论 腺癌A5 4 9细胞在两种体外培养条件下生物学特性存在明显差异 ,三维立体细胞培养模型更接近实体瘤的体内实际情况。

人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制

目的:探讨人参皂苷CK对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法:不同浓度的人参皂苷CK作用于人肺腺癌A549细胞株,MTT比色法测定细胞增殖抑制率;倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡;ELISA法检测细胞内源性VEGF含量的变化。结果:人参皂苷CK对A549细胞增殖有抑制作用,其抑制作用呈浓度和时间依赖关系;倒置显微镜下可观察到细胞明显的形态学改变;流式细胞仪可检测到实验组细胞出现明显的凋亡峰,且细胞周期被阻滞在G0/G1期;实验组细胞培养液中的VEGF低于对照组(P<0.05),且随着人参皂苷CK浓度增加和作用时间的延长,VEGF的含量降低(P<0.05)。结论:人参皂苷CK可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其凋亡,并能抑制其内源性分泌VEGF。

新藤黄酸体外抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用

目的研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用及其相关机制。方法不同浓度GNA分别作用A549细胞24、48和72 h,甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测药物对A549细胞增殖的抑制率,吖啶橙/溴化乙啶（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）染色荧光显微镜检测细胞的凋亡;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）法检测GNA对A549细胞损伤作用。结果 MTT法检测结果显示,GNA在0-8μmol/L浓度范围内、24-72 h时间范围内对A549的生长有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系;相差显微镜观察表明GNA作用A549细胞48 h后,细胞变圆,呈半贴壁状态;AO/EB染色荧光显微镜观察显示GNA作用48 h后,细胞出现典型的凋亡特征;LDH实验进一步证实GNA在0-4μmol/L浓度范围内对正常细胞未见明显毒性作用。与空白对照组比较,8μmol/L GNA显著降低LDH释放。结论 GNA具有体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用,在0-4μmol/L浓度范围内GNA可能是通过诱导细胞凋亡而发挥抑制A549细胞增殖的作用。