肺表面活性蛋白B基因多态性与新生儿肺支气管发育不良的危险相关性

目的探讨新生儿肺支气管发育不良与肺表面活性蛋白B基因多态性的相关性。方法选2008-2014年接受治疗的肺支气管发育不良患儿35例（观察组）,并纳入同期收治的早产儿（无肺支气管发育不良）45例作为对照组。所有受试者均为汉族人。分析对比两组患儿肺表面活性蛋白B（SPB）基因多态性,并分析与肺支气管发育不良的危险相关性。结果观察组SPB的18A等位基因频率显著高于对照组（χ2=7.740,P=0.005）。两组受试者1580C及1580T等位基因频率相比较差异无统计学意义（P〉0.05）。Logistics回归分析显示,携带SPB（18A）基因是支气管肺发育不良的独立危险因素（OR：3.612;CI：2.213-4.643）。结论汉族人群中,肺表面活性蛋白B基因与肺支气管发育不良相关,SPB（18A）基因可能是肺支气管发育不良的危险因素。

铜绿假单胞菌感染性肺炎患者的病原菌特征和肺表面活性蛋白B基因多态性和疾病进展与抗菌疗效的关系

目的分析铜绿假单胞菌感染性肺炎患者的病原菌特征和肺表面活性蛋白B(surfactant protein B,SP–B)基因多态性和疾病进展与抗菌疗效的关系。方法回顾性分析2019年8月至2021年8月绍兴第二医院收治的102例肺炎患者的临床资料,根据是否感染铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)分成PA组(n=36)和非PA组(n=66)。采用全自动微生物分析仪进行菌株鉴定,采用K–B纸片扩散法检测菌株对常用抗菌药的敏感性;实时聚合酶链式反应–限制性片段长度多态性法检测患者SP–B基因多态性。结果102例肺炎患者共检出PA36株(35.29%),其中耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(carbapenem–resistance Pseudomonas aeruginosa,CRPA)感染6例(16.67%),多重耐药铜绿假单胞菌(multi–drug resistance Pseudomonas aeruginosa,MDRPA)感染12例(33.33%),泛耐药铜绿假单胞菌(pan–drug resistance Pseudomonas aeruginosa,PDRPA)感染2例(5.56%),各年度PA感染率以及CRPA、MDRPA发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);全部36例(100.00%)PA感染患者对氨苄西林耐药,其次为阿莫西林(97.22%)和美罗培南(63.89%),36例PA感染患者对环丙沙星和妥布霉素敏感,敏感率分别为63.89%和61.11%;PA组SP–B 1580位点基因型TT、TC和CC的分布频数与非PA组比较,差异有统计学意义(P<0.05),等位基因T的频率明显低于非PA组,等位基因C的频率明显高于非PA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。PA组SP–B 8714位点基因型GG、GC和CC的分布频数与非PA组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),等位基因G的频率低于非PA组,差异无统计学意义(P>0.05)。SP–B 1580位点CC、CT和TT基因型肺功能水平差异均有统计学意义(P<0.05),TT基因型患者血氧分压(blood oxygen partial pressure,PaO_(2))、一氧化碳弥散值(diffusing capacity of the lungs for carbon monoxide,DLCO)和一秒钟用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)明显高于CT和TT基因型患者,FVC、FEV1明显低于CT和TT基因型患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PA主要对氨苄西林、阿莫西林和美罗培南等多种抗生素耐药,对环丙沙星和妥布霉素敏感,SP–B基因多态性与PA感染性肺炎患者肺损害程度具有相关性,临床可通过检测其表达水平评估患者疾病进展。

食管癌术后重症肺炎患者血清肺表面活性物质相关蛋白质-D、高迁移率族蛋白B1和中性粒细胞与淋巴细胞比值水平变化及检测意义

目的:探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、肺表面活性物质相关蛋白质-D(SP-D)及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在食管癌术后重症肺炎(SP)患者中的水平变化及检测意义。方法:选取接受手术治疗的食管癌患者257例,根据手术治疗后是否发生SP将患者分为SP组(124例)和对照组(133例)。比较两组血清SP-D、HMGB1和NLR水平。记录SP组患者28 d内预后情况,根据28 d内生存情况将SP组患者分为生存组(104例)和病死组(20例)。比较两组一般资料及实验室指标,采用Logistic回归分析食管癌术后SP患者预后影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析NLR、SP-D及HMGB1对食管癌术后SP患者28 d内病死风险的预测价值。结果:SP组血清SP-D及HMGB1和NLR水平高于对照组(均P<0.05)。病死组NLR、SP-D及HMGB1水平高于生存组(均P<0.05)。NLR、SP-D及HMGB1是食管癌术后SP患者病死的影响因素(均P<0.05)。NLR、SP-D及HMGB1预测食管癌术后SP患者28 d内病死风险的AUC分别为0.744、0.763、0.715,而三者联合检测的AUC更高(均P<0.05)。结论:食管癌术后SP患者NLR、SP-D及HMGB1水平升高,且与患者预后有关,三者联合检测有助于提升对患者病死风险的预测价值。

肺表面活性物质蛋白B基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征易感性的研究

目的探讨肺泡表面活性物质蛋白B(SPB)基因多态性与新生儿呼吸窘迫综合征易感性的关系。方法收集华中科技大学同济医学院附属同济医院的新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)诊断病例为病例组,并按1∶2比例收集胎龄和出生体重相匹配的无明显感染症状早产儿为对照组。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)分析技术及基因测序技术检测SPB-18A/C及SPB1580C/T多态性,观察两组间基因型频率和等位基因频率的差异。并复习文献比较本研究汉族与其他种族人群等位基因频率的差异。结果 2008至2010年NRDS组91例,对照组182名进入分析。①SPB-18A/C基因在NRDS组AA,AC,CC基因型频率分别为11.0%、40.7%和48.4%,对照组分别为6.6%、31.3%和62.1%;两组基因型频率差异无统计学意义(P>0.05);NRDS组A等位基因频率显著高于对照组(31.3%vs22.3%)。②SPB1580C/T基因在NRDS组TT、TC和CC基因型频率分别为5.5%、63.7%和45.1%,对照组分别为30.8%、6.6%和48.4%;两组基因型频率差异无统计学意义(P>0.05);NRDS组C等位基因频率显著高于对照组(79.1%vs70.9%)。③本研究汉族人、美国人、巴西人和丹麦人SPB1580等位基因C频率分别为79%、35%、41%和46%,差异有统计学意义(P<0.05),与日本人群等位基因C频率(72%)差异无统计学意义(P>0.05);本研究汉族人、巴西人、美国人和丹麦人SPB-18等位基因A频率分别为31%、58%、57%和61%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究汉族人群SPB-18A/C及SPB1580C/T基因多态性是NRDS的危险因素。不同种族人群SPB1580C/T和SPB-18A/C基因多态性分布存在明显差异。

重组干扰素α-2b治疗小儿呼吸道合胞病毒毛细支气管炎对肺表面活性蛋白D和转化生长因子-β的影响

目的探讨重组干扰素α-2b治疗小儿呼吸道合胞病毒毛细支气管炎对肺表面活性蛋白D(SP-D)、转化生长因子-β(TGF-β)的影响。方法选取2019年3月至2020年10月于本院儿科就诊的174例呼吸道合胞病毒所致的毛细支气管炎患儿作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组与观察组,每组87例。对照组给予布地奈德混悬液联合孟鲁司特钠治疗,观察组在对照组基础上增加重组人干扰素α-2b治疗,比较两组临床疗效、临床症状消失时间及住院时间、实验室指标(SP-D、TGF-β)及不良反应发生率。结果观察组治疗总有效率为96.55%,高于对照组的88.51%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组喘憋消失时间、肺部湿啰音消失时间、咳嗽消失时间及住院时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组SP-D、TGF-β水平比较差异无统计学意义;治疗7 d后,两组SP-D水平低于治疗前,TGF-β水平高于治疗前,且观察组SP-D水平低于对照组,TGF-β水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义。结论重组干扰素α-2b治疗小儿呼吸道合胞病毒致毛细支气管炎疗效显著,有助于加快缓解患儿临床症状,降低SP-D水平,提高TGF-β水平,且安全性较高,值得临床推广应用。

围产期缺血缺氧对新生大鼠肺表面活性蛋白A、B基因表达的影响

目的 :研究围产期缺血缺氧对新生大鼠肺表面活性蛋白A、B(SP A ,SP B)基因表达的影响 ,探讨围产期缺血缺氧新生大鼠肺损伤机制。方法 :通过结扎孕鼠一侧子宫角血管 (其另一侧宫内胎鼠作为对照 ) ,建立围产期缺血缺氧动物模型。采用RT PCR半定量分析法观察不同程度缺血缺氧新生大鼠肺组织SP A、SP BmRNA的表达。结果 :正常 2 1d胎鼠肺组织SP A、SP BmRNA已有明显的表达 ,宫内缺血缺氧 2 0min时 ,新生大鼠肺组织SP A、SP BmRNA表达减弱 ,并随缺血缺氧时间的延长而逐渐加重。结论 :围产期缺血缺氧致新生大鼠SP A、SP

肺表面活性物质蛋白B、C基因变异与蒙古族早产儿呼吸窘迫综合征相关性研究

目的研究肺表面活性物质蛋白（SP）B、SP-C基因外显子4（exon4）区域基因变异与蒙古族早产儿呼吸窘迫综合征（RDS）的相关性。方法选择住院治疗的无血缘关系的蒙古族RDS早产儿50例（男31例,女19例）,同期、同民族和同群体中无血缘关系的非RDS早产儿50例为对照组（男27例,女23例）,分别用聚合酶链式反应（PCR）基因多态性分析和基因检测技术对SP-B、SP-C基因exon4区域基因进行测序,并比较两组患儿SP-B基因exon4区域1580位点基因变异及基因型频率、SP-C基因exon4区域c.571C 〉 A（T138N）位点基因变异及基因型频率的差异。结果检测出SP-B基因exon4区域1580位点基因变异,RDS组14例,变异率为28%,非RDS组11例,变异率为22%,两组差异无统计学意义（χ^2=0.480,P 〉 0.05）。RDS组1580位点CC、TT、CT基因型频率分别为16%、72%和12%,非RDS组则分别为10%、78%和12%;RDS组C等位基因频率为22%、T等位基因频率为78%,非RDS组则分别为16%、84%;两组间基因型频率差异无统计学意义（χ^2=1.170,P 〉 0.05）。检测出SP-C基因exon 4区域c.571 C 〉 A（T 138 N）位点基因变异,RDS组41例,变异率为82%,非RDS组6例,变异率为12%,两组间差异有统计学意义（χ^2 =49.177,P 〈 0.05）。RDS组c.571C 〉 A（T138N）位点CC、AA、AC三种基因型频率分别为18%、50%和32%,非RDS组分别为88%、8%和4%;RDS组C等位基因频率为34%、A等位基因频率为66%,非RDS组则分别为90%、10%,两组间A等位基因型频率的差异有统计学意义（χ^2=66.553,P 〈 0.05）。结论携带SP-C基因exon 4区域c.571 C 〉 A（T 138 N）位点A等位基因的蒙古族早产儿患RDS的风险更高,而SP-B基因exon 4区域1580位点基因变异与蒙古族早产儿发生RDS无关。

呼吸窘迫综合征早产儿肺表面活性蛋白B基因内含子4变异的意义

目的探讨肺表面活性蛋白B（SP—B）内含子4变异与早产儿呼吸窘迫综合征（NRDS）发病的关系。方法采用1：1病例对照研究方法，选择52例NRDS早产儿（病例组）和52例同期住院的同性别且胎龄接近的非NRDS早产儿（对照组）作为研究对象。入院后1周内各研究对象抽取静脉血2mL，应用DNA提取试剂盒提取基因组DNA，应用PCR方法扩增SP-B内含子4序列中含有保守序列（motif）及其之间含（CA）n重复结构的区域，并通过琼脂糖电泳判读扩增结果。结果病例组和对照组均在550bp处见到目的条带，其中4例（3例NRDS及1例非NRI^S）除目的条带外还可见到1条大于目的条带（约650bp）的扩增产物，提示为SP—B内含子4序列发生了插入突变。病例组及对照组SP—B内含子4变异的发生率分别为5．77％和1．92％，2组比较差异有统计学意义（X2=44．18，P〈0．05）。结论SP—B基因内含子4的变异可能与早产儿NRDS发病有一定的关系。

肺表面活性蛋白A、B在内毒素性急性肺损伤时变化的研究

目的:探讨内毒素性急性肺损伤(ALI)肺表面活性蛋白A和B(SP-A,SP-B)表达的变化及其机制。方法:用内毒素脂多糖(LPS)制备Wistar大鼠ALI模型,分别采用ELISA、免疫组化和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法动态观察LPS致伤后不同时间点肺组织TNF-α,SP-A和SP-B蛋白和mRNA表达的变化。结果:肺组织TNF-α蛋白含量和髓过氧化物酶(MPO)活性分别于LPS致大鼠ALI后0.5 h和1 h时显著高于对照组(P<0.01),2 h时达高峰;肺内SP-B阳性Ⅱ型肺泡上皮细胞数量减少,染色变浅,SP-B蛋白表达逐渐减弱,其灰度值于LPS致伤后2 h时显著高于对照组(P<0.01);肺组织SP-A和SP-B mRNA的表达不同程度减弱,2 h时明显弱于对照组(P<0.05),分别于8 h和4 h时达最低水平。结论:LPS致大鼠ALI时肺组织SP-A和SP-B mRNA的表达减弱,SP-B蛋白含量减少,这可能与多形核粒细胞在肺内的聚集和TNF-α水平的增加有关。

武汉汉族新生儿中肺表面活性物质蛋白D基因多态性及其与支气管肺发育不良相关性分析

目的:研究武汉汉族新生儿中肺表面活性物质蛋白D(SP-D)基因多态性及其与支气管肺发育不良(BPD)易感性的相关关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对218例武汉汉族新生儿SP-D相关位点进行基因型检测,同时进行基因测序验证结果。结果:SP-DM et11Thr三种基因型TT、TC、CC频率分别为10.5%、49.1%、40.4%,等位基因T和C频率分别为35.1%和64.9%。SP-DA la160Thr三种基因型GG、GA、AA频率分别为54.6%、39.4%、6.0%,等位基因G和A频率分别为74.3%和25.7%。与对照组比,SP-DM et11Thr和SP-DA la160Thr基因多态性与BPD发生率无明显关联(P>0.05)。结论:SP-DM et11Thr和SP-DA la160Thr基因型和等位基因频率存在种族差异性;SP-DM et11Thr和SP-DA la160Thr基因多态性与BPD发生率无明显关联。

肺表面活性物质相关蛋白B在人胎肺发育中的表达及意义

目的检测肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)在人胎肺发育过程中的表达特征,探讨其在胎肺上皮细胞发育、分化及其肺功能建立中的作用。方法由孕妇自愿捐献的胎龄为10周￣34周胎肺组织37例及生后28d的内正常肺组织2例,用免疫组织化学技术检测SP-B的表达。结果SP-B在胎肺发育第16周已开始表达,定位于上皮细胞胞浆,发育早期主要表达于高柱状的未分化的上皮细胞,随着支气管的发育分化,由呼吸道的近端逐渐向远端迁移;到原始肺泡期稳定表达于AECⅡ及其前体细胞,其反应强度增加不明显,出生后SP-B阳性反应较出生前明显增强;纤毛细胞和AECI无表达。结论在胎肺发育的过程中,SP-B的分泌反映着肺泡上皮细胞发育成熟,与适应出生后执行功能的需要密切相关。

表面活性蛋白B在新生儿肺透明膜病中的作用

目的研究表面活性蛋白B(SP-B)、甲状腺转录因子1(TTF-1)在新生儿肺透明膜病中的表达与分布,并分析SP-B基因结构变化,探讨SP-B在肺透明膜病中的作用。方法回顾性研究28例新生儿肺透明膜病尸检病例,应用免疫组织化学方法检测SP-B、TTF-1在肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达;通过PCR-SSCP方法检测SP-B基因第4外显子是否有突变。结果免疫组织化学染色显示SP-B、TTF-1表达显著减少,PCR-SSCP结果未见SP-B第4外显子突变。结论新生儿肺透明膜病与肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-B表达减少有关,SP-B下调可能与TTF-1低表达相关。

七氟醚吸入对危重新生儿术中肺表面活性蛋白A和B的影响

目的观察吸入七氟醚对危重新生儿术中肺表面活性蛋白A(SPA)和肺表面活性蛋白B(SPB)的影响。方法选择行腹部手术危重新生儿40例,男29例,女11例,出生12~26 d,体重3.0~4.1 kg,ASAⅢ或Ⅳ级,随机分为两组:七氟醚组(S组)和对照组(C组),每组20例。S组于麻醉诱导气管内插管成功后,吸入2.5%七氟醚30 min;C组不予吸入麻醉药物。两组均在超声引导下行颈内静脉和桡动脉穿刺置管术,容量控制机械通气,持续泵入咪达唑仑2μg·kg^-1·min^-1、顺式阿曲库铵2~3μg·kg^-1·min^-1、芬太尼2~4μg·kg^-1·h^-1维持麻醉。记录机械通气开始时(T0)、机械通气开始后30 min(T1)、手术结束即刻(T2)时PaCO2和PaO2,计算呼吸指数(RI)、氧合指数(OI),采用ELISA法检测动脉血血清SPA、SPB和IL-8浓度,记录肺炎、肺气漏、ARDS、颅内出血、DIC、电解质紊乱、切口感染等术后并发症发生情况。结果与T0时比较,T1-T2时两组OI和血清SPA、SPB浓度明显降低(P<0.05),RI和血清IL-8浓度明显升高(P<0.05)。T0时两组RI、OI、血清SPA、SPB和IL-8浓度差异无统计学意义。T1-T2时S组RI和血清IL-8浓度明显低于C组(P<0.05),OI和血清SPA、SPB浓度明显高于C组(P<0.05)。S组术后肺炎发生率明显低于C组(P<0.05)。结论吸入七氟醚能减轻危重新生儿术中炎性介质的释放,改善肺氧合功能,减少术后并发症的发生。

表面活性蛋白B、甲状腺转录因子在新生儿肺透明膜病中的表达及意义

目的探讨表面活性蛋白B(SP-B)与甲状腺转录因子(TTF-1)在新生儿肺透明膜病中的表达及其意义。方法采用SP法进行免疫组织化学染色,对肺透明膜病组(HMD)22例、对照组18例检测SP-B、TTF-1在肺泡和呼吸性支气管的表达与分布。结果HMD组中SP-B表达水平显著降低(P<0.01),其中有1例未见SP-B表达;TTF-1表达减少(P<0.05)。结论SP-B、TTF-1的表达与新生儿肺透明膜病密切相关,检测SP-B表达水平对了解新生儿肺透明膜病的发生具有重要意义。

机械通气诱导肺损伤大鼠肺组织白细胞介素-8及表面活性蛋白B表达的变化

目的研究新生大鼠呼吸机相关性肺损伤模型肺组织白细胞介素（IL）-8及表面活性蛋白B（SPB）蛋白表达的变化,探讨新生大鼠呼吸机相关性肺损伤的发病机制。方法新生SD大鼠30只,体重12-18g,采用随机数字表法均分为三组：对照组（A组）、正常潮气量机械通气组（B组）和大潮气量机械通气组（C组）。A组气管插管后保持自主呼吸;B组和C组气管插管后行机械通气,B组潮气量7ml/kg,C组潮气量25ml/kg行机械通气4h。机械通气结束,采用光学显微镜下观察肺组织病理学改变,测定肺组织湿干重比（W/D）;采用ELISA检测三组肺泡灌洗液IL-8、IL-10及SPB的浓度的变化;Western blot检测肺组织匀浆IL-8、IL-10和SPB的蛋白表达。结果光镜下见A、B组肺组织病理改变不明显,C组肺组织病理学改变累计面积达50%,肺泡结构紊乱,肺间隔增宽,肺间质水肿,肺泡腔融合并有大量炎性细胞聚集。C组W/D明显高于A、B组（P〈0.05）。C组IL-8表达明显高于,SPB浓度明显低于A、B组（P〈0.01）,三组肺泡灌洗液中IL-10的表达水平差异无统计学意义。C组IL-8的蛋白表达明显高于,SPB的蛋白表达明显低于A、B组（P〈0.01）。结论 IL-8介导的肺部过度炎症反应及SPB下调是新生大鼠肺损伤的重要机制。

肺表面活性物质相关蛋白A基因多态性与新疆蒙古族慢性阻塞性肺疾病患者的发病

背景:目前慢性阻塞性肺疾病的遗传易感性机制未完全阐明。肺表面活性物质相关蛋白A可能在其易感性机制中发挥重要作用,且可能有种族差异。目的:探讨肺表面活性物质相关蛋白A基因位点aa62、aa219多态性与新疆蒙古族慢性阻塞性肺疾病易感性的关系。方法:采用病例-对照研究设计,纳入新疆蒙古族吸烟慢性阻塞性肺疾病患者119例(病例组)和吸烟健康体检者116例(对照组)为研究对象。采用Taqman探针标记荧光定量PCR法检测肺表面活性物质相关蛋白A基因的aa62(CCA/CCG,rs1136451)和aa219(CGG/TGG,rs4253527)位点的单核苷酸多态性,获得各基因型和等位基因的分布情况。结果与结论:在aa62位点,两组的基因型频率(AA,AG、GG)及等位基因频率(A、G)比较差异均有显著性意义(χ2=7.164,P=0.028;χ2=2.239,P=0.019);且基因型频率在肺功能Ⅱ级与Ⅲ级慢性阻塞性肺疾病患者间差异有显著性意义(χ2=8.721,P=0.013)。在aa219位点,两组基因型频率(CC,CT)及等位基因频率(C、T)比较差异均无显著性意义(χ2=0.367,P=0.545;χ2=0.332,P=0.565)。提示肺表面活性物质相关蛋白A基因aa62位点多态性可能与新疆蒙古族吸烟慢性阻塞性肺疾病的易感性相关。

肺出血新生大鼠肺表面活性蛋白A、B表达变化的研究

目的:探讨肺出血新生大鼠肺组织肺表面活性蛋白A、B(SP-A和SP-B)表达的变化及其发生机制。方法:腹腔注射脂多糖(LPS)5mg/kg致新生大鼠肺出血,生理盐水(NS)对照组注射等量NS,观察不同时间点肺组织的病理改变,采用免疫组化、ELISA、Western blot和RT-PCR的方法分别检测肺组织SP-B、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB抑制蛋白(IκBα)蛋白及SP-A、SP-B和TNF-αmRNA的表达。结果:LPS致新生大鼠肺出血时肺内可见多形核中性粒细胞浸润,Ⅱ型肺泡上皮细胞受损;注射LPS后,SP-B蛋白和SP-B、SP-A mRNA表达分别于用药后1h、2h和4h显著低于NS对照组;LPS作用后,IκBα蛋白表达于0.5h显著低于NS对照组,而TNF-αmRNA和蛋白表达于用药后0.5h和1h显著高于NS对照组。结论:肺出血致新生大鼠肺组织内SP-B蛋白和SP-A、SP-B mRNA表达显著降低,肺内IκBα的降解和TNF-α增加及多形核中性粒细胞浸润、Ⅱ型肺泡上皮细胞破坏可能是其重要机制。

角质细胞生长因子对高氧暴露新生大鼠肺表面活性蛋白B表达的影响

目的:研究角质细胞生长因子(KGF)对高氧暴露下新生大鼠肺组织表面活性蛋白B(SP-B)表达的影响。方法:将新生的108只SD大鼠随机分为空气组、高氧组和KGF干预组,每组36只,每组分为3、7、14d 3个亚组。高氧组、KGF干预组大鼠持续暴露于氧体积分数>950 mL/L氧箱中,KGF干预组于吸氧同时在背部皮下注射重组人角质细胞生长因子(rhKGF)1 mg/d,连用3d后改为0.5 mg/d至实验结束。空气组和高氧组给予等量生理盐水背部皮下注射。空气组大鼠呼吸空气。3、7、14d亚组分别于3、7、14d取大鼠肺组织,采用免疫组化方法检测肺组织中SP-B表达的积分光密度值(OD)。结果:高氧组3d SP-B表达强度较空气组增强(P<0.05),高氧组7d SP-B表达强度与空气组比较,差异无统计学意义(P>0.05),高氧组14d SP-B表达强度较空气组和KGF干预组减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。空气组和KGF干预组SP-B在3、7、14d的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:长时间暴露于高氧环境,可导致SP-B表达减弱或功能障碍,是高氧肺损伤的重要原因;KGF能促进肺表面活性物质合成,对高氧性肺损伤具有重要的保护作用。

大鼠成熟的肺表面活性蛋白B的原核表达及纯化

为表达和纯化SP-B蛋白,先对SP-B基因进行稀有密码子优化,PCR反应获得SP-B片段,构建重组质粒pGEX4T-1/SP-B,转化到E.coli BL21(DE3)中诱导表达;用SDS-PAGE与Western blot进行检测;用GSTPrep FF 16/10对融合蛋白进行纯化。经双酶切鉴定证实质粒中插入基因长250bp,测序结果与大鼠SP-B cDNA序列相符;质粒转化后用IPTG进行诱导,在分子质量约34ku处出现1个新条带,与pGEX4T-1/SP-B蛋白预期大小一致,且该融合蛋白能可溶性表达并被纯化。结果表明成功构建了pGEX4T-1/SP-B重组质粒,表达、纯化得到GST/SP-B蛋白,为研究肺表面活性物质替代药物奠定了基础。

肺表面活性蛋白B的构效关系研究进展

肺表面活性物质是分布于肺泡内衬的一类磷脂蛋白复合物。而由于磷脂具有两亲性,能与肺表面活性物质中的特异性蛋白相互作用而在肺泡中排列形成磷脂单分子层,从而发挥其降低气液界面表面张力的作用。肺表面活性蛋白B(surfactant protein B,SP-B)是肺表面活性蛋白最为重要的特异性蛋白,它的异常常常引起肺部各种疾病,因此SP-B在肺功能维持和修复中起着不可替代的作用。SP-B具有类似于阿米巴穿孔肽超蛋白家族成员的结构,属于鞘脂激活蛋白样蛋白超家族蛋白(SAPLIPs)。通过分析脂质-蛋白相互作用和SP-B的构效关系特点,为基于类似物的药物开发提供理论依据。