澳洲坚果抗菌肽分离纯化及其肽段鉴定与分析

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,采用碱性蛋白酶水解制备澳洲坚果多肽(macadamia nut peptide⁃0,MNP⁃0),以对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌活性为跟踪指标,通过超滤、DA201⁃C型大孔吸附树脂、交联葡聚糖凝胶Sephadex G⁃25对其进行逐级分离纯化,获得抑菌活性较强的抗菌肽,并运用液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC⁃MS/MS)技术对其进行肽段组成与氨基酸序列分析。结果表明:超滤分离的不同分子量澳洲坚果多肽在所有多肽中所占质量分数不同,抑菌活性也有所差异。其中,澳洲坚果多肽组分MNP⁃4占比最高,为29.55%;抑菌活性也最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为10.01 mm与9.41 mm。大孔吸附树脂纯化多肽组分MNP⁃4的技术条件为75%乙醇溶液为解吸剂,静态吸附3 h,动态洗脱体积60 mL。经大孔吸附树脂与交联葡聚糖凝胶Sephadex G⁃25分离纯化,获得3个澳洲坚果纯化多肽(macadamia nut purified peptide,MPP)组分,其中组分MPP⁃2的抑菌活性最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为18.67 mm与16.83 mm,优于多肽MNP⁃0与超滤分离多肽组分。分离纯化的澳洲坚果抗菌活性多肽MPP⁃2含有DDLTDPAPA、VLL、WDY、VPV、WDL、LLW、LWL、FDW 8个肽段,经预测分析,属于抗菌肽的肽段为WDL与FDW,其概率得分a(1.00≥a≥0.50)均为1.00,疏水率均为66.67%,均带有1个负电荷,等电点分别为0.69与0.67,并具有较好的溶解性。研究结果表明澳洲坚果可通过酶法制备具有抗菌活性的肽类成分。

小麦肽及其与大豆肽、豌豆肽复配肽的体外组合对TNF-α刺激C2C12骨骼肌细胞蛋白表达的影响

通过细胞实验探讨小麦肽、大豆肽、豌豆肽复合物对TNF-α刺激C2C12骨骼肌细胞蛋白表达的影响,并初步探明作用通路。采用终质量浓度为25 ng/mL的TNF-α处理C2C12细胞4 d建立TNF-α刺激模型,CCK-8法确定小麦肽、大豆肽、豌豆肽对C1C12细胞的安全剂量;检测不同复配比例的小麦肽、大豆肽、豌豆肽实验组的肌球蛋白相关指标(MyoD、MyoG、MyHC)、泛素-蛋白酶体系统肌肉萎缩相关指标(TRIM63和MAFbx)的蛋白表达、Akt、mTOR和其磷酸化蛋白表达情况。结果表明,与对照组相比,TNF-α刺激的C2C12细胞中MyoD、MyoG和MyHC的蛋白表达量均有下降,其中MyHC显著降低;MAFbx和TRIM63表达量显著升高;Akt和mTOR的磷酸化水平显著降低,而经过肽样品处理后,各指标均有缓解,且以小麦肽与大豆肽+豌豆肽质量比1∶3效果最好。小麦肽与大豆肽+豌豆肽以1∶3的质量比进行复配在几种配比中可以最有效地改善由TNF-α造成的C2C12细胞肌蛋白含量降低,可通过调节E3泛素连接酶的表达和提高Akt/mTOR的蛋白磷酸化水平的通路,从而降低细胞中蛋白降解和促进蛋白合成。

一种植物蛋白复合肽盐的工艺研究

食盐与我们的日常生活密切相关,但如果摄入过多食盐,会导致体内钠离子积累过多,进而引发一系列的疾病。该研究在以谷朊粉为原料制得咸味肽的基础上,以感官评分、色差值、水分、乳化性和乳化稳定性为指标,对氯化钾、酵母提取物和柠檬粉的添加量进行单因素试验,并利用响应面试验优化肽盐的配方。结果表明,在氯化钾为0.4 g、酵母提取物为0.2 g、柠檬粉为0.3 g的条件下,复合肽盐中多肽含量为11.4 mg/g,钠离子含量为0.35 g/100 g,钾离子含量为1.181 g/100 g,且添加酵母提取物和柠檬粉掩盖了肽盐的不良气味,外观呈浅黄色;减少了生活中钠的摄入量,得到低钠、减盐不减咸的调味品。

大豆肽和豌豆肽对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢及其相关机制的研究

通过细胞实验探讨大豆肽与豌豆肽的复合物对II型糖尿病胰岛素抵抗作用,并初步探明其作用机制。采用1×10^(-6)mol/L的人胰岛素处理HepG2细胞24 h建立胰岛素抵抗模型;CCK-8法确定大豆肽及豌豆肽对HepG2细胞的安全剂量;检测不同复配比例的大豆肽和豌豆肽实验组的葡萄糖消耗、葡萄糖吸收及细胞中的糖原含量反应糖代谢情况,通过Western Blot法检测各蛋白的表达。结果表明,与对照组相比,HepG2细胞置于含1×10^(-6)mol/L人胰岛素培养液孵育24 h,葡萄糖消耗量、葡萄糖吸收量、糖原含量都降低,表明建模成功。大豆肽及豌豆肽干预均能改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状况,提高细胞对葡萄糖的吸收和消耗能力、糖原合成能力,并能够提高葡萄糖转运蛋白GLUT2、GLUT4的表达量及胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)和蛋白激酶B(Akt)蛋白的磷酸化水平,其中质量浓度为200μg/mL、比例为2∶1的大豆肽和豌豆肽效果最好。大豆肽与豌豆肽以2∶1的质量比进行复配可以有效改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状况,可能与肽提高细胞中GLUT2和GLUT4的表达量,以及提高IRS-1和Akt蛋白的磷酸化水平有关。

重组人脑利钠肽治疗射血分数保留心力衰竭患者的疗效

目的:探讨重组人脑利钠肽治疗射血分数保留心力衰竭患者的疗效和安全性,以及患者用药后sST2及N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平变化。方法:选取包头市第四医院2020年2月-2022年2月收治射血分数保留心力衰竭患者60例,按照是否接受重组人脑利钠肽治疗分为观察组(联合注射用重组人脑利钠肽治疗)30例及对照组(常规治疗)30例,观察两组治疗前、治疗72 h后,6 min步行试验(6 MWT)、血清sST2和NT-proBNP水平、超声心动图指标及临床疗效。结果:治疗72 h后,观察组6 MWT高于对照组,NT-proBNP水平低于对照组(P<0.05);治疗72 h后,观察组左心房容积指数(LAVI)低于对照组,左心室射血分数(LVEF)升高(P<0.05);观察组总有效率高于对照组(P<0.05);治疗72 h后,观察组血清sST2水平降低(P<0.05)。结论:注射用重组人脑利钠肽可改善射血分数保留心力衰竭患者的心肌功能,增加心脏排血量,减轻心肌细胞损伤,经sST2及NT-proBNP水平评估后确保有效,且临床用药安全性好,建议推广。

胰高血糖素样肽1受体激动剂治疗阿尔茨海默病的潜在靶点预测及验证

背景:阿尔茨海默病的机制探究过程中揭示了生物信息学对共同靶点筛选的重要作用,能够利用其筛选结果为基础,探究药物对该疾病的治疗效果。目的:采用生物信息学与分子生物学等方法预测胰高血糖素样肽1受体激动剂利拉鲁肽治疗阿尔茨海默病的作用靶点。方法:利用DisGeNET数据库及SEA数据库获取阿尔茨海默病和利拉鲁肽作用的共同基因;利用DAVID在线数据库对共同靶点进行GO/KEGG富集分析;使用STRING数据库构建蛋白互作网络;使用CCK-8判断利拉鲁肽的最佳使用剂量;使用免疫荧光和免疫印迹技术对关键蛋白的表达情况进行分析。采用小鼠海马神经元HT22细胞系进行体外实验,细胞被随机分为3组:HT22组、HT22+Aβ组和HT22+Aβ+Lir组。HT22组不做特殊处理,HT22+Aβ组使用Aβ1-42干预HT22细胞系24 h构建Aβ损伤细胞模型,HT22+Aβ+Lir组在HT22+Aβ组的基础上添加利拉鲁肽12 h。结果与结论:①从DisGeNET数据库筛选出阿尔茨海默病相关联的基因,共得到3333个关联基因。再从SEA数据库中,得到利拉鲁肽的潜在作用靶点147个。最后使用R包筛选出阿尔茨海默病与利拉鲁肽共同靶点64个。②用DAVID数据库进行共同靶点的GO/KEGG分析,结果提示共同靶点主要富集在:神经活性配体-受体相互作用、肾素-血管紧张素系统、膀胱癌、内肽酶活性、肽受体活性、G蛋白偶联肽受体活性和转运囊泡等生物进程。③将已经得到的64个共同靶点蛋白导入至SRTING在线数据库进行蛋白互作网络构建,得到排名前3位的基因为基质金属蛋白酶2,9和白细胞介素1β。④采用CCK-8试剂盒检测了培养细胞的活性,确定利拉鲁肽拮抗Aβ1-42的最佳浓度为100 nmol/L。⑤在免疫印迹实验与免疫荧光实验中,较HT22组相比,在HT22+Aβ组内基质金属蛋白酶2,9和白细胞介素1β表达量明显上升(P<0.05);HT22+Aβ+Lir组较HT22+Aβ组相比基质金属蛋白酶2,9和白细胞介素1β的表达量显著下降(P<0.05)。⑥结合上述生物信息学数据及在GEO数据库的差异基因二次验证结果提示,基质金属蛋白酶2,9和白细胞介素1β均可作为利拉鲁肽治疗阿尔茨海默病的潜在作用靶点。

替西帕肽用于2型糖尿病治疗的研究进展

替西帕肽是一种新一代糖尿病药物,由礼来公司开发,并于2022年5月获得美国食品药物监督管理局(FDA)批准上市。替西帕肽基于多靶点激动剂与单一激动剂相比具有多重药理作用,是一种葡萄糖依赖性的促胰岛素多肽和胰高血糖素样肽-1受体双重激动剂。FDA批准替西帕肽皮下注射作为单一疗法或联合疗法,配合饮食和体育锻炼,以改善糖尿病患者的血糖水平。替西帕肽除了改善血糖控制外,该药物还能有效减轻体重、改善心脏代谢参数、改善血压、降低低密度脂蛋白、胆固醇和三酰甘油等。替西帕肽的有效性和安全性在一项超过1~5期临床试验项目中进行了评估,目前正在进行其他临床试验,以评估其在其他疾病中的应用。

慢性心力衰竭患者血清和肽素及脑钠肽水平观察及临床意义分析

目的观察慢性心力衰竭(CHF)患者血清和肽素(CPT)及脑钠肽(BNP)的水平并分析其临床意义。方法选取2022年2月至2023年3月中国医科大学附属第四医院收治的100例CHF患者设为CHF组,另选取同期于中国医科大学附属第四医院体检的60例健康体检者设为对照组,进行回顾性分析。比较两组研究对象CPT、BNP水平;根据病情程度不同将CHF组患者分为Ⅱ级组(32例)、Ⅲ级组(41例)和Ⅳ级组(27例),分析不同心功能患者CPT、BNP水平,分析血清CPT、BNP水平与CHF患者病情程度的关系。结果CHF组患者血清CPT、BNP水平均高于对照组(均P<0.05)。Ⅳ级组患者血清CPT、BNP水平均高于Ⅲ级组和Ⅱ级组,Ⅲ级组高于Ⅱ级组(均P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线分析结果显示,血清CPT、BNP水平预测CHF患者心功能分级Ⅳ级的曲线下面积(AUC)分别为0.761、0.715,敏感度分别为0.778、0.741,特异度分别为0.849、0.795。Spearman相关性分析结果显示,CHF患者心功能分级与血清CPT、BNP水平均呈正相关(r=0.584、0.627,均P<0.05)。结论在CHF患者中,血清CPT、BNP水平与心功能分级存在正相关关系,上述指标用于评估CHF患者心功能具有一定参考价值。

度拉糖肽与利拉鲁肽应用于初诊2型糖尿病患者短期胰岛素强化治疗的有效性与安全性研究

目的评估度拉糖肽与利拉鲁肽对初诊2型糖尿病(T2DM)患者短期胰岛素强化治疗的效果与后续结果的影响。方法采用双向性观察研究,收集2022年在东莞市松山湖中心医院进行胰岛素强化治疗的初诊T2DM伴高血糖状态患者,分为度拉糖肽组和利拉鲁肽组,并对住院期间数据和出院后16周的随访数据以及治疗方案进行统计分析。结果共收集到128例符合纳排标准的患者,其中利拉鲁肽组65例,度拉糖肽组63例。①住院期间,度拉糖肽组血糖达标时间更短(P<0.05),并且需胰岛素序贯治疗率更低(P<0.05)。②出院1、4、10、12、13~16周度拉糖肽组血糖均低于利拉鲁肽组,第12周后,度拉糖肽组的空腹及餐后血糖、糖化血红蛋白、空腹血浆血糖均低于利拉鲁肽组(P<0.05),且两组研究药物使用时长差异无统计学意义(P>0.05)。③治疗期间未观察到严重不良反应,主要不良反应为恶心、呕吐、便秘、腹泻、低血糖,两组总体不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论度拉糖肽与利拉鲁肽应用于短期胰岛素强化治疗,安全性均较好。度拉糖肽组降糖时间更短,出院方案更简单,且随着时间延长降糖效果更显著。度拉糖肽应用于胰岛素强化方案可能更适合初诊T2DM伴有高血糖状态患者。

胰高血糖素样肽1受体激动剂周制剂的Mini卫生技术评估

目的对我国上市的4种胰高血糖素样肽1受体激动剂(GLP-1RA)周制剂进行综合评估,为医院优化药品目录和临床合理用药提供依据。方法采用Mini卫生技术评估法,参照《中国医疗机构药品评价与遴选快速指南》建立评价细则,从药学特性、有效性、安全性、经济性、其他属性5个维度对4种GLP-1RA周制剂进行综合评价。结果4种GLP-1RA周制剂的Mini卫生技术评分从高至低依次为度拉糖肽78.60分、司美格鲁肽77.35分、聚乙二醇洛塞那肽67.40分、艾塞那肽微球65.50分。其中,度拉糖肽在降糖获益、动脉粥样硬化性心血管疾病获益、肾病获益、经济性方面有优势;司美格鲁肽在降糖减重方面有优势,但经济性低于度拉糖肽;艾塞那肽微球在儿童人群中使用有优势,但日均治疗费用最高;聚乙二醇洛塞那肽需要进一步的临床证据。结论4种GLP-1RA周制剂总体均具有较高的综合分值,其中度拉糖肽和司美格鲁肽可能具有更全面的药学价值,而艾塞那肽微球针对儿童人群具有唯一性。

司美格鲁肽对2型糖尿病伴慢性心力衰竭合并肾功能不全患者的疗效与安全性观察研究

目的 探索司美格鲁肽对2型糖尿病伴慢性心力衰竭(CHF)合并肾功能不全患者的临床效果及安全性。方法 选取2022年1月-2022年9月于新疆医科大学第一附属医院就诊的71例2型糖尿病合并CHF及肾功能不全的患者作为研究对象,根据治疗方案随机分为对照组(胰岛素治疗,35例)与治疗组(胰岛素联合司美格鲁肽治疗,36例)。比较2组治疗的临床疗效与安全性。结果 治疗3个月后,治疗组HbA1c达标有效率为72.2%,显著高于对照组的有效率(31.4%)(P <0.05)。治疗后治疗组的体质量、FBG、HbA1c和TG均出现明显下降并显著低于对照组(P <0.05)。与对照组比较,联合应用司美格鲁肽治疗后出现LVEF升高、BNP降低、UACR和尿α1MG下降,差异具有显著统计学意义(P <0.05)。但2组的不良反应无明显区别(P> 0.05)。结论 司美格鲁肽对2型糖尿病伴CHF合并肾功能不全患者具有良好的血糖控制效果,可显著改善心功能,减少肾脏病病情进展,临床应用安全性较高。

白果肽的二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性及其抑制机理研究

食源性二肽基肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPP-Ⅳ)抑制肽可有效调节机体内糖代谢,降低机体血糖水平。为评估白果肽(phenylalanine-alanine-proline-serine-tryptophan,FAPSW和methionine-proline-glycine-proline-proline,MPGPP)的降糖潜能,采用体外试验测定其DPP-Ⅳ抑制活性,并进一步通过分子对接和分子动力学模拟揭示其抑制机理。结果表明,FAPSW和MPGPP具有良好的DPP-Ⅳ抑制活性,且MPGPP的DPP-Ⅳ抑制活性[IC_(50)=(0.158±0.009)g/L]强于FAPSW[IC_(50)=(2.540±0.126)g/L];分子对接结果表明,静电相互作用、氢键、疏水作用和范德华力在FAPSW和MPGPP抑制DPP-Ⅳ活性中起重要作用;分子动力学结果表明,FAPSW和MPGPP结合DPP-Ⅳ能形成稳定的复合物结构,且MPGPP-DPP-Ⅳ复合物的稳定性要强于FAPSW-DPP-Ⅳ。结合自由能结果表明,静电相互作用在FAPSW和MPGPP结合DPP-Ⅳ中起主导作用。研究结果可为FAPSW和MPGPP在功能食品领域的开发和利用提供一定的理论参考。

澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))6.18 mg/mL与还原能力IC_(50)2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC_(50)0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC_(50)0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于10个氨基酸,匹配得分大于200分的9条肽段分子量为631~920 Da,均无毒性;筛选获得高抗氧化活性肽HLLPK、KEFFP、KEFFPA,其分子量分别为606.84、666.83、737.92 Da。本研究初步揭示了澳洲坚果抗氧化肽组成,深化了澳洲坚果抗氧化肽的研究,为澳洲坚果抗氧化肽的开发利用提供了理论参考。

螺旋藻肽亚铁螯合物的制备及结构表征

为了提高螺旋藻的高值化利用,本文以钝顶螺旋藻蛋白肽为实验原料,氯化亚铁为铁源,采用初步优化螺旋藻肽亚铁螯合物的螯合条件,并对螯合物通过分子量测定、氨基酸组成实验、荧光光谱、扫描电镜、量子化学计算进行结构表征。结果表明:初步合适的螯合条件为pH6、肽亚铁质量比6:1、肽液浓度1%、温度60℃、时间40 min,在此条件下螯合物得率为44.13%。螺旋藻蛋白肽与亚铁盐螯合反应后产生了新结构,铁主要与谷氨酸和天冬氨酸的羧基、精氨酸的氨基、赖氨酸的胍基结合,且镶嵌在氨基酸电负性末端形成的空腔中,形成稳定的结构,证明了螯合物的形成。研究结果将为螺旋藻补铁剂的开发提供一定的理论依据。

血清总Ⅰ型前胶原氨基端前肽和β-Ⅰ型胶原交联羧基末端肽联合检测对早期预测四肢长骨骨折延迟愈合的临床价值

目的 探讨血清总Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)和β-Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(β-CTX)联合检测对早期预测长骨骨折延迟愈合的临床价值。方法 测定156例四肢长骨骨折患者术后1、4、8、12周时的血清PINP和β-CTX水平,根据骨折愈合情况将患者分为延迟愈合组(30例)和正常愈合组(126例),比较两组的血清PINP和β-CTX水平。采用logistic回归分析四肢长骨骨折延迟愈合的影响因素,并采用ROC曲线分析术后血清PINP和β-CTX联合检测对四肢长骨骨折延迟愈合的早期预测效能。结果 两组骨折术后血清PINP和β-CTX水平呈升高趋势,在治疗后8周达高峰,随后下降。骨折术后4、8、12周时,延迟愈合组血清PINP和β-CTX水平均低于正常愈合组,差异有统计学意义(P <0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,术后血清PINP和β-CTX水平是四肢长骨骨折延迟愈合的独立危险因素(P <0.05)。ROC曲线显示,术后血清PINP和β-CTX联合检测预测长骨骨折延迟愈合的ROC曲线下面积(AUC)为0.861(P <0.05)。结论 术后血清PINP和β-CTX水平与四肢长骨骨折延迟愈合密切相关,二者联合检测有助于早期预测四肢长骨骨折延迟愈合。

中药活性肽发现方法研究进展

中药是天然药物和活性前体的丰富来源,除小分子成分外,近年来其中的活性肽/蛋白质也备受关注。快速发展的分离和纯化技术,结合先进的筛选、鉴定策略,使越来越多具有药用价值的生物活性肽被发现并报道。本文综述了近年来活性肽的发现流程和筛选新方法,旨在为研究和发现中药活性肽提供参考。

γ-谷氨酰转肽酶的催化特性及其在食品领域应用研究进展

γ-谷氨酰转肽酶广泛存在于生物体中,可以专一性催化γ-谷氨酰基的转移反应,参与生物体内谷胱甘肽代谢和γ-谷氨酰基循环等生理过程。随着食品酶学、合成生物学技术的发展,γ-谷氨酰转肽酶在生物催化领域的应用也日渐受到重视。基于其水解和转肽催化活性,γ-谷氨酰转肽酶可被应用于茶氨酸等多种γ-谷氨酰化合物的生物催化合成。利用酶工程手段进一步优化γ-谷氨酰转肽酶的催化特性,提高目标产物产率,使得γ-谷氨酰转肽酶在食品功能因子的绿色生物制造领域具有较好的应用前景。文章综述了γ-谷氨酰转肽酶的分子结构、催化机制及其在食品工业中的应用现状,并重点关注γ-谷氨酰转肽酶的分子改造及其在催化合成L-茶氨酸领域的应用,以期为γ-谷氨酰转肽酶在食品领域的研究及应用提供参考。

虾壳源多肽酶解条件的优化及其抗冻活性和作用机制的探究

目的优化从虾壳中提取多肽的酶解条件,并探究虾壳多肽的抗冻活性及作用机制。方法以小龙虾虾壳为原料,使用复合酶酶解提取多肽。在单因素实验的基础上,通过正交实验得到虾壳最佳酶解条件。以面包酵母菌为抗冻测试对象测试其抗冻能力。采用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS/MS)对虾壳多肽的组成进行鉴定,基于多肽的理化性质和序列,结合抗冻预测平台筛选抗冻肽(antifreeze peptides,AFPs)。使用分子动力学模拟探究了AFPs的作用机制。结果在酶解温度40℃,底物质量浓度20mg/mL,加酶量12000U,酶比0.33的最佳酶解条件下,多肽提取率达到了70%以上。虾壳多肽中含有1004种肽段,能明显提升酵母菌存活率。从具有抗冻活性且置信度靠前的20条多肽中进一步筛选出了潜在的抗冻肽AFP1、AFP2。AFP2和冰面之间形成的氢键数量为14,部分水分子同时与2个氨基酸残基形成氢键,充当水桥稳定多肽的构象,AFP2与冰之间的结合能为-105.08 kcal/mol,冰结合模拟效果理想。结论AFPs与冰结合并抑制冰晶生长可能归因于带电荷的亲水性氨基酸残基与水分子形成的氢键、范德华力等分子间作用力,可开发为有益的冷冻保护剂,用于冷冻食品加工,具备良好的应用前景。

酵母肽和枯草肽对断奶仔猪生长性能、腹泻率和肠道健康的影响

【目的】旨在研究酵母肽和枯草肽对断奶仔猪生长性能、腹泻率和肠道健康的影响,为抗菌肽在仔猪养殖中的合理利用提供参考依据。【方法】生长试验选取21日龄“杜×长×大”三元杂健康断奶仔猪200头,随机分为5组,每组5个重复,每个重复8头。分别饲喂基础日粮、基础日粮+300 mg/kg酵母肽、基础日粮+500 mg/kg酵母肽、基础日粮+300 mg/kg枯草肽和基础日粮+300 mg/kg酵母肽+300 mg/kg枯草肽,预饲期7 d,正式试验28 d。诱导腹泻试验选取28日龄“杜×长×大”三元杂健康断奶仔猪30头,随机分成3组,每组10头。分别饲喂基础日粮、基础日粮+300 mg/kg酵母肽和基础日粮+500 mg/kg酵母肽,预饲期7 d,正式试验8 d,前3 d用未经氯化消毒井水拌料饲喂诱导腹泻,后5 d用氯化消毒井水拌料饲喂。【结果】(1)生长试验中日粮添加不同剂量酵母肽和枯草肽对断奶仔猪的生长性能无显著影响(P>0.05),但诱导腹泻试验中,酵母肽成剂量依赖性降低仔猪腹泻率;(2)添加500 mg/kg酵母肽显著提高仔猪血液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力;(3)添加枯草肽300 mg/kg显著提高空肠绒毛高度和绒/隐比(P<0.05)和空肠紧密连接蛋白Claudin-1的mRNA表达量(P<0.05)。(4)添加300 mg/kg酵母肽+300 mg/kg枯草肽能显著降低血液中白介素-1β(IL-1β)的含量(P<0.05),提高空肠绒毛高度和隐窝深度(P<0.05),同时显著升高Coverage指数(P<0.05),Simpson指数有升高的趋势(0.05<P<0.1)。【结论】饲料中添加500 mg/kg的酵母肽能够有效预防仔猪腹泻的发生,提高免疫球蛋白水平,抗氧化能力。单独添加300 mg/kg枯草肽或混合添加300 mg/kg酵母肽和300 mg/kg枯草肽可以增加肠道吸收和屏障功能,降低肠道炎症,改善肠道微生物的多样性。

基于分子模拟技术筛选牛乳清蛋白源抗氧化肽

传统抗氧化肽的筛选往往需要经过酶解、纯化、分离、鉴定及体外试验验证,时间和物力花费较大。本研究以生物信息学为理论基础,利用计算机虚拟消化、相关活性预测与评价、药物代谢动力学及分子模拟技术对牛乳清蛋白源抗氧化肽进行依次筛选,对其可能发生的Keap1-Nrf2-ARE抗氧化途径进行分析、解释,分析其分子反应过程中构象的稳定性。应用PeptideRanker程序对生物活性进行预测评分,筛选得到137条评分大于0.4的肽段,同时采用ToxinPred、Innovagen、Expasy-compute及Pepdraw程序进一步分析肽段的理化性质,并通过药物代谢动力学ADMET、TOPKAT分析对肽段进行筛选,得到14条无毒、无致敏性、无致突变性、无致癌性及水溶性良好的多肽,然后将其与Keap1受体进行分子对接。将分子对接评分前4位的多肽与Keap1的最优结合复合物进行构象作用机制分析,最终通过复合物构象分子间作用力评价CDEF序列最具抗氧化活性的潜力,并将CDEF-Keap1受体复合物进行分子动力学模拟,结果显示动力学模拟过程中构象变化较稳定,因此CDEF抗氧化肽可在人体中较好地发挥抗氧化活性。与传统酶解方法相比,本方法可快速、高效筛选抗氧化肽,为天然食品源抗氧化肽的快速筛选提供了新思路。