旱柳幼苗抗坏血酸-谷胱甘肽循环及谷胱甘肽代谢对镉胁迫的响应

采用营养液培养方法,研究旱柳(Salix matsudana Koidz)抗坏血酸-谷胱甘肽(ascorbate-glutathione,AsA-GSH)循环及谷胱甘肽代谢对镉(Cd)胁迫的响应.结果表明:Cd显著降低了根部抗坏血酸(ascorbate,AsA)含量,增进了叶部AsA积累,根脱氢抗坏血酸(dehydroascorbate,DHA)含量在低Cd时升高,根和叶DHA含量在高Cd时降低;高Cd时根和叶AsA/DHA值大于对照;根部还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)含量在低Cd时增加,高Cd时降低,不同浓度Cd均提高了叶部GSH含量,而根与叶部氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)含量不同程度低于对照,根和叶GSH/GSSG值高于对照;根抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)活性在低Cd时轻微增加,高Cd时受到抑制,叶部APX活性不同程度增强;Cd不同程度提高了根与叶单脱氢抗坏血酸还原酶(monodehydroascorbate reductase,MDHAR)和脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)活性,仅在低Cd时根谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)活性显著升高,不同浓度Cd使叶GR活性高于对照;Cd也使根和叶谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)和谷胱甘肽转硫酶(glutathione S-transferase,GST)活性不同程度增加.这些结果表明旱柳通过调节AsA-GSH循环和谷胱甘肽代谢来实现对Cd的耐性与解毒.

低磷和铝毒胁迫对大豆谷胱甘肽代谢的影响

以磷高效和耐铝毒的大豆双抗品种巴西10号(简称BX10)及双感品种本地2号(简称BD2)为材料,研究低磷和铝毒胁迫下,大豆根部谷胱甘肽(hGSH)含量和氧化还原状态(hGSH/hGSSG)及谷胱甘肽转移酶(GST)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的变化规律,并对BX10中谷胱甘肽转移酶(GST)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)基因进行半定量表达分析。结果表明:低磷和铝毒胁迫均提高了大豆hGSH含量和hGSH/hGSSG比率及GST、GR和GPX的活性,且BX10上升幅度均要大于BD2;低磷和铝毒胁迫过程均涉及到GST、GR、GPX基因的差异表达,GST基因主要响应铝毒胁迫,GPX基因主要响应低磷胁迫。表明谷胱甘肽代谢与大豆磷高效和耐铝毒能力密切相关。

基于转录组测序筛选新疆野苹果组培苗应答冻害谷胱甘肽代谢相关的基因

【目的】探索新疆野苹果组培苗谷胱甘肽代谢对冻害胁迫的响应,筛选新疆野苹果谷胱代谢相关应答冻害基因,解析新疆野苹果组培苗抗冻的可能作用方式。【方法】以单株系的新疆野苹果组培苗为研究对象,在-3℃模拟冻害条件下,观察及检测CK、T6h、T12h、T36h、HF24h处理新疆野苹果组培苗的形态、荧光参数Fv/Fm值、相对电导率及丙二醛、过氧化氢、还原性谷胱甘肽含量,并对对照、T6h、T12h3个处理的幼苗叶片进行转录组测序分析。【结果】使用-3℃模拟冻害对新疆野苹果组培苗进行胁迫,处理12h时新疆野苹果组培苗叶尖卷缩,处理36h时整个植株完全萎蔫,在HF24h时萎蔫的植株完全恢复;与对照相比,随着冻害处理时间的延长,相对电导率及丙二醛、过氧化氢、还原性谷胱甘肽含量显著上升,荧光参数Fv/Fm值显著下降。在HF24h,相对电导率、丙二醛、过氧化氢的含量相比T36h呈现下降趋势,荧光参数恢复到与对照相当,还原性谷胱甘肽含量相比T36h没有显著变化。利用KEGG数据库对转录组数据进行分析,筛选到18个谷胱甘肽代谢途(map00480)差异基因,分别注释为GGCT、GSS、GGT1_5、CARP、speE和IDH1。它们参与GSH的降解与合成、GSH与GSSG的动态平衡和GSH消除氧化电位高的物质反应中。【结论】新疆野苹果组培苗在-3℃模拟冻害条件下,随着处理时间的延长,新疆野苹果组培苗受到的伤害不断加深,恢复处理24h后,组培苗有显著的恢复,在转录组水平,基因GST和GPX显著上调表达,表明新疆野苹果可以通过GSH代谢抵御低温胁迫。

基于多组学联合技术探讨中风病谷胱甘肽代谢失衡引起的铁死亡

目的:探讨铁死亡通路中的谷胱甘肽代谢失衡与中风病发病的关系,描绘关键代谢物及核心蛋白在中风前后表达与分布变化。方法:应用TUNEL染色评估模型有效性。通过非靶向代谢组学表征大鼠中风前后血浆和脑组织代谢轮廓的变化和潜在代谢通路;在此基础上,采取平行反应监测技术对中风前后大鼠血浆和脑组织中铁死亡代谢通路进行靶向代谢组学和靶向蛋白质组学研究。结果:与假手术组比较,模型组大脑缺血区域细胞明显坏死;大脑中胱氨酸转运体SLC3A2显著下调;参与谷胱甘肽生物合成的上游物质谷氨酰胺、甘氨酸及胱硫醚含量下调;同时参与合成过程的关键酶GSS与GCLC表达量减少;对细胞铁死亡起到关键抑制作用的GPX4含量明显下降。结论:谷胱甘肽代谢失衡是细胞铁死亡通路中的关键环节,参与了大脑缺血再灌注损伤的病理过程。本研究对其中关键代谢物与核心蛋白在血-脑双系统中表达与分布进行了描绘,通过现代科学语言注释了中风病。

低磷胁迫大豆RT-qPCR内参基因的筛选及谷胱丙肽合成代谢酶的表达

谷胱丙肽在作物耐低磷中起重要作用,而选择稳定的内参基因是保证实时荧光定量PCR(RT-q PCR)结果准确的前提。该研究检测了低磷和正常条件下两个不同磷效率的大豆品种根叶中15个内参基因的表达,Ge Norm、Norm Finder、Best Keeper、ΔCt对比和Ref Finder分析表明PSC、TUB和18sRNA的稳定性最好;同时以这3个基因为内参,检测了不同磷胁迫时期谷胱丙肽合成代谢中两个关键基因谷氨酸半胱氨酸合成酶(γ-ECS)和谷胱丙肽合成酶(hGSHS)的表达水平。结果表明:低磷胁迫下,磷低效品种桂香1号(GX1)根叶中γ-ECS和hGSHS的相对表达量(Fold change,FC)都随着胁迫时间延长而减少;磷高效品种桂夏2号(GX2)根叶γ-ECS以及根中的hGSHS的相对表达量都随着胁迫时间延长而增加,而叶片中hGSHS的相对表达量随胁迫时间增加而降低。谷胱丙肽合成酶基因表达差异可能是品种磷效率差异的原因。该研究结果为大豆低磷抗性分子机理研究提供了理论依据。

瘤胃微生物的肽营养

自６０年代以来，瘤胃微生物的氮素营养研究大体经历了非蛋白氮利用研究（Ｈｏｌｔｅｒ等，１９６８）〔１〕、饲料蛋白质降解（新体系）研究（Ｏｒｓｋｏｖ等，１９７９）〔２〕和肽营养研究（Ｗａｌａｃｅ等，１９８９；Ｙａｎｇ等，１９９２）〔３～４〕三个阶段。最近...

RUNX3调控胃癌细胞对曲妥珠单抗耐药的机制:基于超效高液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱的代谢组学分析

目的探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)在胃癌曲妥珠耐药细胞中的代谢调控作用,阐释敲除RUNX3逆转耐药的代谢机制。方法基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱联用技术,对曲妥珠耐药胃癌细胞(NCI N87R)及RUNX3敲除细胞(NCI N87R/RUNX3)进行代谢组分析;采用多变量结合单变量分析方法及二级质谱离子匹配打分筛选差异变量;使用MetaboAnalyst 5.0数据库进行通路富集分析;基于OmicsNet数据库构建差异代谢物-基因调控关系;通过试剂盒检测还原性/氧化性谷胱甘肽(GSH/GSSG)及还原性/氧化性辅酶II(NADPH/NADP)的比值。结果RUNX3敲除前后NCI N87R细胞的代谢特征显著改变,鉴定到81个对分类有显著贡献的差异代谢物,其中43个代谢物在NCI N87R/RUNX3细胞中增加,38个代谢物减少。RUNX3敲除导致耐药细胞8条通路显著改变(P<0.01),包括谷氨酰胺、糖酵解、甘油磷脂酸-烟酰胺及谷胱甘肽代谢等。试剂盒检测结果显示,NCI N87R/RUNX3胞内GSH/GSSG及NADPH/NADP降低(P<0.01);差异代谢物-基因网络揭示了代谢分子与基因之间的调控关系。结论RUNX3通过调控能量代谢及氧化-还原稳态逆转胃癌细胞对曲妥珠单抗耐药,提示RUNX3可能是胃癌曲妥珠单抗耐药的潜在治疗靶标。

瘤胃微生物对肽的利用

围绕瘤胃微生物对肽的利用这一主题，揭示肽在瘤胃内的积累现象及肽对瘤胃微生物的促生长作用，从瘤胃微生物肽酶的活性、肽的理化参数对肽在瘤胃内代谢的影响及合成肽的代谢研究３个方面勾画出了当前反刍动物营养学研究领域内肽的代谢研究现状，并指明了今后的研究方向。

电针内关穴后下丘脑室旁核、β-内啡肽及白细胞介素1的变化

目的:观察电针刺内关穴后下丘脑室旁核及该区β-内啡肽、白细胞介素1的变化。方法:实验于2004-06于湖北中医学院针灸实验室完成。选取8～12月龄大耳白家兔56只,雌雄各半。随机分为急性心肌缺血+电针组、下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血+电针组、假损毁+急性心肌缺血+电针组、下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血组、下丘脑室旁核损毁模型组、急性心肌缺血模型组、正常组,共7组,每组8只。采用左冠状动脉前降支结扎法制备家兔急性心肌缺血模型,观察电针内关穴对心电图ST段电位的影响;同时观察下丘脑室旁核电解损毁预处理对心电图ST段电位的影响;并且通过免疫组化方法观察室旁核内β-内啡肽、白细胞介素1表达变化。结果:①急性心肌缺血+电针组、下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血+电针组、假损毁+急性心肌缺血+电针组ST段回复的时程及幅度显著快于下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血组(P<0.05)。急性心肌缺血+电针组、假损毁+急性心肌缺血+电针组又优于下丘脑室旁核损毁+急性心肌缺血+电针组(P<0.05),下丘脑室旁核电解损毁导致家兔出现一过性轻度心肌缺血,下丘脑室旁核预先电解损毁显著降低电针内关穴抗急性心肌缺血损伤效应。②急性心肌缺血+电针组、假损毁+急性心肌缺血+电针组、急性心肌缺血模型组β-内啡肽、白细胞介素1蛋白表达阳性率与正常组比较,差异显著(P<0.05～0.01)。结论:①电针内关穴能显著降低实验性急性心肌缺血家兔心电图ST电位,抗急性心肌缺血损伤。②下丘脑室旁核参与内关-心脏相关的中枢通路,损毁室旁核会在一定程度上显著降低电针内关穴抗急性心肌缺血的效应,室旁核内β-内啡肽、白细胞介素1可能参是电针内关作用的中枢效应物质。

氟比洛芬酯对炎症痛大鼠血儿茶酚胺及β-内啡肽水平的影响

目的:探讨氟比洛芬酯用于超前镇痛的作用机制,为其更好的用于围术期疼痛治疗提供理论依据。方法:选择Wistar大鼠24只随机分为4组(6只/组):I组(生理盐水对照组)大鼠右后脚趾部皮下注射5%福尔马林溶液0.1ml致痛,之前10min腹腔注射生理盐水溶液2m1。II组(即刻镇痛组)致痛即刻腹腔注射氟比洛芬酯50mg/kg溶液2ml。Ⅲ、Ⅳ组(超前镇痛低、高剂量组)致痛之前10min腹腔注射25、50mg/kg氟比洛芬酯2m1。分别于致痛后1h、12h取血检测E、NE及β-EP水平。结果:与I组比较,致痛后1、12h血浆E、NE水平II、Ⅲ、Ⅳ组均降低(P<0.05),且Ⅳ组低于Ⅲ组(P<0.05);血浆β-EP水平II、Ⅲ、Ⅳ组均升高(P<0.05),且Ⅳ组高于Ⅲ组(P<0.05)。结论:氟比洛芬酯抗伤害性感受作用包含了中枢类阿片活性机制。

组织多肽特异性抗原水平检测对良恶性胸水的诊断价值

目的:探讨血清及胸水中组织多肽特异性抗原(TPS)对良恶性胸水的诊断价值。方法:用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定了32例肺癌患者(肺癌组)和30例结核性胸膜炎患者(对照组)血清及胸水中TPS的水平。结果:肺癌组血清中TPS水平为271.37±94.96U/L,显著高于良性对照组(145.06±77.02U/L)。肺癌组胸水中TPS水平为406.85±103.43U/L,显著高于良性对照组(206.50±157.37U/L)。非小细胞癌(NSCLC)血清TPS水平为302.49±76.09U/L,显著高于小细胞癌(SCLG)组(157.24±66.92U/L);鳞癌血清TPS水平为338.13±82.70U/L,显著高于腺癌组(272.80±57.81U/L)。NSCLC的胸水TPS水平为469.56±81.76U/L,显著高于SCLC组(273.65±123.36U/L),两组比较有极显著性差异(P<0.01)。虽然鳞癌胸水TPS水平(469.56±81.76U/L)高于腺癌胸水TPS水平(441.13±54.46U/L),但无显著性差异(P>0.05)。结论:TPS水平检测对良恶性胸水的鉴别诊断具有重要价值,同时也是鉴别小细胞肺癌和非小细胞肺癌的较好指标之一。

外周血脑钠肽,超敏C反应蛋白与冠脉血管病变的相关性研究

目的：探讨外周血脑钠肽、超敏C反应蛋白与冠脉血管病变种类及病变程度的相关性。方法：将172例冠脉病变患者分为急性心肌梗死组（AMI组）,不稳定型心绞痛组（USAP组）,稳定型心绞痛组（SAP组）,并按Gensini评分,分为三组：轻度组（Gensini评分〈50分）,中度组（Gensini评分50~100分）,重度组（Gensini评分〉100分）。之后对各组患者外周血脑钠肽及超敏C反应蛋白水平进行测定和分析。结果：SAP组患者超敏C反应蛋白水平显著低于USAP组（q=10.83,P〈0.01）,同时显著低于AMI组（q=9.82,P〈0.01）,而USAP组患者的hs-CRP水平也明显低于AMI组（q=3.71,P〈0.05）;与对照组相比,各组患者的hs-CRP水平均明显偏高（P〈0.05）;各组患者BNP水平表现为AMI高于USAP,USAP高于SAP（P〈0.05）。重度组患者的BNP、hs-CRP水平均高于其他两组（P〈0.05）。中度组患者的BNP、hs-CRP水平均高于轻度组（P〈0.05）。患者体内BNP、hs-CRP水平与反应病变程度的Genisini评分呈正相关。结论：血浆BNP及hs-CRP水平可作为冠脉血管病变的危险预测因子,可以用作临床上鉴别不同类型的冠状血管疾病及疾病程度。

儿童肺炎脑钠肽水平与危重评分及预后的相关性分析

目的:探讨重症肺炎的诊断、脑钠肽水平与预后的关系,探索更迅速、更准确的诊治标准。方法:对230例肺炎患儿进行脑钠肽水平测定和危重评分,并分析其危重评分分级、脑钠肽水平对其预后的影响。结果:患儿重症肺炎病死率达24.34%,同时随着APACHEII评分越低其病死率越高;脑钠肽水平越高,重症肺炎患儿病死率越高。结论:儿童重症肺炎应尽早进行危重评分,同时需利用及时的监护检验措施检测脑钠肽水平,对危重患儿尽早治疗,尽可能降低病死率。

舒血宁注射液对心绞痛患者血浆脑钠肽影响的疗效观察

目的:观测心绞痛患者使用舒血宁注射液后血浆脑钠肽(BNP)的浓度变化及治疗心绞痛的临床疗效。方法:测定不同时期心绞痛患者血浆脑钠肽(BNP)的含量,对照组与治疗组进行比较。结果:治疗组BNP逐渐下降,症状减轻、消失。提示:舒血宁注射液治疗心绞痛有确定的疗效。

慢性阻塞性肺疾病中脑钠肽水平的变化及其临床意义

目的:探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)及慢性肺心病(CCP)患者血浆脑钠肽(BNP)的水平变化及临床意义。方法:将我科住院治疗的COPD患者60例分为单纯COPD组、CCP急性加重期及其缓解期组。CCP患者分别于急性加重期和缓解期测定血浆BNP水平,与单纯COPD组进行比较,并分析其与动脉血氧分压(PO2)、肺动脉收缩压(PAP)和收缩末期右室内径大小及右室/左室内径的相关性。结果:CCP急性加重期血浆BNP水平为262.84±47.59pg/ml,高于缓解期水平[128.52±24.82pg/ml,P<0.01],且两者均高于单纯COPD组[64.76±12.03pg/ml,P?0.01],急性加重期BNP水平与PO2呈负相关(r=-0.654,P?0.01),与PAP呈正相关(r=0.763,P<0.01),而缓解期BNP水平与PO2无显著相关性(P>0.05)。结论:在COPD伴CCP患者中,血浆BNP水平上升,可能与缺氧、肺动脉高压(PAH)等因素相关。

替米沙坦与螺内酯配伍对早期糖尿病肾病76例微量白蛋白尿及脑钠肽的影响

目的:探讨替米沙坦与螺内酯配伍对早期糖尿病肾病患者微量白蛋白尿及脑钠肽的影响,以观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂与醛固酮受体拮抗剂联用对早期糖尿病肾病的治疗作用。方法:将76例早期糖尿病肾病患者随机分为替米沙坦与螺内酯配伍治疗(治疗组)和单用替米沙坦治疗(对照组)两组,每组38例。治疗前及治疗3月后分别检测两组尿微量白蛋白排泄率(UAER)、脑钠肽(BNP)、血肌酐(Scr)、血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、血钾等的变化并进行分析。结果:治疗前后,两组患者血糖、糖化血红蛋白、血钾、肌酐等指标变化均无显著性差异(P>0.05),但治疗后两组UAER、BNP水平均较治疗前显著降低(P<0.05);而治疗组UAER、BNP水平下降较对照组更为明显(P<0.05)。结论:替米沙坦与螺内酯配伍治疗早期糖尿病肾病,尿微量白蛋白及脑钠肽水平下降更为明显,且无严重不良反应。

抗前列腺癌多肽的可溶性表达及纯化

目的:探讨抗前列腺癌多肽的可溶性融合蛋白的表达条件,并获得其纯化蛋白,为后续的体内、外活性实验奠定基础。方法:采用Phamacia公司商品化的GST融合表达载体pGEX-4T-2,向细菌培养基中加入IPTG后,诱导Ptac启动子下游的外源目的基因表达。通过对不同培养基、不同温度、不同诱导时间及不同诱导剂浓度下可溶性目的蛋白的表达量进行探索,筛选出表达量最高的组合方式,并通过GST亲合层析柱GSTrap FF对获得的可溶性蛋白进行纯化。结果:成功进行了GST-APP216融合蛋白的可溶性表达,在IPTG浓度为0.2 mmol/L,27℃条件下,诱导表达4.5h时表达量最高。经凝胶成像系统进行密度扫描显示,该可溶性蛋白的表达量约占上清总蛋白量的36.2%。并获得了纯化的APP216蛋白,经紫外分光光度计测定标准品,绘制标准曲线。测定260/280nm处吸光度的比值,得到纯化蛋白的浓度为323.1μg/ml。结论:APP216纯化蛋白的获得,为进一步检测抗前列腺癌多肽体外、体内的肿瘤杀伤作用奠定了坚实的实验基础。

中药酚性化合物对运动训练大鼠某些激素水平及自由基代谢的影响

目的:研究中药酚性化合物对运动大鼠的生长发育、运动能力、某些激素水平及自由基防御体系的影响。利用现代分离技术可将其提取并纯化。方法:建立大鼠模型,中药酚性化合物萃取提纯液灌服,进行8周训练实验。结果:酚性化合物是许多中药的有效成分,具有抗氧化作用,清除自由基和抑制自由基产生,干预细胞转导和增强抑癌基因表达,干预细胞周期等。结论:中药酚性化合物注射可以提高耐力性训练大鼠胰岛素、胰高血糖素水平,使胰岛素、胰高血糖素的下降得到了缓解,在心、肝、骨骼肌组织的抗脂质过氧化和清除自由基方面明显增强,从而延缓运动性疲劳产生。

老年高血压患者血清N末端B型利钠肽原升高与心房颤动危险相关性分析

目的:探讨老年高血压患者血清N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)升高与心房颤动危险相关性。方法:将364例老年高血压患者根据患者有无房颤分为房颤组140例,无房颤组224例,采用电化学发光免疫法测定患者血清NT-proBNP水平,采用超声心动图检测患者胸骨旁左心室长轴切面,测量并计算LAD(左房内径)、LVPWD(左心室舒张末后壁厚度)、LVDD(左室舒张末内径),LVEF(左心室射血分数)四个指标。结果:NT-proBNP越高,LAD(左房内径),LVDD(左室舒张末内径)数值越大,LVEF(左心室射血分数)越低,房颤组NT-proBNP水平明显高于无房颤组(P<0.05),Pearson相关性分析结果显示:血清NT-proBNP水平和患者左、左心室内径均与LVEF具有一定的密切关联性(P<0.05)。结论:老年高血压患者血清N末端B型利钠肽原升高与心房颤动之间密切相关,其在预测房颤发生危险中具有积极的临床价值。