食源二肽基肽酶Ⅳ抑制剂的研究进展

糖尿病是世界上最严重的代谢类疾病之一,二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase IV,DPP-IV)抑制剂是一种有效治疗II型糖尿病的药物。食源肽是DPP-IV抑制剂的潜在来源,可能有辅助控制血糖水平的作用。本文对食源DPP-IV抑制肽的获得方式、常规研究路线、结构特征和抑制机制进行了综述,并探讨了生物信息学方法(即肽剪切、分子对接、定量构效关系)在DPP-IV抑制肽研究中的应用及其局限性。本文也对食源DPP-IV抑制肽用作功能性食品配料以辅助调节血糖所需要的进一步研究进行了展望。

SARS冠状病毒主蛋白酶可切割多肽的搜索与生物信息学的应用

用新近发展的冠状病毒的基因解析软件系统ZCURVE -CoV 1 .0和ZCURVE -CoV 2 .0(http ://tubic .tju .edu .cn/sars/)分析了基因库 (NCBIRefSeqproject)中的 2 7个不同来源的SARS冠状病毒的RNA基因序列 ,找出了主蛋白酶 (CoVMpro)在聚蛋白pp1a和pp1ab中的 2 97个酶切位点 .在此基础上确定的 1 1个SARS冠状病毒主蛋白酶的可切割八肽 .这些八肽都含有SARSCoVMpro 的真实切割点 ,因而是发展SARSCoVMpro的多肽类抑制剂的适宜出发点 .计算了可切割八肽在特异性位点R2、R1、和R1上的氨基酸的分布概率 ,发现位点R4和R3也有一定的特异性 .分析了这些位点上的氨基酸的结构特征 ,找出了最有希望成为SARSCoVMpro的多肽类抑制剂的两个八肽NH2 -ATLQ↓AIAS-COOH和NH2 -ATLQ↓AENV -COOH ,并探讨了对可切割八肽作化学修饰的思路 ,为SARSCoVMpro的多肽类抑制剂和非肽类抑制剂的设计提供了基础 .同时把生物信息学用于药物开发 。

自剪切多肽P2A对自然杀伤细胞的高效诱导扩增作用的研究

目的改进现有过继性人自然杀伤(NK)细胞体外诱导、分化及扩增方法,实现高效定向分化及大量扩增NK细胞的目的。方法利用自剪切多肽P2A连接IL-15和4-1BBL基因,通过慢病毒感染和药物筛选的方法制备稳定表达IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株。该方法可刺激人PBMC细胞向NK细胞分化及高效增殖。实验结果以x±s表示并用两样本t检验进行比较。结果经该方法培养的CD3-CD16^+56^+NK细胞增殖倍数达到(4480.43±37.80)倍;CD3-CD16^+56^+NK细胞纯度达到94.79﹪;细胞内表达IFN-γ和TNF-α的NK细胞比例为(63.07±3.37)﹪和(54.85±2.04)﹪,分别高于对照组(16.28±2.86)﹪和(14.53±1.15)﹪(t=62.25,22.66,P均<0.01);细胞分泌至培养上清液中的IFN-γ和TNF-α浓度为(111.39±6.95)pg/ml和(32.76±3.23)pg/ml,分别高于对照组(44.99±4.74)pg/ml和(11.09±2.45)pg/ml(t=20.56,7.21,P均<0.01);在体外,该方法培养的NK细胞对K562细胞的杀伤效率为(78.52±7.36)﹪,高于对照组(48.53±6.66)﹪(t=11.56,P<0.01);对H520细胞的杀伤效率为(65.03±3.27)﹪,高于对照组(35.85±3.99)﹪(t=11.35,P<0.01)。结论利用自剪切多肽P2A构建稳定高表达的IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株,从而提高了NK细胞增殖倍数、纯度和细胞毒性。

人γ干扰素转座子质粒构建及其在HEK293T细胞中的表达

[目的]克隆人γ干扰素(hIFNγ)基因,借助自剪切肽P2A,构建hIFNγ-P2A-RFP(红色荧光蛋白)融合基因转座子表达载体,并在HEK293T细胞中检测其表达水平。[方法]首先,以脂多糖(LPS)激活人外周血淋巴细胞,提取总RNA,经RT-PCR扩增hIFNγ基因;再通过重叠延伸PCR,获得hIFNγ-P2A-RFP融合基因,并将其插入PB002G转座子载体。经双酶切和DNA测序鉴定,将重组质粒转染HEK 293T细胞,荧光显微镜观察RFP表达,Western Blotting检测hIFNγ蛋白表达。[结果]克隆了hIFNγ基因,成功构建了PB-hIFNγ-P2A-RFP重组质粒;荧光显微镜观察发现RFP在HEK 293T细胞表达,转染效率达39.3%;Western Blotting检测显示,特异性蛋白条带约为21 kDa,与预期的hIFNγ蛋白大小一致。[结论]成功构建了人γ干扰素PB转座子真核表达质粒,该质粒在HEK 293T细胞中高效表达。