柱前衍生-高效液相色谱法测定脑蛋白水解物中多肽含量

建立柱前衍生-高效液相色谱法测定脑蛋白水解物中多肽含量的方法。多肽含量为总氨基酸含量与游离氨基酸含量之差。总氨基酸测定水解条件为6 mol/L盐酸溶液于110℃水解20 h。氨基酸测定条件为采用异硫氰酸苯酯作为衍生剂,色谱柱为Agilent Eclipse AAA柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),柱温为40℃,梯度洗脱。16种氨基酸在质量浓度为1~200μg/mL的范围内与色谱峰面积线性关系良好,线性相关系数均大于0.99。16种氨基酸的定量限均小于1μg/mL,精密度和重复性结果均不大于5%,各个技术参数的考察结果均满足检测要求。建立的方法科学可行,适用于脑蛋白水解物多肽含量的控制。

蛋白水解液中多肽含量的测定方法

用10%(W/V)的三氯乙酸沉淀蛋白水解液中的大分子蛋白质,经离心过滤后,在上清液中加入双缩脲试剂,于540nm下测定其OD值,继而在Gly-Gly-Tyr-Arg四肽标准曲线上查出样品中的多肽含量。

电针不同穴位对束缚模型大鼠血清白细胞介素2及不同组织β内啡肽含量的影响

目的:观察电针对束缚模型大鼠血清白细胞介素2含量及血浆、下丘脑、垂体、淋巴结β内啡肽含量动态变化的影响,探讨免疫功能失调状态下白细胞介素2、β内啡肽含量变化的特点及二者的内在相关性。方法:实验于2004-01/04在北京中医药大学针灸学院针灸机理实验室完成。实验动物选取Wistar雄性大鼠40只。采用抽签分组方法,随机分为5组,正常对照组,束缚模型组,束缚针刺关元组,束缚针刺膻中组,束缚针刺非穴组,每组8只。制作束缚应激模型,分别选取“膻中”、“关元”、“关元旁开1.5寸非穴”进行电针刺激。膻中平刺0.2-0.3寸;关元及非穴均直刺0.5寸。针刺后接韩氏电针仪,断续波,频率2～100Hz,强度2～5mA,每次20min,隔日1次,共10次。采用放免法测定血清白细胞介素2含量及血浆、下丘脑、垂体、淋巴结β内啡肽含量并与正常组及模型组对照。并对血浆β内啡肽与血清白细胞介素2进行相关性分析,计量资料以x±s表示,各组组间差异采用方差分析,以P<0.05作为具有显著性差异的标准。结果:纳入40只大鼠均进入结果分析①各组大鼠血清白细胞介素2含量:束缚针刺膻中组明显高于正常对照组,束缚组,束缚针刺关元组犤(7.58±2.51),(5.42±1.12),(5.35±0.54),(5.33±0.92)ng/L,P<0.05犦。②各组大鼠血浆、下丘脑、垂体、淋巴结β内啡肽含量:束缚模型组,束缚针刺关元组,束缚针刺膻中组,束缚针刺非穴组血浆β内啡肽含量低于正常对照组,后三组高于束缚模型组高;后三组的组织β内啡肽(下丘脑、垂体、淋巴结)均比对照组高,比束缚组低(除外淋巴结β内啡肽)。③血清白细胞介素2与血浆β内啡肽的相关性:束缚针刺膻中组、束缚针刺关元组的大鼠血浆β内啡肽与血清白介素2呈正相关(r=0.67,0.58,P<0.05)。结论:针刺可提高束缚模型大鼠血清白细胞介素2的含量,降低垂体、下丘脑β内啡肽含量。对机体的免疫功能进行调节以关元穴作用明显。

安体舒通对大鼠急性心肌梗死后左心室功能和血清Ⅲ型胶原氨基末端肽含量影响的实验研究

目的:观察安体舒通对大鼠急性心肌梗死后左心室功能、血清Ⅲ型胶原氨基末端肽含量的影响,探讨醛固酮拮抗剂在防治急性心肌梗死后心室重构和心力衰竭的机制。方法:通过结扎左前降支建立雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠急性心肌梗死模型,术后24小时存活大鼠16只随机分为对照组(n=8)、安体舒通组[n=8,安体舒通20mg/(kg·d)];另设假手术组(n=8)。安体舒通组灌胃给药,术后8周行血流动力学及左心室功能测定,Masson三色染色行非梗死区胶原容积分数测定,放免法行血清Ⅲ型胶原氨基末端肽测定。结果:对照组与安体舒通组大鼠心肌梗死面积无显著性差异(41.64%对44.70%)。与假手术组相比,对照组左心室舒张末压,左、右心室相对重量,左心室非梗死区胶原容积分数和血清Ⅲ型胶原氨基末端肽含量均显著增加(P<0.05-0.001);平均压、左心室收缩压、左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)及其校正值(±dp/dtmax/LVSP)均显著降低(P<0.01)。与对照组相比,安体舒通组左心室舒张末压、非梗死区胶原容积分数、血清Ⅲ型胶原氨基末端肽含量显著降低(P<0.01-0.001);±dp/dtmax及其校正值±dp/dtmax/LVSP显著升高(P<0.05-0.01)。血清Ⅲ型胶原氨基末端肽含量与左心室舒张末压水平呈显著正相关(r=0.8560,P<0.001)。结论:安体舒通能有效抑?

HPLC法测定重组人甲状旁腺素1-34肽含量及有关物质

目的:用高效液相色谱法测定重组人甲状旁腺素1-34原液和制剂的肽含量及有关物质。方法:采用 Zorbax 300SB-C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以流动相 A:水-乙腈-三氟乙酸(990:10:1),流动相 B:水-乙腈-三氟乙酸(10:990:1)为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL·min^(-1),检测波长215nm,柱温37℃。结果:重组人甲状旁腺素1-34浓度在26.25～841.5μg·mL^(-1)范围内,与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),最低检测限为131ng,高、中、低3种浓度的平均回收率范围为99.5%～100.6%,RSD 为0.52%～0.72%(n=3)。结论:方法简便,快速,准确,可靠,可作为本品的质量控制方法。

He-Ne激光穴位照射对大鼠的镇痛作用及对不同脑区内脑啡肽含量的影响

激光穴位照射具有无痛、无菌等优点，已广泛应用于临床治疗多种疾病，取得较好效果。近年来一些研究证明，氦-氖（He-Ne）激光穴位照射人体或动物后，皆可产生明显的镇痛作用，并且在激光穴位照射所产生的镇痛作用下又可进行手术。还有实验报道，激光穴位照射所产生的镇痛作用可被吗啡颉抗剂——丙烯吗啡所对抗。

脑损伤大鼠血浆及海马血管活性肠肽含量变化和意义

通过RIA法检测脑损伤大鼠血浆及海马匀浆中VIP含量变化,探讨VIP对海马神经原坏死的影响。结果:脑损伤后VIP含量变化与病程有关,伤后30min海马、24h血浆、海马含量明显低于对照组,而伤后6h、72h血浆及海马含量明显高于对照组.血浆、海马VIP间存在显著相关性。结论:VIP是引起脑损伤后海马缺血再灌注及神经原坏死的重要因素。

三公膏传统工艺的改进及其多肽含量的测定

笔者采用酶解法改进三公膏传统生产工艺和采用双缩脲法测定三公膏中多肽含量。结果表明,在三公膏传统工艺基础上增加酶解、离心除杂、脱油等步骤,使生产周期从5天4夜缩短到2天左右,出膏率由3. 0%左右提高到8. 84%,多肽含量由11. 90%提高到40. 36%;双缩脲法测定多肽含量简便、准确。

反相高效液相色谱法测定醋酸奥曲肽中奥曲肽含量

【目的】建立高效液相色谱法测定醋酸奥曲肽中奥曲肽含量的方法。【方法】色谱柱:ZORBAX 300SB-C8柱(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相:A:0.1%TFA水B:0.1%TFA乙腈,流速:0.25 ml/min,柱温:40℃,检测波长:210 nm,进样量:20μl。【结果】奥曲肽浓度在0.08～0.2 mg/ml范围内,线性关系良好,r=0.9999;检测限为0.02 mg/ml;加样回收率平均为101.28%,RSD为0.58%。【结论】分析方法可行,准确度高,此法可用于醋酸奥曲肽中奥曲肽含量的测定。

不同程度胎儿窒息时脐动脉血三种内源性阿片肽含量的变化

内源性阿片肽是机体一类重要的介质与调质，参与机体多种生理和病理过程。近年来，内源性阿片肽在病理产科中的作用，特别是胎儿窒息时的作用，受到了广泛的重视。内源性阿片肽三个家族不同成员的作用也有所差别，在胎儿窒息时的作用及重要性也有所不同。

福林酚衍生法检测眼氨肽制剂的肽含量

目的:建立福林酚衍生法测定眼氨肽制剂中多肽含量的方法。方法:使用福林试剂衍生溶液中的多肽,衍生液采用紫外-可见分光光度仪650 nm处检测,以牛血清白蛋白为对照,标准曲线法计算。结果:线性范围0.0147～0.1325 mg/ml(r=0.9992),总回收率为98.3%,RSD为1.9%。结论:该方法操作简单,检测结果显示:多数样品中多肽含量较少。

我国不同地区高血压患者血浆神经肽含量变化的观察

神经肽是机体一类重要的神经递质或调质，在维护机体正常的内环境稳定中起重要作用，并参与了多种疾病的发生与发展；高血压病是一类原因尚不十分明确而导致的血压升高。内分泌系统功能的失调起了重要的作用。研究表明，神经肽在高血压的形成中有重要作用。

苯噁唑和狄普诺啡对大鼠血浆、垂体和下丘脑β-内啡肽含量的影响

采用放射免疫分析法测定在苯噁唑(Rx781094)+狄普诺啡(M5050)作用下,不同时间大鼠血浆、垂体和下丘脑中β-内啡肽(β-EP)的含量。结果显示:Rx781094+M5050可降低大鼠血浆、垂体和下丘脑β-EP含量,5min开始显著降低,10min时都降到最低点,分别是8.92ng/mL、131.43ng/mg和9.32ng/mg,60min时β-EP亦低于正常值,至120min时逐渐恢复正常。垂体β-EP含量在10min时与对照组比较有显著差异。提示:Rx781094+M5050能降低大鼠血浆、垂体、下丘脑中β-EP含量,可能是发挥催醒作用的机制之一。

辅酶Q_(10)对急性肝损伤还原型谷胱甘肽含量的影响

为了探索辅酶Q_(10)(CoQ_(10))对急性肝损伤的保护作用,本实验采用改良的Ellman's法测定用CoQ_(10)和生理盐水预处理再灌服超量醋氨酸(AAP)的小鼠肝脏还原型谷胱甘肽(GSH)含量.结果表明,CoQ_(10)高低剂量组肝脏GSH含量均较对照组高,其差异有极显著和显著性意义(P<0.01和P<0.05).说明CoQ_(10)减轻超量AAP对肝脏GSH的耗竭而发挥其对急性肝损伤的保护作用.

快速起搏心房对家兔心房NPR-A受体表达及心房钠尿肽含量的影响

[目的]建立家兔快速心房起搏模型,探讨快速心房起搏早期心房NPR-A受体表达水平及血浆中心房钠尿肽(ANP)含量的变化与心房颤动发生的关系.[方法]由右侧颈外静脉穿刺置入电极于右心房,以600次/min的频率诱导心房颤动,利用放射免疫分析技术和免疫组织化学方法观察起搏前、起搏8 h和假手术组血浆中ANP含量和心房NPR-A表达水平.[结果]起搏8 h组血浆中ANP含量与起搏前和假手术组相比明显升高,且心房NPR-A表达水平明显增高.[结论]在快速起搏早期,血浆中ANP含量和心房NPR-A受体表达水平均升高,其主要机制可能是心房颤动早期代偿性和保护性效应.

肝龙胶囊中总肽含量及其分子量分布的研究

目的：建立高效空间排阻色谱（ high performance size exclusion chromatography，HPSEC）分析方法，测定肝龙胶囊中分子量分布并采用Lowry法测定其总肽含量。方法采用superdex peptide 10／300 GL（10 mm ×300 mm）色谱柱，以pH＝6．0、0．05 mol／L的磷酸盐缓冲液为流动相，其中含有0．1 mol／L的NaCl；流速为0．7 mL／min；柱温25℃；检测波长214 nm。结果总肽含量测定的线性范围为0．08～0．4 mg，r＝0．9996；含量精密度试验的RSD为0％（n＝6），重复性试验的RSD为1．1％（n＝6）。标准物质分子量的回归方程为logMr ＝5．1455－0．0871tR，r＝0．9983，分子量的线性范围为2．68×102～5．73×103 Da，分子量精密度试验 RCD为0．08％，重复性试验RSD为1．3％。结论该方法准确、简便、快速，可作为肝龙胶囊的质量控制方法。

花生蛋白多肽饮料肽含量测定重复性差原因研究

对经TCA沉淀、用双缩脲法测定花生蛋白多肽饮料中肽含量重复性差原因进行研究,从沉淀时间、TCA浓度及与样品体积比、离心速度和时间、放置时间、显色时间及反应体系pH几方面因素进行探讨。研究表明,处理液中TCA浓度在0.30 mol/L^0.43 mol/L范围内,沉淀和放置时间对肽含量不具有显著性影响;在11 000 r/min,10 min下离心,静置30 min,与双缩脲1∶3反应,肽含量稳定。