肽图法对细胞色素C中铂修饰位点研究

生物体系电子转移反应的研究是当今生物无机化学的一个热点,许多重要的生命过程如光合作用、呼吸链氧化磷酸化等均涉及电子转移。电子转移反应速率受驱动力、电子给体与受体之间的距离以及传递介质等因素的影响。

液相肽图法推断聚乙二醇化重组人生长激素的聚乙二醇修饰位点研究

目的利用液相肽图法对聚乙二醇(PEG)化重组人生长激素(rhGC)(PEG-rhGH)的聚乙二醇修饰位点进行测定。方法通过优化酶切条件,建立肽段分离度高、信息完整的液相肽图方法。继而通过引入高分辨率质谱,对重组人生长激素的液相肽图准确定性。最后通过比较发生改变的修饰前后的肽段,推断聚乙二醇的修饰位点。结果 3个厂家的聚乙二醇化重组人生长激素中发生较为明显修饰的肽段有5个,分别为T1(N-end)、T4(lys38)、T13(lys140)、T14(lys145)及T15(lys158)。结论液相肽图法可用于对结构复杂、不均一性较高的多位点异构体聚乙二醇修饰药物的位点测定。

阿胶质量评价研究进展

阿胶作为我国传统的补益药,近年来需求剧增,其质量问题长期受到关注。阿胶主要原料驴皮与近缘动物皮成分相似,缺乏专属性鉴别成分,鉴别难度大,阿胶的质量评价研究长期以来都是难点和热点。本文综述了近年来阿胶的质量评价方法,认为肽图法、分子鉴定法是目前比较有效的鉴别方法,而现有定量分析方法仍有较大缺陷,基于此,下一步应进一步挖掘阿胶质量标志物特别是多肽进行定量分析,并结合药效进行有效性评价,同时做好阿胶各个生产环节的质量监控和标准化,进一步完善阿胶质量评价方法。

LC-MS分析艾塞那肽的肽图

目的用液质联用技术(LC-MS)分析艾塞那肽的肽图。方法用胰蛋白酶切RP-HPLC肽图法测定艾塞那肽肽图,用ESI-LC/MS技术分析肽段的精确相对分子量。结果根据肽段的色谱保留时间、相对分子质量归属出肽图中各肽段所在的色谱峰。结论LC-MS是验证和分析蛋白质结构的高效准确方法。

重组抗埃博拉病毒单克隆抗体质控方法的建立

目的重组抗埃博拉病毒抗体是由3种抗埃博拉病毒包膜糖蛋白(GP)的单抗组成的复方抗体,本实验分别对3种重组单抗的质控方法进行研究。方法利用ELISA方法测定重组抗埃博拉病毒单抗的结合活性;利用LC-MS肽图法对其进行鉴别;CE-SDS和SE-HPLC测定纯度;i CIEF法测定等电点及电荷异质性;切糖后对N-糖进行2AB标记,用正向色谱结合质谱对其糖型和含岩藻糖修饰糖型比例分析;利用高效液相色谱法测定其聚山梨酯20含量。结果 3种重组抗埃博拉病毒单抗结合活性的EC50为(12.53±1.62)、(11.10±0.62)、(6.09±0.35)ng·m L^(-1);LC-MS肽图法测定一级序列覆盖率均大于95%;非还原CE-SDS主峰纯度分别为(94.41±0.05)%、(95.58±0.17)%、(96.11±0.05)%;还原CE-SDS重链和轻链纯度之和分别为(98.19±0.06)%、(97.97±0.03)%、(98.57±0.03)%;SE-HPLC主峰分别为(99.59±0.01)%、(99.56±0.01)%、(99.74±0.01)%;i CIEF分析主峰等电点为(8.70±0.01)、(8.26±0.01)、(8.85±0.01);3种单抗聚山梨酯20含量分别为(0.34±0.00)、(0.35±0.00)、(0.35±0.01)mg·m L^(-1);LC-MS对N糖谱分析相对灵敏,3种单抗含岩藻糖糖型比例均小于0.5%。结论本实验的质控方法研究运用了现代化质控理念,建立的质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为突发状况下埃博拉疫情防控提供了用药储备的技术支持,也为其他组合抗体的质量控制积累了经验。